CC BY
90
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ СПОСОБНОСТЬ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ... 97
УДК 616.5-006.81:616.16-092.4 И.Н. Григорьева, О.С. Бурова, Е.В. Степанова, Т.К. Харатишвили, А.Ю. Барышников СПОСОБНОСТЬ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ МЕТАСТАТИЧЕСКОЙ МЕЛАНОМЫ КОЖИ К ВАСКУЛОГЕННОЙ МИМИКРИИ
РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва
Контактная информация:
Григорьева Ирина Николаевна, научный сотрудник лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей адрес: 115478, Москва, Каширское шоссе, 24; тел. +7(495)324-10-65; e-mail: i.n.grigorieva@gmail. com
Статья поступила: 10.09.2010, принята к печати 16.09.2010.
Резюме
Целью данной работы являлось изучение способности клеточных линий метастатической меланомы кожи к васкулогенной мимикрии (ВМ) in vitro и in vivo. Опухолевые клетки, выделенные из различных метастатических меланом кожи, проявляли свойства эндотелиальных клеток (ЭК): они были способны воспроизводить in vitro их функциональные свойства (формировать сосудисто-подобные структуры) и экспрессировать характерные для них маркеры. Способность к ВМ также сохранялась при имплантации опухолевых клеток иммуно-дефицитным мышам. Проявленные свойства позволяют использовать клеточную линию метастатической меланомы кожи человек mel Cher в качестве положительной модели для изучения механизмов ВМ и скрининга противоопухолевых препаратов, способных ее блокировать in vitro и in vivo.
Ключевые слова: васкулогенная мимикрия, меланома кожи, экспериментальные модели.
I.N. Grigorieva, O.S. Burova, E.V. Stepanova, T.K. Kharatishvili, A.Yu. Baryshnikov ABILITY OF METASTATIC CUTANEOUS MELANOMA CELL LINES TO VASCULOGENIC MIMICRY
N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center of RAMS, Moscow Abstract
We have studied the ability of metastatic cutaneous melanoma cell lines to vasculogenic mimicry (VM) in vitro and in vivo. Our results showed that metastatic cutaneous melanoma cell lines could mimic endothelial cells behavior, form vessel-like structures and express endothelial cells markers. The presence of VM-structures was also shown for tumor cells implants in nude mice. Mel Cher metastatic cutaneous melanoma cell line could be used as the positive tumor model of vasculogenic mimicry. It is necessary for further studying of VM molecular pathways and cancer screening of VM inhibiting drugs in vitro and in vivo.
Key words: vasculogenic mimicry, cutaneous melanoma, experimental models.
Введение
В настоящее время идут активные исследования в области создания новых противоопухолевых средств с направленным механизмом действия (таргетных препаратов [3]). Отличительной особенностью таких лекарств является воздействие на определенный механизм прогрессии злокачественных опухолей через блокирование белка-мишени в опухолевых клетках.
После работ Фолкмана и Ауспрунка 1970 г., посвященных кровоснабжению опухолей, было введено определение ангиогенеза опухоли как формирования новых микрососудов из предсуще-ствующих в ткани капилляров [9]. С того самого времени начались исследования по поиску новых антиангиогенных противоопухолевых препаратов. Данный класс препаратов блокирует образование новых сосудов в опухоли и «нормализует» уже сформированную кровеносную сеть внутри опухолевой ткани [7]. В настоящее время в клинической практике используется Авастин (МКА к VEGF), Сутент (синтетический ингибитор тирозинкиназ-ных рецепторов VEGFR, PDGFR, с-KIT, RET, FLT3) и другие. Антиангиогенная терапия в сочетании с химиотерапией увеличивает эффективность лечения на 15-25% [14].
Однако исследования последних лет показывают, что ангиогенез не является единственным механизмом кровоснабжения опухоли [4]. ВМ - это способность высокоагрессивных опухолевых клеток образовывать без участия эндотелиальных клеток и фибробластов каналы, ограниченные базальной мембраной, по которым может осуществляться кровоток [4]. Этот новый тип васкуляризации опухоли был открыт сравнительно недавно - в 1999 году [6; 12], и некоторые исследователи сомневаются в существовании этого процесса [13]. Наличие ВМ в ткани опухоли рассматривается как неблагоприятный фактор прогноза течения некоторых типов злокачественных опухолей. Выявлена высокая корреляция между способностью к ВМ и частотой метастазирования первичных меланом кожи и глаз [19].
Предполагается, что одним из возможных механизмов резистентности к антиангиогенной терапии может быть появление компонента ВМ. Так, в экспериментах in vivo было показано, что при длительном введении ангиостатина, природного ингибитора ангиогенеза, у некоторых мышей возникала резистентность к проводимому лечению [8]. Гистологический анализ образцов опухолей, нечувствительных к действию препарата, показал, что в этих опухолях, в отличие от чувствительных, присутствует компонент ВМ.
В связи с этим необходимость изучения механизмов данного процесса и создание нового направления лечения опухолей, направленного не ее блокирование, являются актуальными.
Целью настоящей работы являлось определение способности клеточных линий метастатической меланомы кожи человека к васкулогенной мимикрии in vitro и in vivo. Также наряду с процессом ВМ была изучена экспрессия различными клеточными линиями меланомы молекулярно-биологических маркеров, характерных для ЭК.
Материалы и методы
Исследование проводилось на клеточных линиях метастатической меланомы кожи, полученных от пациентов, находившихся на лечении в НИИ КО: mel Cher, mel P, mel Mtp, mel Ibr, mel Ksen, mel Kor, mel Gus, mel R, mel Me, mel Ch, mel
Il, mel Ml, mel Si, mel BGF, mel RZ84 [2]. Клеточные линии культивировались во флаконах (Costar) объемом 25 смЗ в среде RPMI-l640, содержащей 1О% телячьей эмбриональной сыворотки, 2 мМ L-глутамина, 1 пенициллина (1ОО ед/мл) и стрептомицина (1ОО мкг/мл).
Формирование
сосудисто-подобных структур in vitro
Формирование сосудисто-подобных структур (СПС) оценивалось при инкубации опухолевых клеток на матриксе базальных мембран Матригеле (BD Bioscience). Холодный Матригель наносился на дно лунок 48-луночного планшета, полимеризация геля проводилась при З7 °С в течение 2О минут. Клетки наносились в количестве 1ОО ООО на лунку в полной среде RPMI-1640. Результаты оценивались через 16 и 24 ч. Эксперименты повторялись не менее З раз в дуплетах.
Формирование
тубулярных структур in vitro
Формирование тубулярных структур оценивалось при инкубации опухолевых клеток на матриксе базальных мембран Матригеле (BD Bioscience) или фибронектине (BD Bioscience). На покровные стекла 24x24 мм наносился холодный Матригель или фибронектин согласно инструкции. После полимеризации матрикса опухолевые клетки наносили в количестве 5ОО ООО. Результаты оценивали на каждый З день. Эксперименты повторяли не менее З раз в дуплетах.
Иммуноцитохимическое исследование
Иммуноцитохимическое исследование проводилось на опухолевых клетках линий mel Cher, mel Ch, mel P, mel Mtp, mel Kor, mel Me, mel Ibr, выращенных на предметных стеклах. При достижении 70-80 % монослоя стекла промывались в фосфатно-солевом буфере и фиксировались в холодных спирте (5 мин) и ацетоне (З мин).
Инкубацию с антителами проводили в течение 18 ч при 4 °С. Для визуализации реакции антиген-антитело использовали стрептавидин-биотиновую тест-систему LSAB+kit (фирма DAKO). Хромогеном служил DAB (фирма DAKO).
Ядра клеток докрашивали гематоксилином и заключали под покровное стекло.
В качестве первичных антител использовали МКА к VEGF (клон VG1, DAKO; разведение 1 : 25), VEGFR-1 (клон Rb-1527p, Neomarkers; разведение 1 : 250), VEGFR-2 (клон Rb-1526p, Neomarkers; разведе-
ние 1 : 250), CD31 (клон 7C70A, DAKO; разведение 1 : 50), von Willebrand factor (поликлональные, DAKO; разведение 1 : 200), ламинин (клон 4С7, DAKO, разведение 1 : 1000), 5у2 цепь ламинина (клон 4G1, DAKO; разведение 1 : 50), Эфрин A2 (клон H-175, Santa Cruz Biotechnology; разведение 1 : 400), с-met (клон EP1454Y, Abcam; разведение 1 : 250), Notch3 (поликлональные, Abcam; разведение 1 : 50), коллаген IV типа (клон CIV22, DAKO; разведение 1 : 50), СD133 (поликлональные, Abcam; разведение 1 : 100), Cox-2 (клон CX-294, DAKO, разведение 1 : 100), Ki-67 (клон MIB-1, DAKO; разведение 1 : 100), СD34 (клон QBEnd10, DAKO; разведение 1 : 50), VE-кадхерин (клон ВV9, Abcam; разведение 1 : 50), PTEN (поликлональные, VECTOR; разведение 1 : 500).
Результаты иммуноцитохимической реакции оценивали под световым микроскопом NIKON H55OL с использованием оптического увеличения х100, х200, х400.
Имплантация опухолевых клеток иммунодефицитным мышам in vivo Клетки метастатической меланомы кожи mel Cher перевивались иммунодефицитным мышам Balb/c nude подкожно в количестве 5 000 000 клеток на мышь. Динамика роста перевиваемых опухолей оценивалась каждые 3 дня, начиная с 7 дня после перевивки. Размеры опухоли определяли как отношение ширины к длине и на половину ширины. Наблюдение за мышами осуществлялось 25 дней после перевивки. После окончания эксперимента опухоли удалялись для дальнейшего исследования.
Морфологическое и иммуногистохимическое исследование образцов опухоли Удаленные опухоли фиксировались в 10 %-ном нейтральном формалине и заключались в парафин. Срезы опухолей окрашивались гематоксилином и эозином для рутинного морфологического исследования. Иммуногистохимическое исследование включало окрашивание срезов опухоли на наличие кровеносных сосудов и опухолевых каналов.
Наличие опухолевых каналов оценивалось по окрашиванию реактивом Шиффа (на базальные мембраны). Использовался набор Accustain для PAS окрашивания (Sigma Aldrich). Срезы инкубировали в периодической кислоте в течение 10 мин при комнатной температуре, промывались дистиллированной водой, а затем - в основании Шиффа в течение 15 мин, далее промывались проточной водой и заключались под покровное стекло. Окрашивание на кровеносные сосуды проводили с использованием антител против CD34-антигена (клон CBR-E8, Santa Cruz Biotechnology; разведение 1 : 50). Инкубацию с антителами проводили в течение 18 ч при температуре 4 °С. Для визуализации реакции антиген-антитело использовали поликлональные антитела против крысиных иммуноглобулинов, меченные биотином (фирма BD Bioscience, разведение 1:100) и стрептавидин-HRP (фирма DAKO). Хромогеном служил DAB (фирма DAKO). Затем срезы либо окрашивали реактивом Шиффа согласно методике, описанной выше, без докрашивания гематоксилином. Срезы заключались под покровное стекло.
Результаты и обсуждение
Нами была исследована способность 15 клеточных линий метастатической меланомы кожи человека, прошедших более 30 пассажей, к формированию СПС.
Культивирование клеток в низкой плотности на Матригель приводило к формированию СПС через 10-16 ч. 80 % изученных клеточных линий метастатической меланомы кожи обладали воспроизводимой способностью к формированию СПС при инкубации на Матригеле in vitro. В этом случае опухолевые клетки, посаженные на Матригель, образовывали длинные, соединенные друг с другом трубочки, отсутствовали незамкнутые трубочки, не ограниченные контактами с другими (рис. 1а). Наблюдаемые СПС были похожи на структуры, формируемые клеточной линией эндотелиальных клеток SVEC-4-10 (рис. 1б). 6 (40 %) из 1б клеточных линий (mel Cher, mel Ch, mel R, mel BGF, mel Si, mel P) образовывали стабильные СПС, которые сохранялись не менее 24 ч. 6 (40 %) клеточных линий (mel Il, mel Kor, mel Mtp, mel Ml, mel Gus, mel RZ84) формировали нестабильные СПС, которые разрушались через 20-24 ч инкубации клеток на Матригеле (рис. 1в). З (20 %) изученные клеточные линии (mel Ksen, mel Ibr, mel Me) обладали низкой способностью к формированию СПС. В этом случае образование СПС не воспроизводилось от опыта к опыту и часто зависело от наличия/отсутствия монослоя культуры клеток, взятых для эксперимента. При этом опухолевые клетки, не формирующие СПС, образовывали малые кластеры клеток с короткими прерывающимися трубочками (рис. 1г).
При длительном исследовании (2-3 нед.) опухолевые клетки линии mel Cher формировали тубулярные структуры. В этом случае клетки высаживались в высокой плотности на Матригель или фибро-нектин. Формирование тубулярных структур начиналось спустя З дня после начала культивирования клеток и завершалось к концу 2 недели. При этом на монослое клеток были видны поверхностные объемные петли, окружающих небольшие кластеры опухолевых клеток, и сети, состоящие не менее чем из З петель, соединенных вместе (рис. 2а). Клеточная линия mel Me не была способна формировать тубулярные структуры при инкубации на Матригеле или фибронектине (рис. 2б).
Способность к ВМ сохранялась также при введении опухолевых клеток клеточной линии mel Cher подкожно мышам с иммунодефицитом in vivo. При введении б 000 000 клеток, выращенных в культуре in vitro, подкожные узлы появились на б день. К 2б дню средний объем опухоли составил 180 ммЗ (рис. 3). Морфологический и иммуногистохимиче-ский анализ проводился на срезах опухолей, полученных на 2б день после перевивки. При гистологическом исследовании опухоль состояла из пласта средних, полиморфных клеток, разделенных узкими прослойками соединительной ткани. В некоторых опухолевых клетках наблюдалось наличие небольшого количества пигмента (меланина). Ядра опухолевых клеток овально-округлой формы. Имеются немногочисленные сосуды. Среднее количество CD34+ сосудов в опухоли было равно 8+2. Окрашивание срезов опухоли реактивом Шиффа на наличие базальных мембран показало, что в ткани опухоли присутствовали PAS+ структуры в виде параллельных, параллельных с пересечением каналов и арок. Комбинированное окрашивание на маркер CD34 и наличие базальных мембран показало, что PAS+ структуры не окрашивались антителами к CD34 и ограничены опухолевыми клетками, что является признаком ВМ (рис. 4).
На 7 клеточных линиях метастатической меланомы кожи человека проводилось иммуноцито-химическое исследование экспрессии молекулярно-
биологических маркеров, характерных для эндотелиальных клеток или определяющих способность опухолевых клеток к ВМ.
В опухолевых клетках (100 % случаев) наблюдалась высокая экспрессия комплекса von Willebrand factor/VIII фактор, характерного для эндотелиальных клеток. Экспрессия CD31 обнаружена в 29 % (2), а CD34 - в 43 % (3) случаев.
Наблюдалась высокая экспрессия белков VEGF рецептор-лигандной системы: VEGF - в 57 % (4) случаях, VEGFR-I (Flt-1) - в 100 % (7) и VEGFR-2 (Flk-2/KDR) - в 100 % (7) случаев. Антителами к данным маркерам окрашивались цитоплазма (VEGF, VEGFR-1 и VEGFR-2) и мембрана (VEGFR-1 и VEGFR-2) опухолевых клеток c высокой или средней интенсивностью. Однако анализ фосфорилиро-вания VEGFR-2, рецептора с высокой тирозинки-назной активностью, в опухолевых клетках 3 линий (mel Ch, mel Kor, mel P) не выявил киназной активности данного рецептора. Отсутствовало окрашивание антителами к VEGFR-2, фосфорилированному по Tyr 951 (основной сайт аутофосфорилирования для VEGFR-связывающих белков) и Tyr1175 (основной сайт аутофосфорилирования для VEGFа) доменам [18; 20].
Изучалась также экспрессия основных белков базальных мембран, которые ограничивают кровеносные сосуды и опухолевые каналы. 5 (71 %) опухолевых линий синтезировали коллаген IV типа и 5 (71 %) - 5у2 цепь ламинина. Окрашивание наблюдалось в цитоплазме опухолевых клеток.
Экспрессия молекулярно-биологических
маркеров, ассоциированных с агрессивностью течения болезни и способностью к ВМ, представлена на примере клеточной линии метастатической меланомы кожи mel Cher в табл.
Все культуры эндотелиальных клеток различного происхождения способны формировать трубочки при инкубации на соответствующем компоненте внеклеточного матрикса. Способность формировать СПС является автономным свойством ЭК, т.е. клетки нуждаются во внеклеточных сигналах, разрешающих начать формирование трубочек, но не в сигналах, контролирующих этапы этого процесса [10]. В настоящее время для оценки формирования СПС используется Матригель - природный матрикс базальных мембран, экстрагированный из саркомы EHS mouse sarcoma мыши. Основным его компонентами являются ламинин, коллаген IV, протеингликаны, энтактин и нидоген [5]. Он также содержит факторы роста - трансформирующий фактор роста р, факторы роста фибробластов, тканевый активатор плазминоге-на и другие. Использование Матригеля значительно ускоряет морфологическую дифференцировку ЭК в СПС, которые практически идентичны капиллярной сети, наблюдаемой in vivo [15]. Клетки увеальной меланомы [7], а также некоторые клеточные линии молочной железы и яичников [4] в аналогичных условиях оказались способными к формированию подобных структур. В нашем исследовании 80 % исследованных клеточных линий метастатической меланомы кожи при инкубации на Матригеле также формировали СПС, характерные для ЭК. Рисунок сосудистоподобных структур, образуемый такими клеточными линиями, повторяет структурированную сеть, которую можно наблюдать в ткани опухолей человека. Также введение клеток mel Cher мышам с иммунодефицитом приводило к формированию опухолей, имеющих признаки ВМ: наличие PAS-положительных структур, не окрашенных антителами к маркеру эндотелиальных клеток CD34.
1GG ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ СПОСОБНОСТЬ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ...
Рис. 1. Культивирование клеток в низкой плотности на Матригель (оптическое увеличение х25).
(а) - формирование СПС клетками mel Cher,
(б) - эндотелиальными клетками линии SVEC-4-10;
(в) - разрушение СПС, сформированных клетками mel Ме через 20 ч инкубации на Матригеле;
(г) - формирование кластеров клеток клеточной линией mel Ksen.
Рис. 2. . Культивирование клеток в высокой плотности на Матригель (оптическое увеличение x25).
(а) - формирование тубулярных структур клеточной линией mel Cher;
(б) - отсутствие формирования клеточной линией mel Ме тубулярных структур;
дни после перевивки
Рис. 3. Динамика роста подкожных ксенографтов Рис. 4. СD34-/PAS+-структуры в ткани имплантирован-
клеточной линии метастатической меланомы ко- ной опухоли mel Cher. Иммуногистохимическое окра-
жи человека mel Cher. шивание на маркер эндотелиальных клеток CD34 (хро-
моген DAB), последующее PAS-окрашивание без до_________________________________________________крашивания гематоксилином, увеличение x200.________
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ СПОСОБНОСТЬ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ... 101
Таблица
Экспрессия молекулярно-биологических маркеров клетками линии Mel Cher, определенная иммуноцитохими-ческим методом_____________________________________________________________________________________
Белок Характеристика экспрессии на опухолевых клетках
VEGFрецептор-лигандная система
VEGF Окрашивается мембрана и цитоплазма 100 % опухолевых клеток с высокой интенсивностью
VEGFR-1(Flt-1) Окрашивается мембрана, цитоплазма и ядра 90-100 % опухолевых клеток с высокой интенсивностью
VEGFR-2(Flk-1/KDR) Окрашивается мембрана, цитоплазма и ядра 80 % опухолевых клеток с высокой интенсивностью
Маркеры эндотелиальных клеток
Комплекс фактор Виллебранда/фактор VIII Окрашивается мембрана и цитоплазма 100 % опухолевых клеток с высокой интенсивностью
СD31 Отсутствует
CD34 Отсутствует
Белки базальных мембран
Ламинин Окрашивается мембрана и цитоплазма 70 % опухолевых клеток со средней интенсивностью
5у2 цепь ламинина Окрашивается мембрана и цитоплазма 90 % опухолевых клеток со средней интенсивностью
Коллаген IV типа Окрашивается цитоплазма 60 % опухолевых клеток с низкой интенсивностью
Другие маркеры ангиогенеза
Эфрин A2 Окрашивается цитоплазма 100 % опухолевых клеток со средней интенсивностью
VE-кадхерин Окрашивается цитоплазма 100 % опухолевых клеток со средней интенсивностью
Cox-2 Окрашивается цитоплазма 30 % опухолевых клеток со слабой интенсивностью
Маркеры дифференцировки опухолевых клеток
c-met Окрашивается цитоплазма 60-70 % опухолевых клеток с высокой интенсивностью
NOTCH3 Окрашивается цитоплазма 80 % опухолевых клеток с высокой интенсивностью
CD133 Окрашивается цитоплазма 95 % опухолевых клеток с высокой интенсивностью
Другие молекулярно-биологические маркеры агрессивности опухоли
Ki-67 Индекс пролиферативной активности - 70 %.
PTEN Отсутствует
Как показано, формирование сосудистоподобных и тубулярных структур коррелирует с экспрессией некоторых белков [11; 16; 17; 21]. Поскольку клетки высокоагрессивных меланом возвращаются в плюрипотентный, эмбриональный фенотип, то они могут нести на своей поверхности маркеры фиброб-ластов, эндотелиальных, гемопоэтических и некоторых других клеток.
Считается, что клеточные линии, способные к ВМ, активно продуцируют маркеры эндотелиальных клеток (VE-кадхерин, ламинины, эфрины, VEGF, VEGFR-1, VEGFR-2, фактор Виллебранда), дифференцировочные белки (с-met, NOTCH) и другие. В нашем исследовании показано, что хотя белки VEGF рецептор-лигандной системы гиперэкс-прессируются на клеточных линиях, обладающих способностью к ВМ, при инкубации клеток на стекле они не активны (отсутствует фосфорилиро-вание VEGFR-2 рецептора по Tyr 951 и Tyr 1175).
Обнаружена также высокая экспрессия белков базальных мембран и комплекса фактор Вил-лебранда/VIII фактор, что соответствует данным литературы [12].
Таким образом, 6 клеточных линий метастатической меланомы кожи обладают способностью к формированию стабильных сосудистоподобных структур. Они проявляют свойства эндотелиальных
клеток: они способны воспроизводить in vitro их функциональные свойства (формировать СПС) и экспрессировать характерные для них маркеры.
Клеточная линия mel Cher обладает способностью к образованию СПС и тубулярных структур in vitro и формирует опухолевые каналы при подкожном введении мышам in vivo.
Данная клеточная линия метастатической меланомы может быть использована в качестве
модели для изучения механизмов ВМ и скрининга противоопухолевых препаратов, способных блокировать ВМ in vitro и in vivo [1].
Заключение
Васкулогенная мимикрия - это сложный процесс, который требует дальнейших исследований механизмов его формирования и блокирования. Клеточные линии метастатической меланомы кожи в большинстве случаев обладают хорошей способностью к ВМ.
Использование клеточных линий метастатической меланомы кожи, характеризующихся высокой способностью к ВМ, может помочь в поиске противоопухолевых препаратов, способных блокировать данный процесс.
Литература
1. Григорьева И.Н., Степанова Е.В., Вартанян А А. . и др. Применение клеточной линии меланомы кожи человека mel Cher в качестве положительной модели вакулогенной мимикрии. - Заявка №2009115731/10(021559), срок действия патента с 27.04.2009.
2. Михайлова И.Н., Лукашина М.И, Барышников А.Ю. и др. Клеточные линии меланомы - основа для создания противоопухолевых вакцин. // Вестник Российской академии медицинских наук. - 2005. -Т. 7. - С. 37-40.
3. Семиглазов В.Ф., Иванов В.Г., Семиглазов В.В. и др. Биологически направленная (таргетная) терапия рака молочной железы // РМЖ. - 2007. - Т. 25. - С. 1912-15.
4. Степанова Е.В., Вартанян А А, Личиницер М.Р. Васкулярная мимикрия при злокачественных образованиях // Молекулярная медицина. - 2006. - Т. 1. - С. 23-30.
5. Baatout S. Endothelial differentiation using Matrigel // Anticancer Res. - 1997. - 17. - P. 451-5.
6. Bissell M.J. Tumor plasticity allows vasculogenic mimicry, a novel form of angiogenic switch—a rose by any other name? // Am. J. Pathol. - 1999. - 155. - P. 675-9.
7. Chistofalli M., Chamsangavej C, Hortobagyi G.N. Angiogenesis modulation in cancer research: novel clinical approaches // Nature Reviews. - 2002. - 1. - P. 415-26.
8. Cirone P, Bourgeois J.M., Chang P.L. Antiangiogenic cancer therapy with microencapsulated cells // Hum. Gene Ther. - 2003. - 14(11). - P. 1065-77.
9. Ellis E.M. Tumor angiogenesis // Horizons in cancer research. - 2002. - 1. - P. 4-22.
10. Folkman J, Haudenschild C. Angiogenesis in vitro // Nature. - 1980. - 288. - P. 551-6.
11. Harold-Mende C., Steiner H.H., Andl I. Expression and functional significance of VEGF receptors in human tumor// Lab.Invest. - 1996. - 79. - P. 1573-82.
12. Maniotis A., Folberg R, Hess A. et al. Vascular channel formation by human melanoma cells in vivo and in vitro:vasculogenic mimicry // Am. J. Pathol. - 1999. - 55. - P. 739-52.
13. McDonald D.M., Munn L., Jain R.K. Vasculogenic mimicry: how convincing, how novel, and how significant? // Am. J. Pathol. - 2000. - 156. - P. 383-8.
14. Miller K.D., Sweeney S.J., Sledge G.W. The Snark is a Boojum: the continuing problem of drug resistance in the antiangiogenic era // Annals of Oncology. - 2003. - 14. - P. 20-8.
15. Risau W., Flamme I. Vasculogenesis // Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. - 1995. - 11. - P. 73-91.
16. Rybak Susanna M., Sanovich Elena, Hollingshead Melinda G. et al. “Vasocrine” Formation of Tumor Cell-lined Vascular Spaces: Implications for Rational Design of Antiangiogenic Therapies // Сancer Research. -2003. - 63. - P. 2812-9.
17. Stupac D.G., Cherash D.A. Apoptotic cues from the extracellular matrix: regulators of angiogenesis // Oncogene. - 2003. - 22. - P. 9022-9.
18. Takahashi T., Yamaguchi S., Chida K., Shibuya M. A single autophosphorylation site on KDR/Flk-1 is essential for VEGF-A-dependent activation of PLC-g and DNA synthesis in vascular endothelial cells // EMBO J. - 2001. - 20. - P. 2768-78.
19. Warso M.A., Maniotis A.J., Chen X. et al. Prognostic significance of periodic acid-schiff-positive patterns in primary cutaneous melanoma // Clin. Cancer Res. - 2001. - 7. - P. 473-7.
20. Wu L.W., Mayo L.D, Dunbar J.D. et al. VRAP is an adaptor protein that binds KDR, a receptor for vascular endothelial cell growth factor // J. Biol. Chem. - 2000 - 275 - P. 6059-62.
21. Yayun Liang Rolf A. Brekken, Salman M. Hyder. Vascular endothelial growth factor induces proliferation of breast cancer cells and inhibits the anti-proliferative activity of anti-hormones // Endocrine-Related Cancer.
- 2006. - 13. - P. 905-19.
