CC BY
19
Раздел 2 Педиатрия
лирование лизокардиолипина (кардиолипин-фосфо-липид, ключевой компонент внутренней мембраны митохондрий) и наиболее активно экспрессируется в сердце, печени, почках, локализуясь в эндоплазмати-ческом ретикулуме.
Заключение. Учитывая высокую распространенность малых структурных хромосомных поломок у детей с врожденными пороками, информативно включение в протоколы ведения детей с сочетанными пороками сердца и почек цитогенетического анализа для более точного определения терапевтической и хирургической тактики относительно пациента.
ДНК-ДИАГНОСТИКА МЕТОДОМ NGS У ПАЦИЕНТА С ПРОГРЕССИРУЮЩИМ ВНУТРИПЕЧЕ-НОЧНЫМ ХОЛЕСТАЗОМ
Поляк М.Е., Бурмистров Д.С., Филин А.В., Заклязьминская Е.В.
ФГБНУ «Российский научный центр хирургии имени Б.В. Петровского», г. Москва
Введение. Внутрипеченочный семейный холестаз (ВСХ) — группа редких наследственных аутосомно-рецессивных заболеваний с частотой 1:50 000 — 1:100 000. Мутации в генах ATP8B1, ABCB11, ABCB4приводят к нарушению тока желчных кислот и к развитию внутрипеченочного холестаза I, II и III типов, соответственно. Клиническая картина разных видов ВСХ может перекрываться. Результаты ДНК-диагностики используются как для уточнения диагноза, так и для репродуктивного консультирования и пренатальной диагностики.
Цель исследования. Поиск мутаций в генах ATP8B1, ABCB11, JAG1, NOTCH2, UGT1A1 у пациента с фиброзом печени неясной этиологии и с предположением на семейный внутрипеченочный холестаз I типа. Материалы и методы. Пациент М. (5 лет) был обследован для проведения пункционной биопсии печени. Обследование включало УЗИ органов брюшной полости, общий и биохимический анализ крови, анализ уровня антител к вирусам гепатитов B, C, антител к ВИЧ. Методом ПЦР была проведена амплификация экзонных и прилегающих интронных областей генов ATP8B1, ABCB11, JAG1, NOTCH2, UGT1A1. Приготовление фрагментных библиотек и севенирование на платформе Ion Torrent осуществлялось по протоколу. Генетические варианты были также подтверждены секвенированием методом Сенгера. Оценка функционального значения выявленных вариантов проводилась с помощью биоинформатических ресурсов PolyPhen2, SIFT, SNPs&GO.
Результаты. В гене ATP8B1 был обнаружен генетический вариант с неустановленным клиническим значением p.A862T (c.G2586A) в гетерозиготном состоянии; в гене ABCB11 была выявлена мутация c.2178+1 G>A в гетерозиготном состоянии, приводящая к образованию преждевременного стоп-кодона, и генетический вариант с неустановленным клиническим значением p.V1112F (c.T3334G). Генетические варианты
р.А862Т и p.VШ2F оцениваются биоинформатиче-скими ресурсами как потенциально патогенные. Для подтверждения диагноза аутосомно-рецессивного заболевания обычно достаточно обнаружения 2-х патогенных замен. Выявлено 3 замены, однако для двух из них клиническое значение не известно. Точно установить тип ВСХ у данного пациента можно только после проведения семейного исследования. Заключение: методом NGS были одновременно проанализированы 2 гена, мутации в которых приводят к развитию семейного внутрипеченочного холестаза. Протяженность генов делает проведение ДНК-диагностики довольно дорогостоящим. Методы NGS могут оптимизировать ДНК-диагностику.
РОЛЬ БИОХИМИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ В ДИАГНОСТИКЕ БОЛЕЗНИ НИМАННА-ПИКА ТИП С.
Прошлякова Т.Ю.1, Захарова Е.Ю.1, Байдакова Г.В.1, Букина Т.М.1, Михайлова С.В.2, Ильина Е.С.2, Руденская Г.Е.1, Клюшников С.А.3 'ФГБНУ «Медико-генетический научный центр», г. Москва
2ФГБУ Российская детская клиническая больница
Минздрава России, г Москва
3ФГБНУ Научный центр неврологии, г. Москва
Введение. Болезнь Ниманна-Пика тип С (НПС) — наследственное аутосомно-рецессивное заболевание нервной системы из группы лизосомных болезней накопления. Диагностика заболевания сопряжена со многими трудностями, поэтому использование новых биохимических маркеров может существо ускорить постановку диагноза. В исследованиях лаборатории НБО МГНЦ составлен алгоритм диагностики болезни НПС и проведен анализ чувствительности и специфичности для 2х биохимических маркеров: оксистеролов (холестан-3,5,6-триола и 7-кетохолестерола) и хитотриозидазы. Материалы и методы. На основании селективного скрининга на болезнь НПС в работу было принято 200 образцов плазмы крови пациентов. Анализ биохимических маркеров оксистеролов проводился с помощью метода ВЭЖХ-МС/МС. Анализ активности хитотриозидазы проводился стандартным флюориме-трическим методом.
Результаты. Повышенные показатели биохимических маркеров обнаружены у 21 пациента из 200 исследуемых: у 6 пациентов повышена только концентрация оксистеролов, у 10 — повышена только активность хитотриозидазы, у 5 пациентов выявлены повышенные показатели обоих биохимических маркеров. Согласно разработанному в лаборатории алгоритму, на основании измеренных показателей, проведен полный анализ генов NPC1 и NPC2 для 11 пациентов с повышенной концентрацией оксисте-ролов. У 4 пациентов выявлены мутации в компаунд-гетерозиготном состоянии в гене NPC1. У всех 4 пациентов с подтвержденным диагнозом НПС были выявлены повышенные показатели обоих биохимических маркеров.
РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИКПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 4, 2015
ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ПЕДИАТРИИ И ДЕТСКОЙ ХИРУРГИИ
Выводы. Концентрация оксистеролов и активность хитотриозидазы — два биохимических маркера, определение которых может значительно упростить и ускорить постановку диагноза НПС.
ПЕРВЫЙ ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ ФЕРМЕНТО-ЗАМЕЩАЮЩЕЙ ТЕРАПИИ ПРЕПАРАТОМ ЭЛО-СУЛЬФАЗА АЛЬФА У РОССИЙСКОГО БОЛЬНОГО С СИНДРОМОМ МОРКИО A (МУКОПОЛИСАХА-РИДОЗ IV A ТИПА)
Семячкина А.Н.1, Давыдова Ю.И.1,.Харабадзе М.Н.1, Воскобоева ЕЮ.2, Новиков П.В.1, Захарова Е.Ю.2 'НИКИ педиатрии ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И.Пирогова Минздрава России, г. Москва 2ФГБУ «Медико-генетический научный центр» РАМН, г. Москва
Цель: показать положительные результаты, впервые проведенного в России, патогенетического лечения ферментозамещающим препаратом элосульфаза альфа больного с синдромом Моркио А (мукополисаха-ридоз IV А типа).
Препарат элосульфаза-альфа в России не зарегистрирован, поэтому решение о необходимости лечения по жизненным показаниям было получено на основании заключения Консилиума, составленного и подписанного группой ведущих специалистов, занимающихся разработкой и решением проблем мукополисахари-дозов. Закупка препарата и лечение ребенка проводились в соответствии с разрешением Росздравнадзора и правилами отпуска лекарств фирмой производителем «ВюМагт». Оплата препарата осуществлялась за счет средств регионального бюджета (Республика Соха). Ребенок Вадим М., 12 лет находится под наблюдением отделения психоневрологии и наследственных заболеваний с нарушением психики с 5 лет. Диагноз синдрома Моркио А был поставлен на основании совокупности фенотипических признаков и результатов лабораторных методов исследования (повышение показателей почечной экскреции кератансуль-фата, низкая активность лизосомального фермента ^ацетилгалактозамин -6-сульфатсульфатазы в лейкоцитах периферической крови: 0,01 нМоль/мг/17 час, при норме 6,6-19,2 нМоль/мг/17 час; наличие двух миссенс-мутаций в гене GALNS — р. Gly44Val/p. Trp230Arg, первая из которых выявлена впервые. Согласно инструкции элосульфаза альфа вводится из расчета 2 мг/кг массы тела. Препарат выпускается во флаконах емкостью 5 мл; 1 мл раствора содержит 1 мг элосульфазы альфа. Масса тела больного -31 кг, на этом основании расчетная доза элосульфазы альфа для ребенка составляет 62 мг, что соответствует 12 флаконам прапарата.
В клинической симптоматике мальчика наряду с типичными признаками синдрома Моркио А (карликовый рост, килевидная деформация грудной клетки 1-11 степени, вальгусная установка коленных суставов, короткая шея, увеличение объема и тугоподвижность крупных суставов и гиперподвижность мелких (меж-
фаланговых), грубоватые черты лица, умеренная гепа-тоспленомегалия, помутнение роговицы и тугоухость I степени, нормальный интеллект) зарегистрирована выраженная мышечная гипотония, приведшая ребенка к инвалидной коляске и обусловленная, вероятнее всего, отложением кератансульфата в цервикальном канале.
На фоне патогенетического лечения четкая положительная динамика стала отмечаться с 6-го внутривенного введения элосульфазы альфа. Она проявлялась в уменьшении степени выраженности грубоватых черт лица, улучшении самочувствия, исчезновении «четок» и «браслеток», нормализации размеров печени и селезенки, уменьшении мышечной гипотонии. Через 6 месяцев лечения больной стал опираться на ноги и мог стоять самостоятельно в течение нескольких минут, придерживаясь зз ходунки. Реакций на введение препарата не было. Ребенок продолжает получать лечение.
Таким образом, продемонстрирована эффективность патогенетической терапии ферментозамещающим препаратом элосульфаза альфа. Положительная динамика со стороны скелетных изменений, нарастание двигательной активности больного существенно повысило качество его жизни. Следует надеяться, что более раннее начало ферментозамещающего лечения поможет больным с синдромом Моркио A предотвратить формирование тяжелых инвалидизирующих расстройств, привязывающих их к инвалидной коляске.
КЛИНИЧЕСКАЯ, ГОРМОНАЛЬНАЯ И МОЛЕ-КУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ДВУХ СЛУЧАЕВ СИНДРОМА ОЛГРОВА
Тозлиян Е.В.1, Сухоруков В.С.1, Захарова Е.Ю.2 'Научно-исследовательский клинический институт педиатрии ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова, г. Москва
2Федеральное государственное бюджетное учреждение "Медико-генетический научный центр" Российской академии медицинских наук, г. Москва
Актуальность: синдром Олгрова (Allgrove syndrome) или синдром "трех А" (Triple-A syndrome, AAAS) - редкое моногенное заболевание с аутосомно-ре-цессивным типом наследования, поражением нескольких органов и систем. Классический синдром характеризуется триадой признаков: алакримия (отсутствие слез); ахалазия (нарушение моторики пищевода с функциональной обструкцией его дистальной части); аддисонизм (хроническая надпочечниковая недостаточность). Также характерны различные симптомы поражения центральной, периферической и вегетативной нервной системы, которые могут развиться через годы и даже десятилетия после ранних симптомов. В основе заболевания лежат дефекты гена AAAS, кодирующего регуляторный белок ALADIN (Alacrimia-Achalasia-aDrenal Insufficiency Neurologic disorder). Ген экспрессируется повсеместно во многих тканях организма, но наиболее высоко в надпочечни-
РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИКПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 4, 2015
