Днк-диагностика методом NGS у пациента с прогрессирующим внутрипеченочным холестазом Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»

Раздел 2 Педиатрия

лирование лизокардиолипина (кардиолипин-фосфо-липид, ключевой компонент внутренней мембраны митохондрий) и наиболее активно экспрессируется в сердце, печени, почках, локализуясь в эндоплазмати-ческом ретикулуме.

Заключение. Учитывая высокую распространенность малых структурных хромосомных поломок у детей с врожденными пороками, информативно включение в протоколы ведения детей с сочетанными пороками сердца и почек цитогенетического анализа для более точного определения терапевтической и хирургической тактики относительно пациента.

ДНК-ДИАГНОСТИКА МЕТОДОМ NGS У ПАЦИЕНТА С ПРОГРЕССИРУЮЩИМ ВНУТРИПЕЧЕ-НОЧНЫМ ХОЛЕСТАЗОМ

Поляк М.Е., Бурмистров Д.С., Филин А.В., Заклязьминская Е.В.

ФГБНУ «Российский научный центр хирургии имени Б.В. Петровского», г. Москва

Введение. Внутрипеченочный семейный холестаз (ВСХ) — группа редких наследственных аутосомно-рецессивных заболеваний с частотой 1:50 000 — 1:100 000. Мутации в генах ATP8B1, ABCB11, ABCB4приводят к нарушению тока желчных кислот и к развитию внутрипеченочного холестаза I, II и III типов, соответственно. Клиническая картина разных видов ВСХ может перекрываться. Результаты ДНК-диагностики используются как для уточнения диагноза, так и для репродуктивного консультирования и пренатальной диагностики.

Цель исследования. Поиск мутаций в генах ATP8B1, ABCB11, JAG1, NOTCH2, UGT1A1 у пациента с фиброзом печени неясной этиологии и с предположением на семейный внутрипеченочный холестаз I типа. Материалы и методы. Пациент М. (5 лет) был обследован для проведения пункционной биопсии печени. Обследование включало УЗИ органов брюшной полости, общий и биохимический анализ крови, анализ уровня антител к вирусам гепатитов B, C, антител к ВИЧ. Методом ПЦР была проведена амплификация экзонных и прилегающих интронных областей генов ATP8B1, ABCB11, JAG1, NOTCH2, UGT1A1. Приготовление фрагментных библиотек и севенирование на платформе Ion Torrent осуществлялось по протоколу. Генетические варианты были также подтверждены секвенированием методом Сенгера. Оценка функционального значения выявленных вариантов проводилась с помощью биоинформатических ресурсов PolyPhen2, SIFT, SNPs&GO.

Результаты. В гене ATP8B1 был обнаружен генетический вариант с неустановленным клиническим значением p.A862T (c.G2586A) в гетерозиготном состоянии; в гене ABCB11 была выявлена мутация c.2178+1 G>A в гетерозиготном состоянии, приводящая к образованию преждевременного стоп-кодона, и генетический вариант с неустановленным клиническим значением p.V1112F (c.T3334G). Генетические варианты

р.А862Т и p.VШ2F оцениваются биоинформатиче-скими ресурсами как потенциально патогенные. Для подтверждения диагноза аутосомно-рецессивного заболевания обычно достаточно обнаружения 2-х патогенных замен. Выявлено 3 замены, однако для двух из них клиническое значение не известно. Точно установить тип ВСХ у данного пациента можно только после проведения семейного исследования. Заключение: методом NGS были одновременно проанализированы 2 гена, мутации в которых приводят к развитию семейного внутрипеченочного холестаза. Протяженность генов делает проведение ДНК-диагностики довольно дорогостоящим. Методы NGS могут оптимизировать ДНК-диагностику.

РОЛЬ БИОХИМИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ В ДИАГНОСТИКЕ БОЛЕЗНИ НИМАННА-ПИКА ТИП С.

Прошлякова Т.Ю.1, Захарова Е.Ю.1, Байдакова Г.В.1, Букина Т.М.1, Михайлова С.В.2, Ильина Е.С.2, Руденская Г.Е.1, Клюшников С.А.3 'ФГБНУ «Медико-генетический научный центр», г. Москва

2ФГБУ Российская детская клиническая больница

Минздрава России, г Москва

3ФГБНУ Научный центр неврологии, г. Москва

Введение. Болезнь Ниманна-Пика тип С (НПС) — наследственное аутосомно-рецессивное заболевание нервной системы из группы лизосомных болезней накопления. Диагностика заболевания сопряжена со многими трудностями, поэтому использование новых биохимических маркеров может существо ускорить постановку диагноза. В исследованиях лаборатории НБО МГНЦ составлен алгоритм диагностики болезни НПС и проведен анализ чувствительности и специфичности для 2х биохимических маркеров: оксистеролов (холестан-3,5,6-триола и 7-кетохолестерола) и хитотриозидазы. Материалы и методы. На основании селективного скрининга на болезнь НПС в работу было принято 200 образцов плазмы крови пациентов. Анализ биохимических маркеров оксистеролов проводился с помощью метода ВЭЖХ-МС/МС. Анализ активности хитотриозидазы проводился стандартным флюориме-трическим методом.

Результаты. Повышенные показатели биохимических маркеров обнаружены у 21 пациента из 200 исследуемых: у 6 пациентов повышена только концентрация оксистеролов, у 10 — повышена только активность хитотриозидазы, у 5 пациентов выявлены повышенные показатели обоих биохимических маркеров. Согласно разработанному в лаборатории алгоритму, на основании измеренных показателей, проведен полный анализ генов NPC1 и NPC2 для 11 пациентов с повышенной концентрацией оксисте-ролов. У 4 пациентов выявлены мутации в компаунд-гетерозиготном состоянии в гене NPC1. У всех 4 пациентов с подтвержденным диагнозом НПС были выявлены повышенные показатели обоих биохимических маркеров.

РОССИЙСКИЙ ВЕСТНИКПЕРИНАТОЛОГИИ И ПЕДИАТРИИ, 4, 2015