CC BY
8
26
МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ
Другая 2D модель ангиогенеза — сокультивирование ЭК с клетками стабилизаторами — мезенхимными стро-мальными (МСК) на пластике, предварительно не покрытом белками ВМ. В данной модели источниками ВМ и ростовых факторов являются МСК. Помимо этого, и сами межклеточные взаимодействия ЭК и МСК могут вносить вклад в формирование КПС ЭК.
Целью работы было сравнительное изучение профилей экспрессии ряда генов в ЭК, вовлеченных в процесс ангиогенеза в разных моделях: ЭК, формирующие КПС на Матригеле, ЭК в ко-культуре с МСК, ЭК в конфлюэнт-ном монослое и делящиеся/мигрирующие ЭК.
Нормировку полученных данных проводили к ЭК в конфлюэнтном монослое.
Мы обнаружили, что:
1) Анализ экспрессионного профиля ЭК с помощью программы Heatmapper показал, что в ЭК на Матригеле по отношению к ЭК в ко-культуре и делящимся/мигрирующим ЭК активировались разные кластеры генов. Данные различия затрагивают гены межклеточных контактов, в том числе Notch и эфриновую сигнализацию.
2) В ЭК на модели Матригеля, в кокультуре и делящимися/мигрирующими ЭК апрегулировалось 4 общих гена: PLAU, PLAUR, JAG1 and NOTCH2.
3) Гены, ассоциированные с EndMT апрегулирова-лись как на Матригеле, так и в ко-культуре, причем в ко-культуре апрегуляция являлась более выраженной.
4) В ко-культуре происходила активная экспрессия белков ВМ, причем это происходило и в ЭК и в МСК. Более того, экспрессия коллагена1 в ЭК при этом возрастала более чем в 77 тысяч раз.
5) На Матригеле повышалась экспрессия эфри-новых лигандов EFNA3, EFNA5, EFNB2, EFNB3 и рецепторов EPHB4, EPHB6. В делящихся/мигрирующих ЭК происходила даунрегуляция генов почти всех ли-гандов и рецепторов, а увеличение отмечалось только для рецептора EPHA2. В ЭК в ко-культуре происходила даунрегуляция генов лигандов EFNA1, EFNB1, EFNB2, EFNB3 и рецептора EPHB4, а также апрегуляция генов рецепторов EPHA2, EPHB1.
6) Даунрегуляция генов CCN1 и CCN2 в ЭК на Матригеле говорит об активации сигнального пути Hippo, в то время как в делящихся/мигрирующих ЭК данный путь не активен.
7) В ЭК на Маригеле происходила апрегуляция всех лигандов и рецепторов Notch, и активация сигнализации Notch. В кокультуре происходила апрегуляция JAG1, JAG2, NOTCH2 и даунрегуляция DLL1 и DLL2 и подавление сигнализации.
Мы можем заключить, что 2Д модели ангиогенеза in vitro на Матригеле и в ко-культуре отражают различные стадии ангиогенеза.
Работа выполнена при финансовой поддержке гранта РНФ № 21-15-00327.
СИНТЕЗ И ОФОРМЛЕНИЕ КОЛЛАГЕНОВОГО ВОЛОКНА В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК ЖИРОВОЙ ТКАНИ КРЫС
М.Б. Белякова, Н.В. Костюк, М.В. Черноруцкий, Д.В. Лещенко, М.В. Миняев
ФГБОУ ВО Тверской государственный медицинский университет Минздрава РФ, Тверь, Россия
e-mail: mayabe@yandex.ru
Ключевые слова: жировая ткань, мезенхимные стромаль-ные клетки, коллагеновые волокна в культуре.
Сборка коллагена определяется контактами фибрилл с поверхностью фибробласта, и пространственное расположение клетки является обуславливающим в ориентации пучков, что, несомненно, сказывается на особенностях коллагенового матрикса, получаемого при культивировании фибробластов различного происхождения. В данной работе изучалась динамика формирования коллагена, создаваемого в донной культуре клетками жировой ткани, при стимуляции коллагеногенеза бычьей сывороткой и аскорбатом. Целью работы было выявить возможности фибриллогенеза клетками жировой ткани при донном культивировании различной длительности в условиях, предпочтительных для фибробластов.
В эксперименте использовались клетки жировых экс-плантов крыс, культивированные в среде ОМЕМ с высокой глюкозой, аскорбатом и 10%-й бычьей сывороткой без пересева в течении 4-16 недель. Контрольные чашки в первую неделю культивирования стимулировались фетальной сывороткой и/или содержались без аскор-бата. Фотодокументирование формирования коллагена проводилось при фазовой микроскопии живых культур и с окраской по Ван-Гизону или Маллори.
Фибробластоподобная морфология культур мезенхим-ных стромальных клеток достаточно легко возникает при пересевах, и при уплотнении застила такие клетки не удается снять с помощью трипсина, однако это становится возможным благодаря применению коллагеназы. Если клетки не пассировались больше двух недель, многие из них при такой дезагрегации сохраняли вытянутую форму и сходили с подложки с элементами созданного ими матрикса. При старении культуры без пересева до 101 6 недель наблюдался апоптоз клеток, с сохранением визуализировавшихся при фазово-контрастном микро-скопировании и гистологически окрашивавшихся колла-геновых волокон. Необходимо отметить, что аскорбат без какой-либо иной стимуляции столь значительно усиливал коллагеногенез и фибриллогенез, что за 60 дней появлялись оформленные волокна длиной 300-500 мкм.
При использовании бычьей сыворотки и стеклянного культурального сосуда возможно целевое получение кол-лагенового матрикса слоистой архитектуры, образованного культурой мезенхимных клеток.
ЭКСПРЕССИЯ ФАКТОРА НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ АЛЬФА КОНСТИТУТИВНО УВЕЛИЧИВАЕТСЯ В КОСТЯХ СУБЛЕТАЛЬНО ОБЛУЧЕННЫХ МЫШЕЙ
А.Е. Бигильдеев1, Д.М. Карпенко1, А.В. Садовская1, 2, А.И. Дорофеева1
1 ФГБУ НМИЦ гематологии Минздрава России, Москва, Россия
2 Биологический факультет, Кафедра иммунологии МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
e-mail: bigildeev.ae@gmail.com
Ключевые слова: ФНОа, ИЛ-1 ß, облучение, фактор роста стромы, NF-kB, кости, индукция экспрессии.
Облучение мышей в сублетальной дозе радиации приводит к повышенному уровню интерлейкина-1 бета (ИЛ-1 ß) в крови, который остается повышенным не только в острую фазу после облучения, но и позднее, неопределенно долго. Мы также установили, что ИЛ-1 ß — ростовой фактор для стромальных клеток-предшественниц костного мозга. При сингенной имплантации костного мозга под капсулу почки облученных мышей в месте операции образуется очаг
Гены & Клетки XVII, №3, 2022
