CC BY
12
ОРИГИНАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
УДК 577.152.34:579.222.3
СЕКРЕЦИЯ МИКРОМИЦЕТАМИ ПРОТЕИНАЗ С АКТИВНОСТЬЮ, ПОДОБНОЙ АКТИВНОСТИ БЕЛКОВ СИСТЕМЫ ГЕМОСТАЗА
А.А. Лукьянова1, Е.И. Корниенко1, П.А. Виган2, В.Г. Крейер1, А.В. Кураков3, А.А. Осмоловский1' *
1 Кафедра микробиологии, биологический факультет, Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, Россия, 119234, г. Москва, Ленинские горы, д. 1, стр. 12; 2 Paris-Sacley University, Route de l'Orme aux Merisiers, RD 128, 91190, Saint-Aubin, France; 3 Кафедра микологии и альгологии, биологический факультет, Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова, Россия, 119234, г. Москва, Ленинские горы, д. 1, стр. 12
*e-mail: [email protected]
С использованием хромогенных пептидных субстратов изучена протеолитическая активность по отношению к белкам системы гемостаза у 8 микромицетов, относящихся к разным эколого-трофическим группам: фито-, немато-, мико- и энтомопатоге-нам, а также патогенам человека. Показано, что исследованные микромицеты секре-тируют протеазы с широкой субстратной специфичностью, однако среди них есть продуценты с выраженной плазминоподобной, урокиназной (Arthrobotrys longa 1, Sarocladium strictum 203) и подобной тканевому активатору плазминогена активностью (Purpureocillium lilacinum kl). Наиболее высокоактивным продуцентом протеаз с фи-бринолитической и активаторной к плазминогену активностью оказался микромицет S. strictum 203. Активаторная к плазминогену активность протеиназ, образуемых S. strictum 203, составляет около 50% от фибринолитической, что делает его перспективным продуцентом фибринолитических ферментов.
Ключевые слова: протеиназы микромицетов, фибринолитические ферменты, тромбо-литические средства, плазминоподобная активность, активаторы плазминогена, хромоген-ные пептидные субстраты
Внеклеточные протеолитические ферменты мицелиальных грибов обладают как широкой, так и узкой субстратной специфичностью и способны оказывать всестороннее воздействие на разнообразные белковые субстраты, в том числе на белки системы гемостаза [1—4]. Такие протеазы микромицетов либо напрямую гидролизуют белки-ферменты плазменного гемостаза, либо активируют их проферменты подобно эндогенным факторам свертывания крови (осуществляя реакции ограниченного протеолиза) и могут найти применение в терапии и диагностике тромбо-эмболических заболеваний. Исследования последних лет показывают, что проведение широкомасштабного скрининга продуцентов ферментов направленного действия позволяет отобрать микромицеты-продуценты из разных эколого-трофических групп — сапротрофов, фитопатогенов, немато- и энтомопатогенов [3, 5, 6]. Выделенные ферменты разных микро-мицетов отличаются как по активности, так и по физико-химическим свойствам. Однако направленный поиск высокоактивных продуцентов протеаз и разработка технологии их получения требуют расширения представлений о протеоли-тическом потенциале микромицетов, выделен-
ных из разных экотопов. Одним из наиболее удобных инструментов в первичном скрининге продуцентов протеаз с активностью белков системы гемостаза служат их хромогенные пептидные субстраты — они позволяют определить спектр активности протеаз микромицетов в отношении ферментов плазмы крови и спрогнозировать активность гидролиза белковых субстратов [4, 7]. Особенно важен такой подход для поиска продуцентов фибринолитических проте-аз — как прямого действия на фибрин (плазмино-подобная активность), так и опосредованного (активаторная активность к предшественнику фибрина, плазминогену). Наиболее изученными в отношении продукции подобных ферментов являются микромицеты-космополиты, преимущественно относящиеся к сапротрофам — изоля-там почв и растительных остатков. В связи с возрастающим интересом к продуцентам протеаз фибринолитического действия, не являющихся сапротрофами, значительный интерес могут представлять представители фито-, немато-, мико- и энтомопатогенов, а также патогенов человека.
Целью работы было изучение активности микромицетов по отношению к белкам системы
гемостаза и отбор активного продуцента фибри-нолитических протеаз с активаторной к плазми-ногену активностью среди микромицетов — патогенов разных организмов.
Материалы и методы
Объекты исследования и их поддержание. Использовали штаммы микромицетов Arthrobotrys longa 1, Aspergillus niger 1, Beauveria bassiana 2, Pur-pureocillium lilacinum k1, Paecilomyces carneus 1, Sa-rocladium strictum 203, Tolypocladium cylindrospo-rum 31 и Trichoderma harzianum 410 из коллекции кафедр микологии и альгологии и микробиологии МГУ. Поддержание штаммов осуществляли в пробирках на скошенных среде Чапека—Докса и сусло-агаре (3оБ). В качестве посевного материала использовали культуры, выращенные в течение 7 сут.
Условия культивирования и определение проте-олитической активности. Культивирование ми-кромицетов проводили в глубинных условиях на орбитальной качалке (200 об/мин) в качалочных колбах объемом 750 мл со 100 мл питательной среды при 28 °С в течение 2 сут на среде, содержащей сусло, глюкозу и пептон [8, 9], после чего часть полученного посевного материала переносили в среду состава (в %): глюкоза — 3,0, глицерин — 7,0, гидролизат рыбной муки — 0,5, NaNO3 — 0,2, KH2PO4 - 0,05, MgSO4 - 0,05, рН 5,5 с последующим культивированием в течение 4 сут.
Активность внеклеточных протеиназ определяли в фильтрате культуральной жидкости с хромо-генными пептидными и белковыми субстратами.
В качестве хромогенных пептидных субстратов использовали H-D-Val-Leu-Lys-pNA (S2251) — для определения плазмина, Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA (S2765) — для определения Ха-фактора плазмы крови человека, Glp-Pro-Arg-pNA (S2366) — для определения активированного протеина С, Glp-Gly-Arg-pNA (S2444) — для определения урокина-зы, H-D-Ile-Pro-Arg-pNA (S2288) — для определения тканевого активатора плазминогена и Tos-Gly-Pro-Arg-pNA (Chromozym TH) — для определения тромбина [10]. Для проведения реакции к 200 мкл культуральной жидкости добавляли 100 мкл 0,05%-ного раствора (в 0,05М Трис-HCl-буфере, рН 8,2) соответствующего субстрата, полученную смесь инкубировали при 37 °С в течение 5 мин, реакцию останавливали добавлением 200 мкл 50%-ной уксусной кислоты. За единицу активности (Е) принимали количество мкмоль п-нитроанилина, отщепившегося от субстрата за 1 мин.
В качестве белковых субстратов использовали бычий фибриноген и казеин по Хаммерштайну (Sigma-Aldrich, США). Активность определяли с помощью модифицированного метода Ансона— Хагихары, инкубируя при 37 °С 200 мкл культу-ральной жидкости и 400 мкл 1%-ной суспензии
соответствующих белковых субстратов, приготовленных на 0,1М Трис-НС1-буфере, рН 8,2, как описано ранее [11, 12]. Активность выражали в мкмолях тирозина, образовавшегося в течение 1 мин в 1 мл культуральной жидкости (ЕТир).
Реакции проводили при постоянном перемешивании в термошейкере TS-100 (BioSan, Латвия). Измерение оптической плотности растворов проводили на спектрофотометре Hitachi 200-20 (Япония).
Фибринолитическую и активаторную к плаз-миногену активность определяли на прогретых и непрогретых фибриновых пластинах по методу Аструпа—Мюллерца—Лансена [3]. Активность выражали в условных единицах (усл. ед.). За 1 усл. ед. принимали количество фермента, вызывающее зону лизиса фибрина, равную 10 мм2.
Определение содержания белка. Количество белка в пробе определяли по методу Бредфорда [13]. Для этого к 50 мкл пробы добавляли 950 мкл реактива Coomassie Brilliant Blue G-250 и регистрировали светопоглощение при 595 нм.
Эксперименты проводили в трех повторно-стях, ошибка приведенных результатов не превышала 5—7 %. Статистическую обработку полученных данных поводили с помощью программ MS Excel 2013 и Statitstica 7.0. Для сравнения данных использовали U-критерий Манна-Уит-ни, различия считали статистически значимыми при p < 0,05.
Результаты и их обсуждение
Использованные в работе штаммы мицели-альных грибов в эколого-трофическом отношении относятся к группам нематофагов (А. longa 1), условных патогенов человека (Asp. niger 1), фитопа-тогенов и микопаразитов (S. strictum 203, T. harzianum 410), энтомопатогенов и микромицетов, ассоциированных с насекомыми (B. bassiana 2, Р. carneus 1, P. lilacinum k1, T. cylindrosporum 31).
Изучение протеолитической активности микромицетов с хромогенными пептидными субстратами белков системы гемостаза человека проводили на среде, содержащей источники как аминного, так и минерального азота, рост микро-мицетов на которой можно считать сбалансированным, что позволяет учесть смешанный тип их питания и выявить активность секретируемых ими протеаз [14]. Как показали полученные результаты, большинство культур обладает способностью гидролизовать все использованные субстраты, что может говорить об их широкой субстратной специфичности, однако в большинстве случаев активность была невысокой (от 0,4 до 10 Е/млх10-3). Наибольшей активностью с субстратами обладали A. longa 1 и S. strictum 203, наименьшей — Asp. niger 1 (табл. 1).
Микромицет А. longa 1 является известным продуцентом протеаз с фибринолитической и ак-
тиваторной к плазминогену активностью — комплекс его протеолитических ферментов известен под названием «Лонголитин» [15]. При росте на ферментационной среде, отличной от использованной ранее, продуцент проявляет характерные для него плазминоподобную активность и активность, подобную активности тканевых активаторов плазминогена (ТАП-подобную активность). Другие типы активности — с субстратами тромбина (тромбиноподобная), урокиназы (урокиназ-ная), активированного протеина С и фактора Ха — были обнаружены впервые.
Как видно из табл. 1, S. strictum 203 обладает сходным спектром протеолитической активности, а ее значения в среднем в 1,8 раз превышают активность A. longa 1. Внеклеточные протеазы этого микромицета проявляют высокую уроки-назную и ТАП-подобную активность, расщепляя субстраты эндогенных активаторов плазминогена человека, что может указывать на их способность к ограниченному протеолизу этого белка системы гемостаза.
Среди остальных микромицетов интерес вызывает P. lilacinum k1, протеазы которого обладали выраженной ТАП-подобной активностью и активностью активированного протеина С и не проявляли значительную активность в отношении субстратов тромбина, плазмина, урокиназы и Ха-фактора.
Активность в отношении использованных субстратов протеаз системы гемостаза микроми-цетов B. bassiana 2, P. carneus 1, T. cylindrosporum 31 и T. harzianum 410 была значительно ниже, хотя хорошо известно, что среди представителей этих видов микромицетов встречаются протеолитиче-ски активные представители [16—19].
Дальнейший интерес представляло изучение протеолитической активности в отношении белковых субстратов — фибрина, фибриногена и казеина — малоизученных штаммов — S. strictum 203 и P. lilacinum k1, которые были отобраны для дальнейших исследований.
Интересно отметить, что все хромогенные пептидные субстраты белков системы гемостаза
расщепляются трипсиновыми протеиназами — соответственно, можно предположить, что и про-теазы, секретируемые изученными микромицета-ми, относятся к этому типу. Однако для мицелиальных грибов вида Р. Шастыт известно, что образуемые ими протеазы относятся к проте-азам субтилизинового типа и не расщепляют хромопептиды-п-нитроанилиды по остатку аргинина [20]. Возможно, выявленная активность этого микромицета принадлежит протеазам другой группы.
В табл. 2 приведены данные по фибринолити-ческой, фибриногенолитической, активаторной к плазминогену и общей протеолитической активности микромицетов S. strictыm 203 и Р. Шастыт к1. Было выявлено, что оба микромицета действительно образуют протеиназы, способные активировать плазминоген, что подтверждает данные, полученные с помощью хромогенных пептидных субстратов. Активаторная к плазминогену активность протеаз S. strictыm 203 была в 2,9 раз выше, чем у протеаз Р. Шастыт к1, а фибринолитиче-ская — выше в 5,4 раза соответственно. В целом, активность по отношению к фибрину и плазмино-гену была выше, чем у других микромицетов, у которых она была обнаружена при их росте на использованной ферментационной среде [3]. Следует отметить, что протеазы S. strictыm 203 были менее активны по отношению к фибриногену и казеину по сравнению с протеазами Р. Шастыт к1. Так, общая протеолитическая активность S. strictыm 203 и Р. Шастыт к1 различалась в 4,3 раза, а фибриногенолитическая — в 16,5 раз. Высокая активаторная к плазминогену и фибри-нолитическая активность при отсутствии других типов активности, в особенности к глобулярному белку казеину, может указывать на специфичность протеолитических ферментов S. strictыm 203 и на его преимущество в качестве продуцента фибри-нолитических ферментов. Количественное определение фибринолитической активности выявило, что протеазы, образуемые S. strictыm 203 активнее гидролизуют фибрин, нежели фибриноген: значение фибринолитической активности со-
Таблица 1
Протеолитическая активность микромицетов с хромогенными пептидными субстратами протеаз системы гемостаза
Микромицет Активность с субстратами, Е/млх10"3
Chromozym TH S2251 S2444 S2288 S2366 S2765
Aspergillus niger 1 5,1±0,2 3,3±0,2 0,7±0,1 1,8±0,2 0,6±0,2 0,4±0,1
Arthrobotrys longa 1 25,6±0,2 20,1±0,2 20,6±0,2 22,5±0,2 18,2±0,2 18,9±0,2
Beauveria bassiana 2 3,2±0,3 10,2±0,2 2,4±0,2 4,5±0,2 0,7±0,1 2,4±0,2
Purpureocillium lilacinum kl 9,1±0,4 7,3±0,2 2,7±0,2 26,8±0,6 26,2±0,2 7,3±0,2
Paecilomyces carneus 1 2,2±0,1 1,5±0,1 10,8±0,3 1,6±0,2 2,8±0,2 1,5±0,1
Sarocladium strictum 203 40,5±0,6 38,9±0,6 58,3±0,6 39,5±0,6 54,4±0,4 38,2±0,2
Tolypocladium cylindrosporum 31 2,5±0,2 1,5±0,2 3,0±0,2 2,3±0,2 2,8±0,2 3,8±0,2
Trichoderma harzianum 410 0,9±0,1 1,9±0,2 2,7±0,2 0,8±0,1 0,4±0,1 0,4±0,1
ставило 18,9 ЕТ/мл, фибриногенолитической активности — 9,3 ЕТир/мл.
Таблица 2
Активность S. strictum 203 и P. lilacinum k1 с белковыми субстратами
Микромицет Фибрино- Активатор- Фибри- Общая
литиче- ная к ногеноли- протеоли-
ская плазминоге- тическая тическая
актив- ну актив- актив- актив-
ность, усл. ность, усл. ность, ность,
ед./мл ед./мл ЕТир ЕТир
S. strictum 203 485,8±3,5 235,8+3,5 9,3+1,5 32,8+1,5
P. lilacinum kl 166,3+3,5 43,7+3,5 153,0+1,5 139,8+1,5
Как следует из полученных данных, актива-торная к плазминогену активность протеиназ, образуемых S. strictum 203, составляет около 50% от фибринолитической, как и у протеаз, входящих в комплекс «Лонголитин» [15]. При этом вклад обоих типов активности в суммарное фи-бринолитическое действие различен: доля акти-ваторной к плазминогену активности в расчете на мг белка составляет лишь одну треть от общего фибринолитического действия протеаз микро-мицета (рисунок). Однако эффективность гидролиза фибрина протеазами микопаразитического штамма S. strictum 203 достаточно высока — соотношение фибринолитической активности и общей протеолитической (соотношение ФА/ОПА [21]) составило 0,57, что значительно превосходит соотношения, установленные для про-теаз, образуемых микромицетами-сапротрофами А. ochraceus Ь-1 (0,18), А. flavipes А17 (0,27) и А. terreus 2 (0,18) [4, 12, 22]. Доля фибринолити-ческой активности протеаз в их общем гидролитическом действии на белки составляет около 40% (рисунок). Полученные данные подтверждают перспективность микромицетов, не являющихся сапротрофами, в качестве продуцентов протеаз, активных по отношению к белкам системы гемостаза.
А Б
100% 80% 60% 40% 20% 0%
ЕТир/мг белка усл. ед./мг белка
Рисунок. Вклад (в %): А — фибринолитической (1) и общей протеолитической (2) активности; Б — активаторной к плазминогену (3) и фибринолитической (4) активности в суммарное фибринолитическое действие внеклеточных протеиназ S. strictum 203.
Таким образом, с использованием хромоген-ных пептидных субстратов протеаз системы гемостаза изучена активность 9 штаммов микромицетов, относящихся к разным эколого-трофическим группам. Показано, что исследованные микроми-цеты секретируют протеазы с широкой субстратной специфичностью, однако среди них есть продуценты с выраженной плазминоподобной и урокиназной (A. longa 1, S. strictum 203) и ТАП-подобной (P. lilacinum kl) актвиностью. Отобран высокоактивный продуцент протеаз с фибрино-литической и активаторной к плазминогену активностью — S. strictum 203. Активаторная к плаз-миногену активность протеиназ, образуемых S. strictum 203, составляет около 50% от фибрино-литической, что делает его перспективным продуцентом фибринолитических ферментов.
Исследования выполнены без использования животных и без привлечения людей в качестве испытуемых. Авторы заявляют об отсутствии у них конфликта интересов.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Kotb E. The biotechnological potential of fibrinolytic enzymes in the dissolution of endogenous blood thrombi // Biotechnol. Prog. 2014. Vol. 30. N 3. P. 656-672.
2. Kotb E., Helal G.E.-D.A., Edries F.M. Screening for fibrinolytic filamentous fungi and enzymatic properties of the most potent producer, Aspergillus brasiliensis AUMC 9735 // Biologia. 2015. Vol. 70. N 12. P. 1565-1574.
3. Sharkova T.S., KurakovA.V., Osmolovskiy A.A., Mat-veeva E.O., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Screening of producers of proteinases with fibrinolytic and collagenolytic activities among micromycetes // Microbiology. 2015. Vol. 84. N 3. P. 359-364.
4. Osmolovskiy A.A., Kurakov A.V., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Ability of extracellular proteinases of micromycetes Aspergillus flavipes, Aspergillus fumigatus and Aspergillus sydowii to affect proteins of the human hae-
mostatic system // Moscow Univ. Biol. Sci. Bull. 2017. Vol. 72. N 1. P. 20-24.
5. Шаркова Т.С., Матвеева Э.О., Кураков А.В., Осмоловский А.А., Крейер В.Г., Баранова Н.А., Егоров Н.С. Энтомопатогенные микромицеты - перспективные продуценты протеиназ с фибринолитической активностью // Усп. мед. микол. 2015. Т. 14. С. 458-460.
6. Kim H.C., Choi B.-S, Sapkota K., Kim S., Lee H.J, Yoo J.C., Kim S.-J. Purification and characterization of a novel, highly potent fibrinolytic enzyme from Paecilo-myces tenuipes // Process Biochem. 2011. Vol. 46. N 8. P. 1545-1553.
7. Osmolovskiy A.A., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Properties of extracellular plasmin-like proteases of Aspergillus ochraceus micromycete // Applied Biochem. Microbiol. 2017. Vol. 53. N 4. P. 429-434.
8. Batomunkueva B.P., Egorov N.S. Isolation, purification and resolution of the extracellular proteinase complex of Aspergillus ochraceus 513 with fibrinolytic and anticoagulant activities // Microbiology. 2001. Vol. 70. N 5. P. 519—522.
9. Osmolovskiy A.A., Rukavitsyna E.D., Kreier V.G., Ba-ranova N.A., Egorov N.S. Production of proteinases with fibrinolytic and fibrinogenolytic activity by a micromycete Aspergillus ochraceus // Microbiology. 2017. Vol. 86. N 4. P. 512—516.
10. Proteolytic Enzymes. A practical approach / Ed. R. Beynon and J.S. Bond. Oxford: Oxford Univ. Press, 2001. 340 pp.
11. Егоров Н.С., Ландау Н.С., Буяк Л.И., Крей-ер В.Г. Гидролитическая система нокардиоформной бактерии Nocardia minima в процессе ее роста, развития и дифференциации // Микробиология. 1991. Т. 60. N 4. С. 637—643.
12. Osmolovskiy A.A., Popova E.A., Kreyer V.G., Ba-ranova N.A., Egorov N.S. Fibrinolytic and collagenolytic activity of extracellular proteinases of the strains of micromy-cetes Aspergillus ochraceus L-1 and Aspergillus ustus 1 // Moscow Univ. Biol. Sci. Bull. 2016. Vol. 71. N 1. P. 62—66.
13. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding // Anal. Biochem. 1976. Vol. 72. N 1—2. P. 248—254.
14. Blieva R.K., Safuani Zh.E, Iskakbaeva Zh.A. Effect of various sources of nitrogen and carbon on the biosynthesis of proteolytic enzymes in a culture of Aspergillus awamori 21/96 // Applied Biochem. Microbiol. 2003. Vol. 39. N 2. P. 188—191.
15. Sharkova T.S., Kornienko E.I., Osmolovskii A.A., Kreier V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Morphological and physiological properties of the micromycete Arthrobotrys longa, a producer of Longolytin, a proteolytic complex with a thrombolytic effect // Microbiology. 2016. Vol. 85. N 2. P. 180—184.
RESEARCH ARTICLE
16. Dias B.A., Neves P.M.O.J., Furlaneto-Maia L, Fur-laneto M.C. Cuticle-degrading proteases produced by the en-tomopathogenic fungus Beauveria bassiana in the presence of coffee berry borer cuticle // Braz. J. Microbiol. 2008. Vol. 39. N 2. P. 301—306.
17. Umetsu H, Hishinuma K, Wake H, Ichishima E. Production, purification, and properties of serine carboxy-peptidase from Paecilomyces carneus // Curr. Microbiol. 1996. Vol. 33. N 1. P. 44—48.
18. Scorsetti A.C., Elfades L.A., Stenglein S.A., Cabello M.N., Pelizza S.A., Saparrat M.C. Pathogenic and enzyme activities of the entomopathogenic fungus Tolypocladium cyl-indrosporum (Ascomycota: Hypocreales) from Tierra del Fuego, Argentina // Rev. Biol. Trop. 2012. Vol. 60. N 2. P. 833—841.
19. Elad Y, Kapat A. The role of Trichoderma harzia-num protease in the biocontrol of Botrytis cinerea // Europ. J. Plant Pathol. 1999. Vol. 105. N 2. P. 177—183.
20. Kotlova E.K., Ivanova N.M., Yusupova M.P, Voy-ushina T.L., Ivanushkina N.E., Chestukhina G.G. Thiol-de-pendent serine proteinase from Paecilomyces lilacinus: Purification and catalytic properties // Biochemistry (Mosc.). 2007. Vol. 72. N 1. P. 117—123.
21. El-Aassar S.A., El-Badry H.M., Abdel-Fattah A.F. The biosynthesis of proteases with fibrinolytic activity in immobilized cultures of Penicillium chrysogenum H9 // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1990. Vol. 33. N 1. P. 26—30.
22. Osmolovskiy A.A., Zvonareva E.S., Kreyer V.G., Baranova N.A., Egorov N.S. Secretion of proteinases with fibrinolytic activity by micromycetes of the genus Aspergillus // Moscow Univ. Biol. Sci. Bull. 2018. Vol. 73. N 1. P. 39—42.
Поступила в редакцию
06.12.2019 г.
После доработки
07.01.2020 г.
Принята в печать
05.02.2020 г.
SECRETION OF PROTEINASE WITH ACTIVITY THAT IS SIMILAR TO ACTIVITY OF PROTEINS OF THE HEMOSTATIC SYSTEM BY MICROMYCETES
A.A. Lukianova1, E.I. Kornienko1, P.A. Vigand2, V.G. Kreyer1, A.V. Kurakov3,
A.A. Osmolovskiy1, *
1 Department of Microbiology, Faculty of Biology, Lomonosov Moscow State University, Leninskiye gory 1—12, Moscow, 119234, Russia;
2 Paris-Sacley University, Route de I'Orme aux Merisiers, RD 128, 91190, Saint-Aubin, France;
3 Department of Mycology and Algology, Faculty of Biology, Lomonosov Moscow State University,
Leninskiye gory 1—12, Moscow, 119234, Russia *e-mail: [email protected]
Using the chromogenic peptide substrates, proteolytic activity against proteins of the hemostasis system was studied in 9 micromycetes belonging to different ecological-trophic groups: phyto-, nemato-, myco- and entomopathogens, as well as human pathogens. It is shown that the investigated micromycetes secrete proteases with broad substrate specificity, but among them there are producers with pronounced both plasmin-like and urokinase (.Arthrobotrys longa 1, Sarocladium strictum 203) also as TAP-like (Purpureocillium
lilacinum k1) activity. The most active producer of proteases with fibrinolytic and activator activity to plasminogen activity was S. strictum 203 micromycete. The activity of proteinases formed by S. strictum 203 is about 50% of the fibrinolytic activity of plasminogen, which makes it a promising producer of fibrinolytic enzymes.
Keywords: micromycete proteinases, fibrinolytic enzymes, thrombolytic agents, plasmin-like activity, plasminogen activators, chromogenicpeptide substrates
Сведения об авторах
Лукьянова Анна Александровна — аспирант кафедры микробиологии биологического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова. Тел.: 8-495-939-30-33; e-mail: a.al.lukianova@ gmail.com
Корниенко Елена Игоревна — мл. науч. сотр. кафедры микробиологии биологического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова. Тел.: 8-495-939-30-33; e-mail: [email protected]
Виган Полин Анастасья (Pauline Vigand) — магистр университета Париж-Сакле. Тел.: +33 1 69 33 21 66; e-mail: [email protected]
Крейер Валериана Георгиевна — канд. биол. наук, науч. сотр. кафедры микробиологии биологического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова. Тел.: 8-495-939-30-33; e-mail: [email protected]
Кураков Александр Васильевич — докт. биол. наук, зав. кафедрой микологии и альгологии биологического факультета МГУ имени М.В.Ломоносова. Тел.: 8-495-939-54-82; e-mail: [email protected]
Осмоловский Александр Андреевич — канд. биол. наук, ст. преп. кафедры микробиологии биологического факультета МГУ имени М.В. Ломоносова. Тел.: 8-495-939-30-33; e-mail: [email protected]
