СИНТЕЗ И ИССЛЕДОВАНИЕ УСТОЙЧИВОСТИ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ РЕАКТИВАТОРОВ БЕЛКА-ОНКОСУПРЕССОРА Р53 Текст научной статьи по специальности «Химические науки»

Органический синтез и биотехнология

УДК 54.052 + 54.04 + 615.277.3

Daria D. Orlova, Alexander V. Garabadzhiu, Viacheslav G. Tribulovich

SYNTHESIS AND STABILITY INVESTIGATION OF SMALL-MOLECULE REACTIVATORS OF THE P53 TUMOR SUPPRESSOR PROTEIN

St. Petersburg State Institute of Technology (Technical University), Moscovsky pr., 26, St. Petersburg, 190013, Russia e-mail: orlova.daria.d@gmail.com

/4s a result of virtual screening, a series of biologically active compounds, targeted at p53 protein reactivation, was synthetized. A high activity of designed compounds obtained necessitates the investigation of their stability under the conditions of biological experiments. In the present study the degradation mechanism and kinetics were investigated and the structures of the compounds with the optimal stability/activity ratio were revealed.

Key words: Mdm2 inhibitors, Schiff bases, Mannich bases, N-aminomethylation, Mannich bases decomposition, biologically active small molecules

Д.Д. Орлова1, А.В. Гарабаджиу2, В.Г. Трибулович3

СИНТЕЗ И ИССЛЕДОВАНИЕ

УСТОЙЧИВОСТИ

НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ

РЕАКТИВАТОРОВ

БЕЛКА-ОНКОСУПРЕССОРА

Р53

Санкт-Петербургский государственный технологический институт (технический университет), Московский пр., 26, Санкт-Петербург, 190013, Россия e-mail: orlova.daria.d@gmail.com

По результатам виртуального скрининга синтезирован ряд соединений с целевой биологической активностью, направленной на реактивацию белка р53. Высокая активность полученных соединений в отношении белка р53 обуславливает необходимость изучения их устойчивости в условиях проведения экспериментов по изучению биологической активности. В ходе работы исследована кинетика и механизм распада соединений, а также установлены структуры соответствующие оптимальному соотношению устойчивости и активность.

Ключевые слова: ингибиторы Mdm2, основания Шиф-фа, основания Манниха, N-аминометилирование, разложение оснований Манниха, биологически активные низкомолекулярные соединения

DOI 10.15217Zissn1998984-9.2016.36.72

За последние десятилетия достигнут существенный прогресс в понимании механизмов развития опухолевых заболеваний. Однако, несмотря на большие достижения в создании новых химиопрепаратов, онкологические заболевания по сей день занимают лидирующее положение по показателям смертности среди населения в экономически развитых странах. Бесконтрольное деление клеток, которое приводит к злокачественным новообразованиям, часто связано с ослаблением функции белков-онкосупрессоров. Исследования, проводимые в течение более 30 лет, наглядно демонстрируют, что белок р53 является основным онкосупрессором человека, который предохраняет организм от развития раковых клеток за счет активации экспрессии различных генов, продукты которых участвуют в регуляции клеточного цикла, репарации ДНК, активации клеточного старения и апоптоза [1]. В НИЛ «Молекулярная фармакология» ведется разработка соединений, подавляющих образование опухолей определенного типа за счет ингибирования белок-белкового взаимодействия р53-MDM2. При скрининге сфокусированных библиотек химических соединений был выявлен ряд активных соединений на основе индол-2,3-диона.

M

Такие соединения включают в свою структуру как основание Шиффа, которое образуется по положению 3 индол-2,3-диона, так и основание Манниха, образованное за счет ^аминометилирования индольного кольца рядом замещенных пиперазинов. Как основания Шиффа, так и основания Манниха, проявляют биологическую активность широкого спектра и в связи с этим находят широкое применение в медицинской химии. После отбора с помощью виртуального скрининга были проведены первичные испытания на клеточных моделях, которые позволили определить ряд наиболее активных соединений [2].

Одна из основных трудностей синтеза таких соединений - образование метиленового мостика

O

1 Орлова Дарья Дмитриевна, аспирант каф. тонкого микробиологического синтеза, мл. науч. сотр. НИЛ «Молекулярная фармакология», e-mail: orlova.daria.d@gmail.com

Daria D. Orlova, PhD student, department of thin microbiological synthesis, Junior Researcher, RL "Molecular Pharmacology"

2 Гарабаджиу Александр Васильевич, д-р хим. наук, профессор, проректор по научной работе СПбГТИ(ТУ), e-mail: gar-54@mail.ru Alexander V. Garabadzhiu, DR Sci. (Chem.), Professor, Vice-rector for scientific work in SPbSTI(TU)

3 Трибулович Вячеслав Генрихович, канд. хим. наук, ст. науч. сотр. НИЛ «Молекулярная фармакология», e-mail: tribulovich@gmail.com Viacheslav G. Tribulovich, PhD (Chem.), Senior Researcher, RL "Molecular Pharmacology"

Дата поступления - 25 октября 2016 года

основания Манниха, поскольку связь ^С^ является лабильной и в присутствии воды склонна к гидролизу.

Реакция Манниха - электрофильное замещение иминиевым ионом енольной формы карбонильных соединений приводящее к образованию р-аминокар-бонильных соединений. Продукты реакции (основания Манниха), проявляют широкий спектр биологической активности и в связи с этим интенсивно исследуются медицинской химией [3]. В классическом варианте реакция приводит к продуктам С-аминометилирования, но в тех же условиях протекает и реакция Манниха. приводящая к ^аминометилированию, которая и является предметом исследования в нашей лаборатории. По литературным данным, синтез проводится в спиртовом растворе

чн

субстрата при избытке 37 % формальдегида, параформа или 1,3,5-триоксана и эквимолярного количества вторичного амина. Реакция протекает в течение 8-18 ч при комнатной температуре, либо, в случае устойчивых соединений, при кипячении в течение 2-5 ч. При использовании микроволнового излучения время реакции может сокращаться до 2-5 мин (от 5 до 10 полуминутных импульсов) [4]. В качестве водоотнимающего средства в ходе реакции используют прокалённые молекулярные сита или силикагель.

Получение целевых соединений возможно несколькими методами, наиболее рациональные пути синтеза были определены посредством ретросинтетического анализа (схема 1).

О

к,

О

О

к,

> ^ н г\ ii

N

О

Кз

> К1"Ь

V7

О

//

он

(¿I

К+ Г ^О 1=>

iii

О

I ,>=о

iii

н

Схема 1. Ретросинтетический анализ путей синтеза активных соединений.

О

Разработка методики синтеза целевых соединений

Первоначальная схема синтеза состояла из двух стадий: получения оснований Шиффа из индол-2,3-диона и замещенных 4-амино-^бензилбензами-дов и последующего получения оснований Манниха с замещенными бензилпиперазинами (схема 2). Получе-

О

О

ние основания Шиффа происходило при использовании различных растворителей и достаточно широком варьировании условий реакции. Выходы целевого продукта составляли 1-5%. Наиболее высокий выход (5%) был получен в бутаноле в присутствии прокаленных молекулярных сит и каталитических количеств уксусной кислоты при кипячении в течение 3-4 ч.

= -н, -сн3, -СН2ОН Схема 2. I путь синтеза целевых соединений

К

2

Для повышения выхода продукта схема синтеза была изменена, и получение целевых соединений вели в обратном порядке: на первой стадии получали основание Манниха, а затем - основание Шиффа (схема 3). После растворения индол-2,3-диона в этаноле и прибавления 37 % формалина, к реакционной массе добавляли замещенный пиперазин и выдерживали

при слабом кипении и перемешивании в течение 2-4 ч. После обработки реакционной массы выделяли около 80 % продукта. На следующей стадии получали основания Шиффа, используя замещенный амид п-аминобензойной кислоты, однако на выходе образовывалась трудно разделимая смесь с малым выходом продукта (порядка 5 %).

Схема 3. II путь синтеза целевых соединений

В результате исследований была разработана методика синтеза целевых соединений наиболее подходящая для получения неустойчивых оснований Манни-ха (схема 4). Такая схема состоит из 3-х стадий. Первая стадия заключается в образовании основания Шиффа из индолин-2,3-диона и п-аминобензойной кислоты в описанных ранее условиях. Вторая стадия - получение осно-

вания Манниха, проходила в изопропаноле в присутствии прокаленных молекулярных сит, выход составлял 86-89 %. Третья стадия - получение замещенного бензиламида по карбоксильной группе п- аминобензойного фрагмента проводилась в ДМФА, в качестве конденсирующего агента использовался карбонилдиимидазол. Выход целевого продукта составлял 50-55 %.

Cl

R2 = -H, -CH3, -CH2OH R3 = -H, -Cl, -OCH2O-

Схема 4. III путь синтеза целевых соединений

В ходе синтеза оснований Манниха по оптимизированной методике для повышения выхода варьировали условия проведения реакции, учитывая склонность продуктов к деградации. Так, для ряда соединений выход реакции достигал максимальных значений при проведении реакции в условиях микроволнового излучения. В таком случае время реакции составляло примерно 3-4 мин (6-8 импульсов по 30 сек). Однако в данном случае применение микроволнового излучения не является определяющим фактором успешного синтеза, поскольку проведение реакции при кипячении в абсолютном этаноле в течение 2-4 ч приводило к крайне незначительному снижению выхода. В качестве водоотнимающего средства использовали прокаленные молекулярные сита.

При анализе продуктов реакции с использованием ТСХ и ВЭЖХ было установлено, что как незначитель-

Р

ное количество воды, сорбированной на силикагеле, так и использование водных элюентов приводит к значительной деградации целевых продуктов. Для описания полученных соединений был использован метод 1Н ЯМР. Для очистки плохо кристаллизующихся продуктов реакции использовался флэш-хроматограф IsoleraFour (Biotage, Sweden), при этом использовался предварительно обезвоженный силикагель. Применение силикагеля обычной влажности приводило к полной деградации целевых соединений в процессе разделения.

Исследование кинетики деградации активных соединений

По литературным данным [5], скорость гидролиза N-оснований Манниха при 37 °С может варьироваться от нескольких секунд до нескольких суток.

R

R

OH

R

3

3

h2o

h2o

O

O

R

3

В нашем случае определение кинетических параметров разложения активных веществ позволяет выявить структурные элементы, повышающие устойчивость исследуемых соединений к гидролизу. В качестве объектов исследования были выбраны модельные соединения с различными заместителями в бензольном кольце - элек-тронодонорными, электроноакцепторными, а также электронейтральными.

Подготовка проб и приготовление растворов проводилось по следующей методике: исследуемое соединение в количестве (0.05xn) г, где n - количество проб, растворяли в (5*n) мл абсолютного этанола, затем прибавляли (5*n) мл воды.

После подготовки проб растворы нагревали до определенной температуры (80 °С), затем после кратковременного термостатирования отбирали пробу, которую считали нулевой. После этого выдерживали реакционную смесь в течение расчетного времени, отбирая пробы через определенный промежуток времени (как правило, 0,5, 1, 2, 4 и 6 ч, а в случае низкой скорости реакции дополнительно отбирали пробы через 8, 12, 24 и 28 ч). После отбора каждой пробы проводили удаление растворителя при пониженном давлении. Высушенные пробы анализировали с помощью 1Н ЯМР на спектрометре Bruker AVANCE 400 (400 MHz), в качестве растворителя использовали ДМСО-de. Полученные данные обрабатывали, принимая за контрольное значение и сравнивая сумму сигналов ароматических протонов с сигналом, соответствующим двум протонам группы -N-CH2-N-. Количественное значение сигнала этих протонов считали за концентрацию неисходного соединения.

Рисунок. Зависимость концентрации исходного соединения от времени в процессе гидролиза оснований Манниха при 80 °С в 50 % водном этаноле.

На рисунке приведены экспериментальные точки и кривые полученные из уравнений линейной регрессии,

Cl OH

Cl

Cl-Cl

Hh

nh2 nh2oh ■ hcl cl

описывающие зависимость концентрации исходного соединения от времени в процессе гидролиза оснований Манниха при 80 °С в 50 % водном этаноле. Кривая (1) соответствует гидролизу основания Манниха без заместителя в бензольном кольце бензилпиперазинового фрагмента

O

Кривая (2) соответствует гидролизу основания Манниха с 3,4 метилендиокси заместителем в бензольном кольце бензилпиперазинового фрагмента О

Хотя в реакции участвуют две молекулы - исследуемое вещество и вода - ее можно отнести к реакциям псевдопервого порядка, поскольку один из компонентов -вода, присутствует в значительном избытке, поэтому расчет проводили по кинетическому уравнению реакции первого порядка (1).

V1=k1-C = -

dC

(1)

Приведение уравнения к линейному виду давало уравнение (2).

(2)

Полученные данные обрабатывали методом наименьших квадратов, после чего получали линейное уравнение (3), константу скорости реакции (4), время полураспада (5).

Т1/2

¡712

"fcT

(3)

(4)

(5)

Вычисления привели к следующим результатам: для основания Манниха (1) к = (18.6±0.83)40-6 сек-1, Т1/2 = 3.7260-104 сек, для основания Манниха (2) к=(8.8±0.56)40-6 сек-1, ^=7.840" сек.

Экспериментальная часть

Методика синтеза 6-хлоризатина (1):

Cl

H2SO4

o 46%

N' ^^ ^OH

Cl

o 31%

O

O

В литровом стакане с 440 мл воды, при температуре не выше 35 °С растворяли 121 ммоль хлоральгидра-та и 1126 ммоль сульфата натрия. Затем медленно прибавляли при перемешивании тёплый (35 °С) раствор 110 ммоль м-хлоранилина в 80 мл воды, 12 мл водного раствора концентрированной соляной кислоты и 378 ммоль гидроксиламин гидрохлорида в 130 мл воды (35 °С). Перемешивали при 90 °С в течение 2 ч, затем охлаждали до 50 °С, отфильтровывали выпавший оранжевый осадок, в течение 10 мин промывали в 400 мл воды, вновь отфильтровывали и высушивали продукт.

Осадок постепенно прибавляли к нагретым до 60 °С 400 мл серной кислоты. После окончания прибавления нагревали раствор до 80 °С и выдерживали при перемешивании в течение 15 мин, затем охлаждали до 70 °С, выливали на 1 кг колотого льда и перемешивали в течение часа. Продукт высаливали сульфатом аммония, фильтровали, промывали на фильтре 160 мл воды.

К нагретому до 60 °С раствору 8 г гидроксида натрия в 80 мл воды прибавляли осадок. Выдерживали при 60 °С в течение 30 мин, отфильтровывали и промывали 20 мл воды. Осадок представлял собой побочный продукт - 4-хлоризатин, выход 46 % в виде грязно-оранжевого порошка. Фильтрат и промывные воды подкисляли 24 мл уксусной кислоты. Выпадал 6-хлоризатин в виде тёмно-оранжевого осадка. Осадок отфильтровывали и высушивали. Выход целевого продукта 1 - 31 % в виде тёмно-оранжевого осадка. 1Н NMR, 5 (м.д.): 7.27 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.70 (s, 1H).

Методика синтеза 4-((6-хлор-2-оксиндолин-3-он)амино)бензойной кислоты (2). В 500 мл колбу помещали 250 мл н-бутанола, 21.1 ммоль 1 и 21.1 ммоль п-аминобензойной кислоты, добавляли 1 г прокаленных молекулярных сит. Перемешивали до растворения компонентов реакции, затем добавляли 0,1 мл уксусной кислоты. Кипятили реакционную массу в течение 6 час, затем охлаждали и отгоняли часть растворителя до выпадения осадка. Осадок отфильтровывали и высушивали. Пере-кристаллизовывали из изопропанола. Выход 2 - 82 % в виде оранжевого порошка. 1Н NMR 5 (м.д.): 6.18 (s, 1H), 6.94 (d, 1H), 7.11 (d, 2H), 7.43 (d, 1H), 8.06 (d, 2H), 11.18 (s, 1H).

Методика получения оснований Манниха из замещенных бензилпиперазинов и 4-((6-хлор-2-ок-синдолин-3-он)амино)бензойной кислоты (3 а-с). В 250

мл колбу загружали 28 ммоль 4-((6-хлор-2-оксиндолин-3-он)амино)бензойной кислоты (2) в 100 мл абсолютного этанола, 1 г прокаленных молекулярных сит и 3 мл 37 % водного формальдегида. Затем постепенно при перемешивании добавляли 28 ммоль вторичного амина. Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение 3 час, затем помещали в холодильник на 48 час. Полученный осадок отфильтровывали и перекри-сталлизовывали из изопропанола.

4-((1-((4-бензилпиперазин-1-ил)метил)-6-хлор-2-оксиндолин-3-он)амино)бензойная кислота (3а) -выход 67 %. 1H NMR 5 (м.д.): 2.47-2.49 (bs, 4H), 2.62-2.64 (bs, 4H), 3.48 (s, 2H), 4.47 (s, 2H), 7.18-7.27 (m, 6H), 7.537.56 (m, 4H), 8.10 (d, 2H), 12.10 (s, 1H).

4-((1-((4-пиперонилпиперазин-1-ил)метил)-6-хлор-2-оксиндолин-3-он)амино)бен-зойная кислота (3б) - выход: 61%. 1H NMR: 5 (м.д.): 2.43-2.51 (bs, 4H), 2.57-2.66 (bs, 4H), 3.38 (s, 2H), 4.51 (s, 2H), 5.90 (s, 2H), 6.70-6.82 (m, 3H), 7.17-7.20 (d, 1H), 7.52-5.56 (m, 4H), 8.098.11 (d, 2H).

4-((6-хлор-1-((4-(4-хлорбензил)пипера-зин-1-ил)метил)-2-оксиндолин-3-он)амино)бензойная кислота (3в) - выход: 55%. 1H NMR 5 (м.д.): 2.45-2.46 (bs, 4H), 2.63-2.64 (bs, 4H), 3.43 (s, 2H), 4.42 (s, 2H), 7.18-7.21 (t, 3H), 7.29 (d, 2H), 7.43 (d, 2H), 7.51 (s, 1H), 7.69 (d, 1H), 8.01 (d, 2H).

Методика синтеза соединений (4 a-и). В 500

мл колбе растворяли 50 ммоль замещенного бензилами-

на в 150 мл свежеперегнанного ДМФА и смешивали с 60 ммоль карбонилдиимидазола. После прекращения выделения углекислого газа, добавляли раствор 50 ммоль 3 в 100 мл ДМФА и оставляли на ночь при 0 °С. Образовавшийся продукт осаждали из раствора 500 мл диэтилового эфира, отфильтровывали и высушивали.

М-бензил-4-((1-((4-бензилпиперазин-1-ил)ме-тил)-6-хлор-2-оксиндолин-3-он)амино)бензамид (4а) -выход: 57%. 1Н NMR 5 (м.д.): 2.48 (bs, 4H), 2.63 (bs, 4H), 3.47 (s, 2H), 4.44 (d, 2H), 4.50 (s, 1H), 4.57 (s, 1H), 7.14 -7.27 (m, 11H), 7.50 (q, 4H), 7.83 (d, 2H), 8.80 (s, 1H).

4-((1-((4-(пиперонил)пиперазин-1-ил)метил)-6-хлор-2-оксиндолин-3-он)амино)-№бензилбензамид (4б) - выход: 51%. 1H NMR 5 (м.д.): 2.45 (bs, 4H), 2.61 (bs, 4H), 3.37 (s, 2H), 4.31 (s, 2H), 4.52 (s, 2H), 5.90 (s, 2H), 6.69

- 6.80 (m, 3H), 7.15 - 7.16 (m, 2H), 7.23 - 7.26 (m, 4H), 7.43

- 7.46 (t, 3H), 7.52 (d, 1H), 7.83 (d, 2H).

М-бензил-4-((6-хлор-1-((4-(4-хлорбензил)пипе-разин-1-ил)метил)-2-оксиндолин-3-он)амино)бенза-мид (4в) - выход: 45 %. 1H NMR 5 (м.д.): 2.47 (bs, 4H), 2.65 (bs, 4H), 3.44 (s, 2H), 4.45 (s, 2H), 4.54 (s, 2H), 7.16 -7.18 (m, 4H), 7.25 - 7.26 (m, 6H), 7.37 (d, 2H), 7.54 (s, 1H),

7.64 (d, 1H), 7.84 (d, 2H).

4-((1-((4-бензилпиперазин-1-ил)метил)-6-хлор-2-оксиндолин-3-он)амино)-Ы-(1-фенилэтил)бензамид (4г) - выход: 42%. 1H NMR 5 (м.д.): 1.52 (d, 3H), 2.43 (bs, 4H), 2.64 (bs, 4H), 3.40 (s, 2H), 4.66 (s, 2H), 5.05 (q, 1H), 7.17 - 7.26 (m, 11H), 7.38 (d, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.65 (d, 1H), 7.85 (d, 2H), 8.61 (s, 1H).

4-((1-((4-(пиперонил)пиперазин-1-ил)метил)-6-хлор-2-оксиндолин-3-он)амино)-М-(1-фенилэтил)бен-замид (4д) - выход: 37%. 1H NMR 5 (м.д.): 1.53 (d, 3H), 2.46 (bs, 4H), 2.61 (bs, 4H), 3.38 (s, 2H), 4.46 (s, 2H), 5.06 (q, 1H), 5.90 (s, 2H), 6.69 (d, 1H), 6.76 (d, 1H), 6.80 (s, 1H), 7.15 - 7.23 (m, 6H), 7.44 - 7.46 (m, 3H), 7.52 (d, 1H), 7.81 (d, 2H), 7.93 (s, 1H).

4-((6-хлор-1-((4-(4-хлорбензил)пипера-зин-1-ил)метил)-2-оксиндолин-3-он)амино)-М-(1-фе-нилэтил)бензамид (4е) - выход: 34%. 1H NMR 5 (м.д.): 1.55 (d, 3H), 2.43 (bs, 4H), 2.60 (bs, 4H), 3.38 (s, 2H), 4.42 (s, 2H), 5.14 (q, 1H), 7.15 - 7.17 (m, 3H), 7.22 - 7.27 (m, 7H), 7.37 (d, 2H), 7.46 (s, 1H), 7.64 (d, 1H), 7.82 (d, 2H).

4-((1-((4-бензилпиперазин-1-ил)метил)-6-хлор-2-оксиндолин-3-он)амино)-М-(2-гидокси-1-фенилэтил) бензамид (4ж) - выход: 35%. 1H NMR 5 (м.д.): 2.46 (bs, 4H), 2.64 (bs, 4H), 3.73 (s, 2H), 3.91 (d, 2H), 4.65 (s, 2H), 4.78 (t, 1H), 7.18 - 7.27 (m, 11H), 7.37 (d, 2H), 7.46 (s, 1H),

7.65 (d, 1H), 7.85 (d, 2H).

4-((1-((4-(пиперонил)пиперазин-1-ил)метил)-6-хлор-2-оксиндолин-3-он)амино)-М-(2-гидрокси-1-фе-нилэтил)бензамид (4з) - выход: 40%. 1H NMR 5 (м.д.): 2.52 (bs, 4H), 2.65 (bs, 4H), 3.38 (s, 2H), 3.99 (d, 2H), 4.60 (s, 2H), 4.97 (t, 1H), 5.04 (s, 1H), 5.90 (s, 2H), 6.72 (d, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.98 (d, 1H), 7.18 - 7.26 (m, 6H), 7.38 (d, 2H), 7.54 (s, 1H), 7.65 (d, 1H), 7.86 (d, 2H).

4-((6-хлор-1-((4-(4-хлорбензил)пипера-зин-1-ил)метил)-2-оксиндолин-3-он)амино)-М-(2-ги-дрокси-1-фенилэтил)бензамид (4и) - выход: 30%. 1H NMR: 5 (м.д.): 2.48 (bs, 4H), 2.65 (bs, 4H), 3.45 (s, 2H), 3.98 (d, 2H), 4.49 (s, 2H), 4.94 (t, 1H), 7.16 - 7.27 (m, 10H), 7.37 (d, 2H), 7.55 (s, 1H), 7.65 (d, 1H), 7.84 (d, 2H), 8.19 (s, 1H).

Заключение

Получен ряд низкомолекулярных реактивато-ров белка р53. Структура соединений подтверждена с помощью 1Н ЯМР. По результатам кинетического эксперимента установлено, что при переходе от оснований Манниха, образованных бензилпиперазином, к основаниям Манниха, образованным пиперонилпиперази-ном, скорость разложения увеличивается в 2-3 раза, что, возможно обусловлено электронодонорным характером метилендиоксигруппы. Скорость деградации модельных соединений позволяет предположить, что при

исследовании биологической активности на клеточных тест-системах за время эксперимента не происходит существенного снижения концентрации активных соединений, обусловленного гидролизом оснований Манниха. Однако дальнейшей оптимизации целесообразно подвергать соединения, сконструированные на основе бен-зилпиперазинов, имеющих электронодонорные заместители в бензильном фрагменте. Это обусловлено тем, что при близкой по значению расчетной энергии комплекса активной молекулы с белком мишенью MDM2 и неразличимой, в пределах чувствительности метода, биологической активности они обладают значительно более высокой стабильностью.

Работа выполнена при поддержке стипендии Президента Российской Федерации молодым ученым и аспирантам (Конкурс СП-2016).

Литература

1. Чумаков П.М. Белок р53 и его универсальные функции в многоклеточном организме // Успехи биол. химии. 2007. Т. 47. С. 3-52.

2. Davidovich P., Aksenova V., Petrova V., Tentler D., Orlova D., Smirnov S., Gurzhiy V., Okorokov A.L., Ga-rabadzhiu A., Melino G., Barlev N., Tribulovich V. Discovery of Novel Isatin-Based p53 Inducers // ACS Med. Chem. Lett. 2015. V. 6. № 8. P. 856-860.

3. Roman G. Mannich bases in medicinal chemistry and drug design // Eur J. Med. Chem. 2015. V. 89. P. 743-816.

4. Sriram D., Banerjee D., Yogeeswari P. Efavirenz Mannich bases: synthesis, anti-HIV and antitubercular activities // J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2009. V. 24. № 1. P. 1-5.

5. Bundgaard H., Johansen M. Hydrolysis of N-Man-nich bases and its consequences for the biological testing of such agents // Int. J. Pharm. 1981. V. 9. № 1. P. 7-16.