CC BY
13
УДК 619.5:6616-085.636.5
Касяненко О.1., к.вет.н., доцент (kas-oxana@mail.ru) Фотша Т.1., д.вет.н., професор ® Сумський нацюнальний аграрный утеерситет
РОЗРОБКА СЕРЕДОВИЩА ПОЖИВНОГО Щ1ЛЬНОГО ДЛЯ КУЛЬТИВУВАННЯ КАМП1ЛОБАКТЕР1Й
В статт1 наееден I проанал1зоеаш результати експериментальних дослгджень щодо еизначення I тдбору компонент1е пожиеного щтьного середоеища для культиеуеання Camylobacterspp, яке е найбыьш поешй м1р1 егдпоегдае пожиеним потребам камтлобактерш I дозеоляе скоротити час еияелення перших ознак росту колотй I забезпечити р1ст Campylobacterspp. е мШмальних поЫених концентращях. Отримат дат проанал1зоеат е пор1еняльному аспектI з контролем, результати дослгджень оброблен статистично.
Ключовi слова:камтлобактерп, контамтащя, культури
м1крооргатзм1екультиеуеання, пожиене середоеище, поаена доза, штам.
Вступ.Ефектившсть ветеринарно-саттарних дослщжень тушок та м'яса птищ за умов мжробюлопчного обЫменшня залежить як вщ методiв бактерюлопчних дослщжень, так i вщ якост поживних середовищ, що застосовуються. Так, при проведенш якiсного i кiлькiсного аналiзу ризиюв мiкробiологiчного забрудненя продукци птахiвництва важливу роль вiдiграють рiстзабезпечуючi фактори поживних середовищ. 1снуе значна кiлькiсть пропиЫв живильних середовищ для культивування камтлобактерш: з^зо-еритрит кров'яний агар, кампiлобакагар, середовища Буцлера, Скiрроу, Дойля, Престона, бактоагар компани
Недолiками всiх згаданих середовищ е повiльний рiст на них збудниюв кампiлобактерiй (через 48 годин культивування), необхщтсть додавання 5-10% дефiбринованоl кровi коня чи барана, сироватки кровi чи еритроцитiв, а також висока собiвартiсть. В зв'язку з використанням при цьому вихщно! сировини низько! якостi такi середовища не стандартт i часто не мають належних рiст забезпечуючи властивостей [3].
Метою наших дослщжень був пiдбiр компонента поживного щшьного середовища для культивування Camylobacterspp, яке в найбшьш повнiй мiрi вiдповiдае поживним потребам камтлобактерш.
Матер1али 1 методи. Пiдбiр та оптимiзацiю середовища проводили за критерiями забезпечення прискореного росту камтлобактерш, збереження бюлопчних властивостей iзолятiв при культивуваннi, а також максимальне накопичення виходу бактерiальноl маси.
® Касяненко О.1., Фотша Т.1., 2011
До основного складу дослщно! композици були пдабраш компоненти: протеозопептон, печшковий екстракт, дрiжджевий екстракт - в якост бшкових основ, натрш янтарнокислий (сукцинат натрiю) - стимулятор росту культур Campylobacterspp, натрiя хлорид - з метою регулювання осмотичного тиску та агар-агар.Ростовi властивост дослiдних варiантiв поживного середовища визначали з використанням тест-культур кампiлобактерiй, що рекомендованi Свропейською фармакопеею для бактерюлопчного контролю якостi поживних середовищ i мають стабiльнi властивостi, отриманi iз колекцiй ФГУ «ВГНКИ», м. Москва. В якост контролю використовували кампшобакагар компани „HiMedia" з додаванням 5% стерильно! дефiбриноаноl кровi барана.
Результати проведених дослщжень обробленi статистично за допомогою комп'ютерно! програми Microsoft Excel-2007 за методом Ст'юдента iз урахуванням середньоарифметичних величин та !х статистичних помилок, а також визначенням достовiрноl рiзницi показникiв, що порiвнювалися.
Результати дослщження. Було виготовлено декiлька варiантiв дослiдних поживних середовищ для культивування кампшобактерш при спiввiдношеннi компонентiв, що наведено у таблиц 1.
Таблиця 1
Склад та сшввщношення компоненпв дослвдних вар1ант1в поживного
середовища для культивування кампшобактерш
Сшввщношення компоненпв у вар1антах дослщного
Склад компоненпв середовища (мас. %)
вар1ант 1 вар1ант 2 вар1ант 3 вар1ант 4 вар1ант 5
протеозопептон 5,0 5,0 5,0 15,0 5,0
печшковий екстракт 10,0 5,0 15,0 5,0 5,0
др1жджевий екстракт 10,0 15,0 5,0 5,0 5,0
натрш янтарнокислий 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5
натр1я хлорид 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0
агар-агар 8,0 8,0 8,0 8,0 8,0
Вода дистильована до 1 л до 1 л до 1 л до 1 л до 1 л
Результати вивчення рктзабезпечуючих властивостей дослщних BapiaHTiB поживного середовища для культивування кампшобактерш представлеш в табл. 2. За результатами дослщження встановлено, що вс експеpиментaльнi вapiaнти дослiджувaного поживного середовища забезпечували рют штaмiв кaмпiлобaктеpiй, окpiм вapiнту 5, на якому не виявлено ознак росту Campylobacterspp в поавних дозах 100 та 10 КУО / мл. Слщ зазначити, що час реестраци ознак росту культур залежав вщ поЫвно! дози. З числа дослщжених вapiaнтiв ознаки росту кампшобактерш через 24 години культивування вияляли на 1-му, 3-му та 4-му вapiaнтaх дослщжуваного поживного середовища. Вже через 24 години виявлено на 1-му вapiaнтi реестрували рют в чашках Петpi з посiвною концентращею штaмiв C. Jejuni 70.2Т, C. coli 43477 C.lari в концентращях 109 - 107 КУО / мл.
Таблиця 2
Р1стзабезпечуюч1 властивосп дослщних вар1ант1в поживного
середовища для культивування камтлобактерш_
Варiант поживного fflTaM Час реестрацп росту камтлобактерш в залежносл вщ поавно! дози, доба
середовища
109 108 10' 106 105 104 103 102 10
jejuni 70.2T 1 1 1 2 2 2 3 4 5
coli 43477 1 1 1 2 2 3 4 4 4
1 lari 729 1 1 1 2 2 3 4 5 5
fetus 5396 2 2 3 3 3 4 5 5 5
bubulus 53103 2 2 3 3 3 3 4 5 5
jejuni 70.2T 2 2 2 2 2 3 3 4 4
coli 43477 2 2 2 2 3 3 3 3 4
2 lari 729 2 2 2 2 2 3 4 4 4
fetus 5396 2 3 4 4 5 5 5 6 6
bubulus 53103 2 3 4 4 5 5 5 5 5
jejuni 70.2T 1 1 1 1 2 2 3 3 4
coli 43477 1 1 1 1 2 2 3 4 4
3 lari 729 1 1 1 1 2 4 4 4 5
fetus 5396 2 2 2 3 3 4 4 5 5
bubulus 53103 2 2 2 2 3 3 4 5 5
jejuni 70.2T 1 1 1 1 1 1 1 1 1
coli 43477 1 1 1 1 1 1 1 2 2
4 lari 729 1 1 1 1 1 1 1 2 2
fetus 5396 1 1 1 2 2 3 3 4 4
bubulus 53103 1 1 1 1 2 2 3 4 4
jejuni 70.2T 3 3 3 4 4 5 5 - -
coli 43477 3 3 3 6 6 7 8 - -
5 lari 729 3 4 5 5 6 7 8 - -
fetus 5396 6 6 6 6 6 7 7 - -
bubulus 53103 6 6 6 6 6 7 8 - -
контроль jejuni 70.2T 1 1 1 1 2 2 2 3 3
coli 43477 1 1 1 1 2 3 2 3 3
lari 729 1 1 1 1 2 3 3 3 3
fetus 5396 1 1 1 2 3 3 4 4 5
bubulus 53103 1 1 1 2 3 3 4 4 4
Прим1тка: (1, 2)... - доба реестрацп росту культур MÎKpoopraHÎ3MÎB; (-) - вщсутшсть ознак росту культур MÎKpoopraHÎ3MÎB.
На 3-му вар1ант1 поживного середовища через 24 години культивування виявлено ркт Campylobacterspp. в чашках Петр1 з поавами C. Jejuni 70.2Т, C. coli 43477 та C.lari 729 в концентращях 109 - 10б КУО / мл. На 4-му вар1ант1 поживного середовища через 24 години культивування зареестровано рют вс1х штам1в камтлобактерш в дозах 109 - 107 . Ркт C. jejuni 70.2Т в чашках Петр1 з поЫвами 109- 10 КУО / мл, C. coli та 43477 C.lari в концентращях 109 - 105 КУО / мл, С. fetus 5396 в концентращях 109 - 107 КУО / мл та С. bubulus 53103 - в чашках Петр1 з поЫвною дозою 109 - 10б КУО / мл.
Згщно вимог Свропейсько! фармакопе! щодо бактерюлопчного контролю ростових властивостей поживних середовищ найкращi властивост виявлено на 4 BapiaHTi дослщжуваного поживного середовища, оскiльки ознаки росту штамiв кампiлобактерiй в чашках Петрi з посiвами в дозах 10 - 100 КУО / мл реестрували: для штамiв C. jejuni 70.2Т - через 1 добу культивування, для штамiв C. coli 43477 та C.lari 729 - через 3 доби культивування, С. fetus 5396 та С. bubulus 53103 - через 4 доби культиування.
На 4 варiантi ПС штами кампшобактерш проявили типовий ркт. Формувалися дрiбнi округлi колони Campylobacterspp. матового кольору, якi з часом культивування збшьшувалися в розмiрах до 2-4 мм. При мжроскопи мазюв в полi зору мiкроскопа тд iмерсiею спостерiгали дрiбнi полiморфнi, хаотично розмщеш тонкi палички. Рiвнi накопичення живих бактерiальних клiтин на 1-му, 3-му та 4-му варiантах поживного середовища визначали через 96 годин культивування в чашках Петрi з поЫвними концентрацiями 106 КУО / мл. 1нтенсившсть росту бактерiй та показник живих бактерiальних клiтин на 1 -му та 3-му варiантах поживного середовища було дещо нижче в порiвняннi з контрольним середовищем. На 4-му варiантi поживного середовища виявляли бшьш iнтенсивний рiст Campylobacterspp. та активне накопичення життездатних бактерiальних кл^ин в порiвняннi з контрольним (табл. 3).
Таблиця 3
Результати дослщження експериментальних вар1ант1в поживного середовища
щодо накопичення бактерiально'l' маси, М
Вар1ант поживного середовища Р1вш накопиченнямжробних клгтин, ?106 КУО / см3
jejuni 70.2Т coli 43477 lari 729 fetus 5396 bubulus 53103 сумш штам1в
1 7,7±0,2 5,4±0,2 5,5±0,2 4,1±0,2 4,5±0,1 5,45±0,2
3 8,1±0,1 7,3±0,1 7,6±0,1 5,5±0,2 6,4±0,2 6,98±0,1
4 11,4±0,1 8,9±0,1 9,2±0,1 6,7±0,2 7,3±0,1 8,93±0,2
контроль 7,9±0,2 7,3±0,2 7,5±0,2 5,7±0,2 4,9±0,1 6,71±0,1
Отже, поживне середовище iз стввщношенням компонентiв "варiант 4" в найбшьш повнiй мiрi вiдповiдаe поживним потребам кампшобактерш, дозволяе пiдвищити ростовi якост середовища, забезпечуе iнтенсивний рiст кампшобактерш, збереження бюлопчних властивостей iзолятiв при культивуванш, а також демонструе активне накопичення значно! кiлькостi живих бактерiальних клiтин Campylobacterspp. 8,93±0,21 10б КУО / см3, що в 1,3 рази перевищуе аналогiчний показник в контроле Виробничу перевiрку середовища поживного щшьного для культивуаннякампiлобактерiй iз стввщношенням компонент "варiант 4" проведено в умовах науково-контрольно! лаборатори ТзОВ «Бровафарма».
За результатами проведено! роботи одержано Патент Укра!ни на користу модель № 36641 «Поживне середовище для культивування кампшобактерш» вщ 10.11.2008 р., розробники: Касяненко О.1., Фотша Т.1.
Оформлена i зареестрована первинна нормативна документащя - Техшчш умови ТУ У 24.4-14332579-056:2010 «Середовище поживне щшьне для культивування кампшобактерш» (уперше).
Висновки.
1. Удосконалено бактерюлопчний контроль контамшаци тушок та м'яса птищ мiкроорганiзмами Campylobacterspp. на основi розробки поживного середовища за складом компонента: протеозопептону 15,0; печшкового ексракту 5,0; дрiжджевого екстракту 5,0; натрiяянтарнокислого 2,0; натрiю хлориду 3,0;агар-агару 8,0 та води дистильовано! до 1 л.
2.Розроблено поживне щiльне середовище для культивування кампшобактерш на основi дозволяе забезпечити рют Campylobacterspp. в поЫвних концентрацiях 109 - 10 КУО / мл, а першi ознаки росту виявити через 24 години за мжроаерофшьних умов культивування.
Л1тература
1. Мжробюлопя харчових продукта i кормiв для тварин. Загальш настанови мiкробiологiчних дослiджень (ISO 7218:1996, IDT) : ДСТУ ISO 7218:2008. - [Чиннийвщ 2011-01-01]. - К.: Держспоживстандарт Украши, 2008. -11 с. - (Нащональний стандарт Украши).
2.Мжробюлопя харчових продукта i кормiв для тварин. Горизонтальний метод виявлення i пiдрахункукампiлобактерiй (Campylobacterspp). Частина 1. Метод виявлення (ISO 10272-1:2006, IDT) : ДСТУ ISO 10272-1:2007. - [Чиннийвщ 2006-08-03]. - К.: Держспоживстандарт Украши, 2007 р. - 28 с. - (Нащональний стандарт Украши).
3.Шурышева Ж.Н. Оценка риска загрязнённости пищевых продуктов бактериями рода Campylobacter : автореф. дис. на соискание учен.степени канд. мед. наук : спец. 14.00.07 «Гигиена» / Ж.Н. Шурышева - Москва. 2007. - 23 с.
Summary
Inthe article there suited and analysed results of experimental researchesareinrelationtodeterminationandselectionofcomponentsofnourishingdenseenvi ronmentforcultivationofCamylobacterofspp, whichin the mostcomplete measureans wersthenourishingnecessitiesofKaMnwo6a.Kmepmandallowstoshortentimeofexposureofthe firstsignsofgrowthofcoloniesandprovidegrowthofCampylobacterofspp. inminimumsowingconcentrations. Gotin for mationisanalysedin a comparativeaspectwithcontrol, there sultso fresear chesaretreatedstatistically.
Рецензент - д.вет.н., проф. Головач П.1.
