CC BY
103
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ БЛОКИРОВАНИЕ NOTCH... 3
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
УДК 616-006.81:612.181
А.А. Вартанян, И.Н. Григорьева, В.С. Домбровский, Е.В.Степанова, А.Ю. Барышников БЛОКИРОВАНИЕ NOTCH СИГНАЛЬНОГО ПУТИ
СТАБИЛИЗИРУЕТ ВАСКУЛОГЕННУЮ МИМИКРИЮ ПРИ МЕЛАНОМЕ
ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» РАМН, Москва
Контактная информация
Вартанян Амалия Арташевна, канд. биол. наук, старший научный сотрудник лаборатории биомаркеров и механизмов опухолевого ангиогенеза НИИ ЭДиТО адрес: 115478, Москва, Каширское ш. 24; тел. +7(499)342-10-65 e-mail: zhivotov57 @mail.ru
Статья поступила 28.02.2012; принята к печати 31.08.2012.
Резюме
Активация Notch сигнального пути необходима для запуска ангиогенеза опухоли. Исследования последних лет указывают на то, что Notch сигнальный путь способствует также прогрессии первичных меланом в более агрессивный фенотип. Целью данной работы явилось исследование вовлечения Notch сигнального пути в становление ВМ при меланоме. На начальном этапе работы мы показывали, что белки Notch сигнального каскада активно экспрессируются в клетках меланомы, выведенных в клеточные линии из опухолевого материала больных диссеминированной меланомой. Блокирование Notch сигнального пути ингибиторами у-секретазы DAPT, BZ или нейтрализирующими антителами к лиганду Jagged 1 стабилизировало СПС на Матригеле. Полученные in vitro данные были подтверждены в экспериментальной модели меланомы в бестимусных мышах. По сравнению с контролем ВМ каналы в опухолях, леченых DAPT, были более разветвленными и шире диаметром. Наблюдалась также высокая экспрессия MMP-2 и VEGFR1 - медиаторов ВМ. Более того, зоны некроза в областях опухоли, где присутствовали ВМ-каналы, не обнаружены. Приведенные данные указывают на то, что ВМ может представить новый терапевтический подход к лечению меланомы.
Ключевые слова: васкулогенная мимикрия, меланома, Notch сигнальный путь.
A.А. Vartanian, I.N. Grigorieva, V.S. Dombrovsky, E.V. Stepanova, A.Yu. Baryshnikov
DISRUPTION OF NOTCH SIGNALLING
STABILIZES MELANOMA VASCULOGENIC MIMICRY
FSBI «N.N. Blokhin RCRC» RAMS, Moscow
Abstract
Notch signaling plays an important role in tumor angiogenesis. Recent studies suggest that Notch signaling also regulates the progression of primary melanomas towards an aggressive phenotype. The aim of this study was to investigate the involvement of Notch signaling pathway in organization of tumor cells into capillary-like structures (CLS), the phenomenon also known as VM. Here, we show that Notch signaling cascade was constitutively active in melanoma cell lines we used. Blocking Notch signaling with the y-secretase inhibitors, DAPT, dibenzazepine or Jaggedl neutralizing antibody resulted in stabilization of CLS indicating that Notch signaling pathway attenuates melanoma VM. We further studied this phenomenon on melanomas grafted in nude mice. Compared to control, VM channels in DAPT-treated grafted melanoma became larger and more branched. DAPT-treated melanomas also exhibited an up-regulation of MMP-2 and VEGFR1, both known as VM mediators. Moreover, we did not observe necrosis in VM channels areas of DAPT-treated melanomas. These findings indicate that VM regulated by Notch signaling may present a novel target in melanoma therapy.
Key words: vasculogenic mimicry, notch signaling, melanoma.
Введение
Антиангиогенная терапия опухоли базируется на ингибировании роста микрососудов [5; 12]. В предклинических исследованиях in vitro и in vivo выявлены более сотни различных ингибиторов ангиогенеза, и их количество продолжает расти. Но только несколько препаратов - ингибиторов VEGF рецептор-лигандной системы (Авастин, Сунитиниб и др.) одобрены для клинического применения при колоректальном раке, светлоклеточном раке почки, гепатоцеллюлярной карциноме, раке молочной железы [23]. Однако, как показали клинические ис-
следования, к антиангиогеннои терапии возникает резистентность. Более того, большинство опухолей практически не отвечают на эту терапию [7; 25]. И хотя этому есть ряд разумных объяснений, гетерогенность васкулярных сосудов может быть одной из причин выживаемости опухолевых клеток: в васкуляризации опухоли традиционный ангиогенез идет параллельно с формированием васкулярных каналов из опухолевых клеток [4]. Эти высокоструктурированные васкулярные каналы формируются метастатическими опухолевыми клетками и ограничены базальной мембраной. Образование микроваскулярной сети агрессивными опухолевы-
ми клетками получило название «васкулогенная мимикрия», тем самым подчеркивается образование таких каналов de novo, без участия ЭК, т.е. независимо от ангиогенеза. Функциональное значение ВМ, несмотря на возрастающий интерес к этой проблеме, остается невыясненным. Вероятно, образование такого рода каналов внутри опухоли может частично нейтрализовать отсутствие питания и предотвратить ранний некроз. Высокая статистическая корреляция между способностью опухоли к ВМ и частотой метастазирования опухоли подтверждает эту гипотезу [22].
Notch сигнальный путь - высоко консервативный внутриклеточный сигнальный путь, который активируется при взаимодействии трансмембранного лиганда семейства Jagged (Jagged 1 и 2) и семейства Delta (Delta-like 1; 3 и 4) с Notch рецепторами (Notch1-4) [24]. После связывания рецептор-лиганд Notch рецептор активируется протеоли-тическим расщеплением внутриклеточного домена, который мигрирует в ядро и, образуя комплекс с ДНК, выполняет функцию транскрипционного фактора и участвует в экспрессии генов Hesl и Hes5, а также Heyl и Hey2 [3]. Накоплен достаточно большой клинический материал, указывающий на то, что дерегуляция Notch сигнального пути вовлекается в становление глиомы, рака молочной железы, рака поджелудочной железы, колоректального рака и различных гематопоэтических новообразований [1; 9; 16; 26].
Роль Notch сигнального пути при меланоме практически не изучена. Исследования последних лет указывают лишь на то, что экспрессия Notch-1 и Notch-2 рецепторов, a также Notch лиганда активирована в диспластических невусах (dysplastic nevi) и меланоме по сравнению с родимыми пятнами (melanocytic nevi), т.е. активация Notch сигнального пути служит триггером для прогрессии меланомы в более агрессивный фенотип [18]. С другой стороны, экспрессия Notch рецепторов и их лигандов наблюдается также и на ЭК [13]. Ингибирование этого сигнального пути в эндотелии способствует непродуктивному ангиогенезу, снижая, тем самым, рост опухоли [2].
Два независимых наблюдения привели нас к изучению роли Notch сигнального пути в становлении ВМ при меланоме:
1. Активация Notch сигнального пути в меланоме переводит ее в более агрессивный фенотип, а это является необходимым условием для формирования васкулярных каналов из опухолевых клеток.
2. Следствием подобной активаций является антиангиогенный эффект.
Полученные нами результаты указывают на то, что компоненты Notch сигнального пути экспрессируются и активны в клетках меланомы, которые мы использовали, и что блокирование Notch сигнального пути стабилизирует СПС in vitro и увеличивает ВМ в ксенографтах мыши. Мы предполагаем, что регуляция ВМ модулированием Notch сигнального пути может представить новый терапевтический подход к лечению меланомы.
Материалы и методы
Материалы
Кит для PAS-окрашивания (Sigma-Aldrich Company, St Louis, USA). Мтригель (Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ, USA). Moноклональные анти-Laminin (клон 4C7) aнтитела (DAKO A/S, Glostrup,
Denmark). Лнти-^ЛеЫ моноклональные антитела (NOVUS Biologicals Inc.,Littleton, USA). Анти-^^, -3,-4 поликлональные антитела, анти-Jagged-1 поликлональные, anti-Dll4 поликлональные и анти-MMP-2 поликлональные антитела (Abcam (Cambridge, UK), анти-Jagged-2 поликлональные и анти-VEGFR1 поликлональные антитела (Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, USA). Анти-Иет! поликлональные и анти-Hey1 поликлональные антитела (Abnova Corporation, Taipei, Taiwan). DAPT и BZ (Calbiochem, Darmstadt, Germany).
Культура клеток
В работе использованы три клеточные линии Mel Kor, Mel P и Mel Cher [19; 20; 27]. Клетки растили в полной среде RPMI-1640, содержащей 10% ТЭЗ, 2mM/^ глутамина и 0,1мг/мл гентамицина. В экспериментах использовали клетки 70-75% кон-флюентности.
3D культура
100 ці матригеля (8,7 mg/ml) быстро наносился на дно 24-луночной планшеты на льду, планшет оставляли при комнатной температуре в течение часа и затем помещали в CO2 инкубатор5 на 30 мин. Клетки добавляли в количестве 2 х 10 на лунку в полной среде RPMI-1640 и продолжали инкубировать при 37 °C в течение 14-16 ч.
Ингибирование Notch сигнального пути
Notch сигнальный путь ингибировали DAPT (1-25 ^M) или BZ (0,1-2,0 ^M). Клетки инкубировали в полной среде RPMI-1640 с различными концентрациями указанных ингибиторов в течение 1024 ч. Контрольные клетки получали 0,1% ДМСО. Для ингибирования этого сигнального пути нами были также использованы антиi-Jagged-1 (5 ^g/ml) нейтрализующие антитела.
Иммуногистохимия
Иммуногистохимический анализ проводили на срезах с парафиновых блоков опухолей по стандартной методике [8].
Гистохимия
Гистохимическое окрашивание неваскулярных структур проводили как описано в [8].
Вестерн блот анализ
PAGE-SDS электрофорез с последующим переносом белков на мембрану и их окрашиванием проводили как описано в [8].
Имплантация опухоли
Клетки метастатической меланомы кожи Mel Cher перевивались иммунодефицитным мышам 6-8 недель подкожно в количестве 5 млн. клеток на мышь. Иммунодефицитные мыши были разделены на 3 группы по 6 особей в каждой. DAPT в дозе 3 или 20 мг/кг веса вносили внутрибрюшинно один раз в день в течение 19 дней, начиная со второго дня после имплантации опухоли. Контрольные мыши получали ФСБ с 10% ДМСО по той же схеме. Динамика роста перевиваемых опухолей оценивалась каждые 3 дня, начиная с 7 дня после перевивки. Размеры опухоли определяли как отношение ширины к длине и умножали на половину ширины. На 21 день мышей забивали, удаляли опухоль, фиксировали 4%-ным параформальдегидом (рН 7,2) и заключали в парафин. Слайды разрезались шириной 5 мкм. Плотность сосудов определяли окрашиванием срезов на CD31. Для визуализации неваскулярных каналов использовали PАS-окрашивание.
Плотность PAS-положительных структур определялась по интенсивности красной краски по программе «NIS Elements» (version 2.32, Nikon Instruments, Melville, N.Y., USA). Слайды окрашивались также антителами к ламинину, обязательному компоненту базальной мембраны васкулярных каналов, формированных опухолевыми клетками.
Статистический анализ Student’s /-test был использован для статистической обработки результатов. Значения Р < 0,05 считали статистически достоверными.
Результаты и обсуждение
Иммуноцитохимическое исследование экспрессии молекул Notch сигнального пути в клетках меланомы Иммуноцитохимический анализ панели клеточных линий Mel Cher, Mel Kor и Mel P был использован для оценки экспрессии компонентов Notch каскада. Экспрессия Notchl и Dlll не определялась во все трех клеточных линиях. Экспрессия Jagged2 и Dll4 была слабо выраженной. Однако мы заметили высокую интенсивность для Notch3, Notch4 и Jaggedl в Mel Cher и Mel Kor клетках. Notch3 активно экспрессировалась в цитоплазме и ядрах клеток, однако Notch4 и Jaggedl обнаруживались только в цитоплазме. В цитоплазме Mel Cher и Mel Kor клеток экспрессия Notch2 была средней интенсивности. Экспрессия Notch2 и Notch4 была несколько снижена в Mel P клетках по сравнению с Mel Cher клетками. Поскольку все эти три клеточные линии формировали СПС на Матри-геле [8], мы предполагаем, что экспрессии Notch2 и Notch4 не столь необходимы для вовлечения клеток в ВМ. Результаты иммуноцитохимических исследований представлены в таблице.
Влияние ингибирования Notch сигнального пути на формирование СПС
За последние пять лет накоплен достаточно большой объем экспериментальных данных, указывающих на то, что активный Notch сигнальный путь останавливает пролиферацию ЭК, способствуя их дифференцировке [14]. Основываясь на этих данных, мы предположили, что ингибирование Notch сигнального пути, который будет ингибировать также и ангиогенез, может вовлекаться в организацию опухолевых клеток в СПС. Активация Notch сигнального пути напрямую зависит от функционального состояния у-секретазы, фермента, который разрезает внутриклеточный домен Notch рецептора, способствуя его транслокации в ядро. Экспрессия Hes-1, транскрипционного фактора, находящегося под контролем Notch сигнального пути, значительно снижалась, когда клетки инкубировали с ингибитором у-секретазы, DAPT (рис. 1, A1). Эти результаты были подтверждены использованием другого ингибитора Notch сигнального пути. Как и ожидалось, BZ снижал экспрессию Hesl (рис 1, A1). Исследовали экспрессию и другого транскрипционного фактора, тоже находящегося под контролем Notch сигнального пути, Hey1. Уровень Hey1 был изначально выше по сравнению с Hes1, и его экспрессия практически не менялась в ответ на ДАРТ (рис.1, A3), что указывало на то, что Hey1 скорее является маркером агрессивности опухоли и в BM не вовлекается. Таким образом, полученные нами результаты указывают на то, что Notch сигнальный путь активирован в метастатических клетках меланомы.
Далее мы исследовали влияние ингибирования Notch сигнального пути на формирование СПС. Надо отметить, что эти структуры стабильны в течение 20-24 ч после посева клеток на матрикс, затем клетки становятся круглыми, теряя связь клетка - клетка и клетка - внеклеточный матрикс, и BZ СПС разрушаются. Низкие концентрации DAPT (ниже 2 цМ) не оказывали никакого влияния на структуру СПС. Когда же клетки росли на Матри-геле в присутствии 20 цМ DAPT, спонтанное разрушение клеточных контактов происходило в течение 32-36 ч (рис 1, B-C, F-G), указывая на то, что Notch сигнальный путь регулирует целостность СПС. Для подтверждения этого феномена Mel Cher клетки сажали на Матригель в присутствие другого ингибитора у-секретазы, BZ. СПС также были стабильны в течение 32-36 ч (рис. 1, D, H).
Эти результаты были верифицированы блокированием связывания лиганд-рецептор. Анти-Jaggedl нейтрализирующие антитела также стабилизировали СПС (Рис. 1, E). Этот эффект воспроизводился и на двух других клеточных линиях. Так, селективный разрыв Notch сигнального пути ведет к стабилизации СПС.
DAPT изменяет васкуляризцию опухоли
В развитии меланомы различают две фазы: горизонтальную и вертикальную фазу роста, когда клетки меланомы приобретают способность проникать через дермальный слой и базальную мембрану в окружающую соединительную ткань и кровеносные сосуды [15]. Вертикальная фаза роста характеризуется быстрым ростом опухоли и склонна к метаста-зированию. Каналы ВМ в опухоли появляются при переходе ее в вертикальную фазу роста [10]. Нами ранее была разработана методика роста человеческой меланомы на бестимусных мышах и для подтверждения полученных нами in vitro данных мы исследовали влияние DAPT на рост опухоли и ее васкуляризацию в экспериментальной модели меланомы. DAPT вводили внутрибрюшинно в дозе 3 и 20 мг/кг. Анализ ксенографтов показал, что плотность сосудов (MVD) в леченых 20 мг/кг DAPT ксено-графтах снижена по сравнению с контролем (6,37 ±
1,84 против 9,60 ± 2,9 (SE) микрососудов), что хорошо согласуется с литературными данными о способности DAPT снижать кровоснабжение опухоли [17; 29]. Доза 3 мг/кг DAPT не влияла на васкуляри-зацию опухоли. Окрашивание срезов на присутствие ламинина, белка внеклеточного матрикса, который является необходимым компонентом тубулярных структур [2], показало, что васкулярные каналы, сформированные опухолевыми клетками стали шире в диаметре и более разветвленными (рис. 2, A, D). Окрашивание срезов реагентом PAS подтвердило эти наблюдения (рис. 2, C, E). Особо следует отметить, что плотность кровеносных сосудов была значительно ниже в PAS-положительных зонах опухоли (P=0,039), что подтверждало ранее высказанную гипотезу о роли ВМ как компенсаторного механизма кровоснабжения опухоли. Гистологический анализ опухоли показал большие зоны некроза в DAPT-леченых ксенографтах (рис. 2, B). И совершенно неожиданным оказался тот факт, что в тех областях опухоли, где наблюдалась высокая плотность ВМ-каналов, отсутствовал некроз.
Недавно было высказано предположение, что антиангиогенная терапия опухоли переводит опухоль в более агрессивную фазу роста, которая характеризуется увеличением инвазии и метастази-рования [21].
6 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ БЛОКИРОВАНИЕ NOTCH...
Таблица
Экспрессия компонентов Notch сигнального каскада в клетках меланомы
Клеточная линия Notch сигнальные молекулы
Mel Cher Notchl Notch2 Notch3 Notch4 Jagged1 Jagged2 Dll1 Dll4
- ++ +++ +++ +++ + - +
Mel Kor - ++ +++ +++ +++ + - +
Mel P - + +++ ++ +++ + - -
Интенсивность Notch сигнальных молекул оценивали как +++, ++ или + по мере снижения интенсивности окраски.
В результате антиангиогенной терапии высоко агрессивные опухолевые клетки приобретают эндоте-лий-подобные характеристики ВМ и уже ВМ позволяет опухоли выжить, предоставляя питание и кислород в области опухоли с выраженной гипоксией. Наши данные являются первым экспериментальным подтверждением гипотезы, что в условиях подавления ангиогенеза, опухоль прибегает к альтернативной васкуляри-зации, независимой от эндотелия. Для выяснения возможных механизмов активации ВМ в ксенографтах в ответ на DAPT мы окрашивали срезы на MMP-2 и VEGFR1, белки, идентифицированные ранее как медиаторы ВМ. Было показано недавно, что MMP-2 участвует в расщепление 5у2-цепи ламинина во фрагмент, необходимый для формирования ВM-каналов [11]. Рис.
3, A, C демонстрирует, что уровень MMP-2 значительно выше в ксенографтах, леченых DAPT, чем в контроле. Мы также исследовали влияние блокирования Notch сигнального пути на экспрессию VEGFR1, недавно идентифицированный нами и другими как мессенджер ВM [6; 28]. Уровень мембранного VEGFR1 в DAPT-леченых опухолях был также значительно выше, чем в контроле (рис. 3, B, D). Рост опухоли после 21 дня лечения 20 мг/кг DAPT снижался незначительно (см. рис.2, F) по сравнению с контролем (0,508 ± 0,18 g (SE), P=0,02 против 0,315 ± 0,052 g (P=0,01)). Эти результаты согласуются с литературными данными о влиянии DAPT на рост опухоли [17; 29].
Литература
Зaключение
Полученные нами данные указывают на то, что Notch сигнальный путь активен в клетках метастатической меланомы, которые мы использовали, и ингибирование Notch сигнального пути стабилизирует СПС in vitro и увеличивает ВМ в экспериментальной модели опухоли на бести-мусных мышах.
Мы также показали, что активация процесса формирования ВМ-каналов является следствием апрегуляции VEGFR1 и MMP-2, белков известных как триггеры ВМ.
Более того мы не обнаружили зоны некроза в PAS-положительных областях опухоли, что свидетельствует о том, ВМ-каналы являются функционально активными и поддерживают рост опухоли.
Таким образом, суммируя полученные нами in vitro и in vivo данные, мы предполагаем, что ингибирование Notch сигнального пути, который является по сути антиангиогенным воздействием, запускает васкуляризацию опухоли, независимую от эндотелиума, ВМ.
Полученный нами впервые экспериментальный материал позволяет предложить в качестве нового терапевтического подхода к лечению меланомы комбинирование антиангиогенной терапии с анти-ВМ препаратами.
1. Aster J.C., Blacklow S.C., Pear W.S. Notch signalling in T-cell lymphoblastic leukaemia/lymphoma and other haematological malignancies // J Pathol. - 2011. -223(2. - P. 262-73.
2. Cristofaro B., Emanueli C. Possible novel targets for theraupetic angiogenesis // Curr Opin Pharmacol. -2009. - 9(2). - P. 102-8.
3. Eiken H.M., Adams R.M. Dynamics of endothelial cell behaviour in sprouting angiogenesis // Curr Opin cell Biol. - 2010. - 22(5). - P. 617-25.
4. Fan Y.Z., Sun W. Molecular regulation of vasculogenic mimicry in tumours and potential tumor-target therapy // World J Gastrointest Surg. - 2010. - 2(4). - P. 117-24.
5. Feige J.J. Tumour angiogenesis: recent progress and remaining challenges // Bull Cancer. - 2010. - 97(11).
- P. 1305-10.
6. Frank N.Y., Schatton T., Kim S. et al. VEGFR1 expressed by malignant melanoma-initiating cells is required for tumor growth // Cancer Res. - 2011. - 71(4). - P. 1474-85.
7. Gerger A., LaBonte M., Lenz H.L. Molecular predictors of response to antiangiogenesis therapies // Cancer J. - 2011. - 17(2). - P. 134-41.
8. Gridley T. Notch signalling in the vasculature // Curr Top Dev Biol. - 2010. - 92. - P. 277-309.
9. Guo S., Liu M., Gouzalez-Perez R.R. Role of Notch and its oncogenic signaling crosstalk in breast cancer // Biochem Biophys Acta. - 2011. - 1815(2). - P. 197-213.
10. Helfrich E., Schadendorf D. Blood vessel maturation, vascular phenotype and angiogenic potential in malignant melanoma: One step forward for overcoming anti-angiogenic resistance? // Mol Oncol. - 2011. - 5.
- P. 137-49.
11. Hess A.R., Seftor E.A., Seftor R.E. et al. Phosphoinositide 3-kinase regulates membrane type 1-matrix metal-loproteinase (MMP) and MMP-2 activity during melanoma cell vasculogenic mimicry // Cancer Res. -2003. - 63. - P. 4757-62.
12. Hiratsuka S. Vasculogenesis, angiogenesis and special features of tumour blood vessels // Front Biosci. -2011. - 16. - P. 803-14.
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ БЛОКИРОВАНИЕ NOTCH...
13. Jabobsson L., Bentley K., Gerhardt U. VEGFRs and Notch: a dynamic collaboration in vascular patterning // Biochem Soc Trans. - 2009. - 37(pt6). - P. 216-33.
14. Kame T. Novel insights into the differentiatial funcrions of Notch ligands in vascular formation // J Angio-
genesi Res. - 2009. - 16. - P. 1-8.
15. Ko J.M, Verez N.F., Tsao H. Pathways to melanoma // Semin Cutan Med Surg. - 2010. - 29(4). - P. 210-7.
16. Koch U., Radtke F. Notch signaling in solid tumor // Curr Top Dev Biol. - 2010. - 92. - P. 367-409.
17. Luistro L., He W., Smith M. et al. Preclinical profile of a potent y-secretase inhibitor targeting Notch signalling with in vivo efficacy and pharmacodynamic properties // Cancer Res. - 2009. - 68(19). - P. 7672-80.
18. Massi D., Tarantini F., Franchi A. et al. Evidence for differential expression of Notch receptors and their ligands in melanocytic nevi and cutaneous malignant melanoma // Modern Pathol. - 2006. - 19. - P. 246-54.
19. Mikhailova I.N., Lukashina M.I., Baryshnikov A. Yu. et al. Melanoma cell lines as the basis for antitumor vaccine preparation // Vest Ross Akad Med Nauk. - 2005. - 7. - P. 37-40.
20. Mikhailova I.N., Kovalevsky D.A., Morozova L.F., et al. Cancer/testis genes expression in human melanoma cell lines // Mel Res. - 2008. - 18(5). - P. 303-13.
21. Paez-Ribes M., Allen E., Hudock J. et al. Antiangiogenic therapy elicits malignant progression of tumors to
increased local invasion and distant metastasis // Cancer Cell. - 2009. - 15. - P. 220-31.
22. Paulis Y.W., Soetekouw P.M., Verheul H.M. Signaling pathways in vasculogenic mimicry // Biochem Bio-phys Acta. - 2010. - 1806(1). - P. 18-28.
23. Quesada A.R., Medina M.A., Munoz-Chapuli R. et al. Do not say ever never more: the ins and outs of antiangiogenic therapies // Curr Pharm Des. - 2010. - 16(35). - P. 3932-57.
24. SchwanbeckR., Martini S., Bernoth K. et al. The Notch signalling pathway: Molecular basis of cell content dependency // Eur J Cell Biol. - 2011. - 90(6-7). - P. 572-81.
25. Sharma P.S., Sharma R., Tyagi T. VEGF/VEGFR pathway inhibitors as anti-angiogenic agents: Present and Future. - 2011. - 11(5). - P. 624-33.
26. Sjolund J., Johanson M., Manna S. et al. Suppression of renal cell carcinoma growth by inhibition of Notch signalling in vitro and in vivo // J Clin Invest. - 2008. - 118(1). - P. 217-28.
27. Vartanian A., Burova O., Stepanova E. et al., The involvement of apoptosis in melanoma vasculogenic
mimicry // Mel Res. - 2007. - 17. - P. 1-8.
28. Vartanian A., Stepanova E., Grigorieva I. et al. VEGFR1 and PKCalpha signalling control melanoma vasculogenic mimicry in a VEGFR2 kinase-independent manner // Mel Res. - 2011. - 21(2). - P. 91-8.
29. Yan M., Plowman G.B. Delta-like 4/Notch signalling and its theraupetic implications // Cancer Res. - 2007.
- 13(24). - P. 7243-6.
НАУЧНЫЕ ЖУРНАЛЫ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА РАМН
