CC BY
15
ИННОВАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ПЕДИАТРИИ И ДЕТСКОЙ ХИРУРГИИ
ческими маркерами эффективности терапии ИТК и возможности без рецидивной отмены ИТК при ХМЛ.
ДИАГНОСТИКА МИТОХОНДРИАЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ УДЕТЕЙ
Николаева Е.А., Яблонская М.И., Харабадзе М.Н. Обособленное структурное подразделение ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова «Научно-исследовательский клинический институт педиатрии» Минздрава России, г. Москва
Цель: выделение критериев диагностики митохондри-альных заболеваний у детей.
Материалы и методы: комплекс методов клинического обследования, исследование биохимических маркеров митохондриальных заболеваний (КЩС, уровни лактата и коэнзима Q10 в крови, экскреция органических кислот), молекулярно-генетические методы. Результаты. В результате комплексного клинико-ла-бораторного обследования были выявлены 67 пациентов, страдающих митохондриальной патологией. У 2/3 из них (n=46) были выявлены заболевания, обусловленные дефектами митохондриальной ДНК (1-я группа), у 1/3 (n=21) — заболевания, вызванные мутациями ядерной ДНК (2-я группа). В 1-й группе у 1/2 пациентов был определен синдром Кернса-Сейра (полная и неполная формы), связанный с митохон-дриалной делецией. Более чем у 1/3 больных (n=16) выявлены синдромы MELAS и MERRF. Редко встречающиеся формы патологии (4 нозологические формы, в том числе синдром NARP) были установлены у отдельных пациентов (n=7). Во 2-й группе почти 1/2 больных (n=12) страдала подострой некротизирую-щей энцефаломиопатей Ли (Leigh); у 3 детей определен синдром LBSL, у 2 — синдром Барта. Более редко встречающиеся формы (4 формы, в том числе синдром Альперса) установлены у 4 пациентов. Ряд нозологических форм (синдромы Кернса-Сейра, MELAS, MERRF, NARP, Ли, LBSL, Барта, Альперса) имели достаточно четкие клинико-лабораторные кртерии диагностики — совокупность клинических признаков, данные МРТ, экскреции органических кислот. Эти больные обоснованно направлялись на молекуляр-но-генетическое исследование. Диагностика 5 форм патологии (энцефаломиопатия с кардиомиопатией, энцефаломиопатия с пирамидно-экстрапирамидным синдромом, офтальмоплегическая энцефаломиопа-тия, энцефаломиопатия с резкой задержкой физического развития, синдром деплеции митохондриальной ДНК 7) была связана с длительным дифференциально-диагностическим поиском, необходимостью моле-кулярно-генетического исследования и митохондри-альной и ядерной ДНК. Дополнительным критерием диагностики митохондриального заболевания служил низкий показатель коэнзима Q10 в крови. Выводы. Значимыми критериями диагностики ми-тохондриальных заболевний являются результаты клинического, нейрорадиологического и биохимического обследования, что во многих случаях позволяет
установить форму патологии и направить ребенка на определенное молекулярно-генетическое исследование.
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ГЕНОМНАЯ ГИБРИДИЗАЦИЯ У БОЛЬНЫХ С СОЧЕТАННЫМИ ВРОЖДЕННЫМИ ПОРОКАМИ СЕРДЦА И ПОЧЕК
Первунина Т.М.1-2, Костарева А.А.1, Злотина А.А.1, Моисеева О.М.1, Грехов Е.В.1, Морозов К.А.1, Вершинина Т.Л.1, Эрман М.В.2
'ФГБУ «Северо-Западный федеральный медицинский исследовательский центр» МЗ РФ, г. Санкт-Петербург, Россия 2ФГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный университет», г. Санкт-Петербург, Россия
Введение. Врожденные пороки сердца и почек имеют высокую распространенность у детей и оказывают серьезное негативное влияние на здоровье, развитие и функциональные способности. Возрастает значение генетических факторов, в частности, генетических мутаций, лидирующих в факторах риска аномалий развития.
Цель исследования. Изучение вклада генетических факторов в формирование сочетанных пороков сердца и почек у детей.
Материалы и методы. В исследование включено 25 детей с сочетанными врожденными пороками сердечно—сосудистой и мочевой систем в возрасте от 1 месяца до 18 лет (средний возраст 5,8 лет); мальчиков — 16, девочек — 9. Полногеномный высокоразрешающий цитогенетический анализ проведен на секвенаторе нового поколения. Сравнительная геномная гибридизация проводилась на сканере Agilent Tecknology. Результаты: У 3 из 25 детей выявлены известные хромосомные аномалии (1 — трисомия 21, 2 — делеция DiGeorge chromosome region). При этом необходимо отметить отсутствие у этих пациентов характерных для данных синдромом фенотипов. Еще у 5 из 25 больных выявлены микроструктурные аномалии хромосом, приводящие к изменениям в следующих генах:
1 — дупликация в гене DHFR (дигидрофолат—ре-дуктаза), являющемся ключевым ферментом во внутриклеточном метаболизме фолатов, участвующий в регуляции экспрессии некоторых транскипционных факторов (NKX2.5, TBX1, TBX20), необходимых для формирования сердца в эмбриогенезе.
2 — дупликация гена ZNF649 — транскрипционный фактор — с доменом типа «Цинковые пальцы», участвующий в кардиогенезе и нефрогенезе.
3 — дупликация гена NPHP1 Nephrocystin 1, ассоциированного с различными вариантами цилиопатий.
4 — дупликация гена NNT (nicotinamide nucleotide transhydrogenase), который является белком внутренней мембраны митохондрий и компонентом электрон—транспортной дыхательной цепи.
5 — делеция LCLAT1 (lysocardiolipin acyltransferase 1). Продукт экспрессии данного гена катализирует аци-
РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИКПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 4, 2015
Раздел 2 Педиатрия
лирование лизокардиолипина (кардиолипин-фосфо-липид, ключевой компонент внутренней мембраны митохондрий) и наиболее активно экспрессируется в сердце, печени, почках, локализуясь в эндоплазмати-ческом ретикулуме.
Заключение. Учитывая высокую распространенность малых структурных хромосомных поломок у детей с врожденными пороками, информативно включение в протоколы ведения детей с сочетанными пороками сердца и почек цитогенетического анализа для более точного определения терапевтической и хирургической тактики относительно пациента.
ДНК-ДИАГНОСТИКА МЕТОДОМ NGS У ПАЦИЕНТА С ПРОГРЕССИРУЮЩИМ ВНУТРИПЕЧЕ-НОЧНЫМ ХОЛЕСТАЗОМ
Поляк М.Е., Бурмистров Д.С., Филин А.В., Заклязьминская Е.В.
ФГБНУ «Российский научный центр хирургии имени Б.В. Петровского», г. Москва
Введение. Внутрипеченочный семейный холестаз (ВСХ) — группа редких наследственных аутосомно-рецессивных заболеваний с частотой 1:50 000 — 1:100 000. Мутации в генах ATP8B1, ABCB11, ABCB4приводят к нарушению тока желчных кислот и к развитию внутрипеченочного холестаза I, II и III типов, соответственно. Клиническая картина разных видов ВСХ может перекрываться. Результаты ДНК-диагностики используются как для уточнения диагноза, так и для репродуктивного консультирования и пренатальной диагностики.
Цель исследования. Поиск мутаций в генах ATP8B1, ABCB11, JAG1, NOTCH2, UGT1A1 у пациента с фиброзом печени неясной этиологии и с предположением на семейный внутрипеченочный холестаз I типа. Материалы и методы. Пациент М. (5 лет) был обследован для проведения пункционной биопсии печени. Обследование включало УЗИ органов брюшной полости, общий и биохимический анализ крови, анализ уровня антител к вирусам гепатитов B, C, антител к ВИЧ. Методом ПЦР была проведена амплификация экзонных и прилегающих интронных областей генов ATP8B1, ABCB11, JAG1, NOTCH2, UGT1A1. Приготовление фрагментных библиотек и севенирование на платформе Ion Torrent осуществлялось по протоколу. Генетические варианты были также подтверждены секвенированием методом Сенгера. Оценка функционального значения выявленных вариантов проводилась с помощью биоинформатических ресурсов PolyPhen2, SIFT, SNPs&GO.
Результаты. В гене ATP8B1 был обнаружен генетический вариант с неустановленным клиническим значением p.A862T (c.G2586A) в гетерозиготном состоянии; в гене ABCB11 была выявлена мутация c.2178+1 G>A в гетерозиготном состоянии, приводящая к образованию преждевременного стоп-кодона, и генетический вариант с неустановленным клиническим значением p.V1112F (c.T3334G). Генетические варианты
р.А862Т и p.VШ2F оцениваются биоинформатиче-скими ресурсами как потенциально патогенные. Для подтверждения диагноза аутосомно-рецессивного заболевания обычно достаточно обнаружения 2-х патогенных замен. Выявлено 3 замены, однако для двух из них клиническое значение не известно. Точно установить тип ВСХ у данного пациента можно только после проведения семейного исследования. Заключение: методом NGS были одновременно проанализированы 2 гена, мутации в которых приводят к развитию семейного внутрипеченочного холестаза. Протяженность генов делает проведение ДНК-диагностики довольно дорогостоящим. Методы NGS могут оптимизировать ДНК-диагностику.
РОЛЬ БИОХИМИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ В ДИАГНОСТИКЕ БОЛЕЗНИ НИМАННА-ПИКА ТИП С.
Прошлякова Т.Ю.1, Захарова Е.Ю.1, Байдакова Г.В.1, Букина Т.М.1, Михайлова С.В.2, Ильина Е.С.2, Руденская Г.Е.1, Клюшников С.А.3 'ФГБНУ «Медико-генетический научный центр», г. Москва
2ФГБУ Российская детская клиническая больница
Минздрава России, г Москва
3ФГБНУ Научный центр неврологии, г. Москва
Введение. Болезнь Ниманна-Пика тип С (НПС) — наследственное аутосомно-рецессивное заболевание нервной системы из группы лизосомных болезней накопления. Диагностика заболевания сопряжена со многими трудностями, поэтому использование новых биохимических маркеров может существо ускорить постановку диагноза. В исследованиях лаборатории НБО МГНЦ составлен алгоритм диагностики болезни НПС и проведен анализ чувствительности и специфичности для 2х биохимических маркеров: оксистеролов (холестан-3,5,6-триола и 7-кетохолестерола) и хитотриозидазы. Материалы и методы. На основании селективного скрининга на болезнь НПС в работу было принято 200 образцов плазмы крови пациентов. Анализ биохимических маркеров оксистеролов проводился с помощью метода ВЭЖХ-МС/МС. Анализ активности хитотриозидазы проводился стандартным флюориме-трическим методом.
Результаты. Повышенные показатели биохимических маркеров обнаружены у 21 пациента из 200 исследуемых: у 6 пациентов повышена только концентрация оксистеролов, у 10 — повышена только активность хитотриозидазы, у 5 пациентов выявлены повышенные показатели обоих биохимических маркеров. Согласно разработанному в лаборатории алгоритму, на основании измеренных показателей, проведен полный анализ генов NPC1 и NPC2 для 11 пациентов с повышенной концентрацией оксисте-ролов. У 4 пациентов выявлены мутации в компаунд-гетерозиготном состоянии в гене NPC1. У всех 4 пациентов с подтвержденным диагнозом НПС были выявлены повышенные показатели обоих биохимических маркеров.
РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИКПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 4, 2015
