CC BY
0
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2022; ТОМ 67; №2 |
ABL-EAC и предложенными нами (ABL-N). Было протестировано 40 проб кДНК, полученных при разном выделении РНК, в том числе 8 архивных со сроком хранения более б мес. Показано, что пороговые циклы амплификации в пробах со свежевыде-ленной РНК по методу Хомчинского с праймерами ABL-EAC и ABL-N совпадают. Однако в архивной кДНК и РНК из замороженных лейкоцитов пороговый цикл амплификации с праймерами ABL-N значительно падает. Снижается и уровень химерных транскриптов. При этом амплификация с праймерами ABL ЕАС гена ABL1 сохраняется. Это свидетельствует о деградации в архивных образцах РНК и кДНК, в то время как уровень геномной ДНК снижается незначительно. Таким образом, есть принципиальные различия при подсчете уровня химерного транскрипта относительно экспрессии гена ABL1, измеренной с использованием праймеров ЕАС и описанных нами.
Заключение. Предложенные праймеры для амплификации контрольного гена ABL1 позволяют, в отличие от рекомендуемых
ЕАС, получать адекватное соотношение пороговых циклов амплификации химерного транскрипта и контрольного гена независимо от наличия примесей геномной ДНК в препаратах РНК, выделенных из клеток.
Таблица. Последовательности праймеров для выявления РНК гена АВ1.1 и длины фланкируемых ими фрагментов в геноме человека и кДНК
Название Последовательность праймеров (5'-3') ДлинаДНК, нукл Длина кДНК, нукл
ABL1 ЕАС прямой* TGGAGATAACACTCTAAGCATAACTAAAGGT 687 124
ABL1 ЕАС обратный* GATGTAGTTGCTTGGGACCCA
Зонд ABL1 ЕАС* R6G-CCATTTTTGGTTTGGGCTTCACACCATT-RTQ1
ABL1 N прямой ** GTCCACACTGCAATGTTTTTGTG 139708 100
ABL1 N обратный ** GAGTTCCAACGAGCGGCTTCACTC
Зонд ABL1 N ** FAM-CCAGTAGCATCTGACTTTGAGCCTCAG-RTQ1
* ABL ЕАС- праймеры, предложенные ассоциацией ЕАС
** ABL N- праймеры, предложенные авторами, амплифицирующие только кДНК, ноне геномную ДНК
Фёдорова А. В., Клясова Г. А., Хрульнова С. А.
ДЕТЕКЦИЯ ENTEROCOCCUS SPP., ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ГЕМОКУЛЬТУРЫ, ПРИ РАЗНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ СИСТЕМЫ КРОВИ
и» Минздрава России
ФГБУ «НМИЦ гематологи
Введение. Частота детекции Enterococcuj spp.y больных опухолями системы крови может варьировать в зависимости от варианта гематологического заболевания.
Цель работы. Изучить частоту Enterococcuj spp., выделенных из гемокультуры, при разных опухолях системы крови.
Материалы и методы. Частота детекции Enterococcuj spp. из гемокультуры была изучена в ходе проспектового многоцентрового исследования (2016—2020 гг.) у больных при разных гемобласто-зах. Резистентность к ванкомицину у Enterococcuj spp. определяли методом серийных микроразведений в бульоне (CLSI, 2020 г.). Гены резистентности к ванкомицину (vanA и vanB) определяли методом ПЦР.
Результаты и обсуждение. Всего было исследовано 145 эпизодов инфекций кровотока, вызванных Enterococcuj spp. Среди заболеваний системы крови преобладали острые миелоидные лейкозы (ОМЛ) и составили 42,7% (п=62), далее следовали неходжкинские лимфомы (НХЛ) — 22,1% (п=32), острые лимфобластные лейкозы (ОЛЛ) — 14,5% (п=21). Другие заболевания крови составили 20,7% (п=30). Среди 145 Enterococciu spp. были 118 (81,4%) E.faecium и 27 (18,6%) Е. fa.eca.LL). Изоляты Е. faecium преобладали при всех вариантах гемотологических заболеваний, составляли от 73,3% до 87,1% при ОМЛ (табл.). Резистентыми к ванкомицину были 31,4% (n=37) Е. faecium, из которых 81,1% (п=30) имели генотип устойчивости vanA и 18,9% (п=7) — генотип vanB. Инфекции кровотока, вызванные ванкомицин-резистентными Е. faecium, были детектированы достоверно чаще при ОМЛ (32,3%) в сравнении с ОЛЛ (9,5%, р=0,05). Частота детекции из гемокультуры
генотипа резистентности vanA среди ванкомицин-резистентных Е./аесшт была значимо выше при ОМЛ (27,4%) в сравнении с ОЛЛ (4,8%, р=0,03).
Заключение. При всех заболеваниях системы крови, вызванных Е^егососсил врр., преобладали Е. /аесшт, частота детекции которых была несколько чаще у больных ОМЛ (87,1%). Ванкомицин-резистентные Е. /аесшт достоверно чаще регистрировали у больных ОМЛ (32,3%) в сравнении с больными ОЛЛ (9,5%).
Таблица. Частота детекции ЕЫвгососсив эрр. из гемокультуры у боль-ныхс разными гематологическими заболеваниями
Показатель ОМЛ, п=62 НХЛ, п=32 ОЛЛ, п=21 Другие, п=30
E.faecium (п=118) 54(87,1%) 26 (81,3%) 16 (76,2%) 22 (73,3%)
Ванкомицин-резистентные Е. faecium, (п=37) /1=0.05 7 (23,3%)
20 (32,3%) 8 (25%) 2 (9,5%)
Генотип резистентности к ванкомицину vanA (п=30) 17(27,4%) /|=0.03 7(21,9%) I 1 (4,8%) 5(16,7%)
Федуленко Д. А.1, Жибурт Е. Б.2, Евсеенко О. В.1
РЕЗУЛЬТАТЫ СКРИНИНГА НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ ГЕМОТРАНСМИССИВНЫХ ВИРУСОВ У ДОНОРОВ КРОВИ
1ГКУЗ «Центр крови Ленинградской области», 2НМХЦ имени Н.И. Пирогова
Введение. Одной из главных задач трансфузиологии является инфекционная безопасность. Серологические методы исследования позволили значительно сократить риск передачи гемотрансмиссив-ных вирусов реципиенту, однако не решили окончательно проблему «серологического окна». Внедрение МАТ-тестирования в рутинную практику обследования доноров снизило остаточный риск передачи возбудителей. Но не ясен вопрос частоты выявления нуклеиновых кислот вирусов гемотрансмиссивных инфекций у доноров, а также частоты выявления образцов крови в «серологическом окне».
Цель работы. Исследовать частоту выявления нуклеиновых кислот вирусов гемотрансмиссивных инфекций в период «серологического окна» в образцах крови доноров.
Материалы и методы. Для исследования были взяты данные обследования доноров Центра крови Ленинградской области
с 2011 по 2021 год. Было обследовано 122 576 доноров. Доноры обследованы в установленном законодательством порядке на выявление ДНК гепатита В, РНК гепатита С и РНК ВИЧ, методом полимеразной цепной реакции в минипулах из б образцов. При получении положительного результата образцы были обследованы повторно дважды в единичных постановках. Обследованные были разделены на первичных и повторных доноров. У всех доноров учитывали возраст. У повторных — количество дней после предыдущей донации и количество донаций в анамнезе.
Результаты и обсуждение. Положительные результаты NAT-тecтиpoвaния при отрицательных серологических тестах (т.е. в «период окна») были получены у 44 доноров. Частота выявления маркеров гемотрансмиссивных инфекций
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
при КАТ-тестировании — 4,67 случая на 10 ООО первичных доноров, и 3,05 случая на 10 ООО повторных доноров. ДНК гепатита В чаще была выявлена у первичных доноров. Частота выявления РНК гепатита Су первичных и повторных доноров не отличается. РНК ВИЧ была выявленау повторных доноров. В целом ДНК гепатита В была выявлена чаще, чем РНК гепатита С, а РНК ВИЧ — реже РНК гепатита С. Доноры, у которых была обнаружена ДНК гепатита В, на 16,5 года старше лиц, у которых выявлена РНК гепатита С. Отличийу повторных доноров по количеству дней от последней донации и количеству донаций не выявлено.
Заключение. 1. У первичных доноров частота выявления нуклеиновых кислот гемотрансмиссивных инфекций выше, чем у повторных доноров. 2. Чаще у доноров в Ленинградской области выявляется ДНК гепатита В, затем по частоте РНК гепатита С и ВИЧ соответственно. 3. Возраст доноров с выявленной ДНК гепатита В позволяет предполагать выявление скрытых (оккультных) форм гепатита В. 4. Частота выявления маркеров гемо-транмиссивных инфекций среди доноров Ленинградской области на 1—2 порядка выше аналогичных результатов данных международного исследования.
Хайретдинов Р. К., Данилова О. Е., Гиматдинова Г. Р., Давыдкин И. Л., Кузьмина Т. П.
ЭНДОТЕЛИАЛЬНАЯ ДИСФУНКЦИЯ У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ПАЦИЕНТОВ С ВЫСОКОАКТИВНОЙ АНТИВИРУСНОЙ
ТЕРАПИЕЙ И БЕЗ НЕЕ
ФГБОУ ВО СамГМУ
Введение. Ишемические сердечно-сосудистые осложнения все чаще возникают в период наблюдения за пациентами с длительно протекающей ВИЧ-инфекцией. В условиях реальной клинической практики актуален вопрос о том, с чем связаны осложнения: с инфекцией или применением ВААРТ.
Цель работы. Изучить изменения маркеров эндотели-альной дисфункции, связанных с развитием атеросклероза у ВИЧ-инфицированных пациентов, и оценить роль инфекции или ВААРТ вусловиях данных изменений.
Материалы и методы. Ретроспективно было изучено 56 ВИЧ-инфицированных пациентов (средний возраст 38,5±4,5 года, мужчин п=41/25%) до и через 3, б, 12 и 24 месяца после начала ВААРТ ингибиторами протеазы (п=28) или ненуклеозидными ингибиторами обратной транскриптазы (п=28), сравнивая с контрольной здоровой группой пациентов (п=28), а также с первично выявленными ВИЧ-инфицированными пациентами (п=10), не получавшими ВААРТ, сопоставимыми по полу и возрасту. Исходное количество СБ4+ клетоку ВИЧ-инфицированных пациентов составляло 206,6± 196,6 клеток / мкл без существенных различий между пациентами, получавшими ННИОТ, и пациентами, получавшими ИП (р=0,16). Вторая сравниваемая группа, для которой не было начато лечение ВААРТ, имела количество С04+ клеток 630,2±261,6 клеток / мкл и значительно более низкую вирусную нагрузку, чем 56 пациентов,
получавших лечение (исходный уровень (3,87 ± 0,75 против 4,96 ± 0,52 log 10 копий / мл плазмы, р<0,001)).
Результаты и обсуждение. Во время лечения ВААРТ уровни sP-селектина и VWF в плазме постепенно снижались, но не до нормального уровня, через 24 месяца (sP-селектина с 395±12,1 до 294±21,5 ng/ml; VWF 195±11,6 до 172±14,1 u/dl) Во второй группе пациентов с ВИЧ-инфекцией, которым не требовалась антиретровирусная терапия, уровни sP-селектина и VWF в плазме на момент постановки диагноза также были выше, чем в контрольной здоровой группе, но оставались повышенными после 12 месяцев инфицирования и отличались от наблюдаемого у пациентов, получавших ВААРТ. Уровни VWF в группе негативных ВИЧ-инфицированных пациентов, не нуждающихся в ВААРТ, также были выше по сравнению со здоровым контролем (193,1±41,4 против 106,2±8,5 (р<0,05). Однако, в отличие от пациентов, получавших ВААРТ, у этих пациентовуровни VWF оставались повышенными после 12 месяцев отсутствия лечения инфекции.
Заключение. Исходя из полученных данных, можно сделать выводы о том, что непосредственно ВИЧ-инфекция, а не ее фармакологическое лечение, вызывает увеличение растворимых маркеров эндотелиальной дисфункции. Кратковременное лечение ВААРТ снижает некоторые параметры эндотелиальной дисфункции без различий между ИП и ННИОТ.
Хамаганова Е. Г., Гапонова Т.В., Паровичникова Е.Н.
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПО РОССИЙСКОМУ ИНФОРМАЦИОННОМУ РЕСУРСУ ДЛЯ ПОИСКА НЕРОДСТВЕННЫХ ДОНОРОВ
ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Секвенирование нового поколения (NGS — next generation sequencing) значительно увеличило скорость прочтения последовательностей ДНК, производительность HLA-типирования и существенно снизило стоимость типиро-вания. NGS позволяет получить полную последовательность большинства генов HLA — выполнять типирование на уровне аллельного разрешения. Совпадение на аллельном уровне (включая полиморфизмы в нетранслируемых областях генов) больного и донораулучшает результаты трансплантации аллогенных гемо-поэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) по сравнению с результатами алло-ТГСК с подбором на уровне высокого разрешения. Подбор донора сучетом низко экспрессируемых HLA-генов (DRB3/DRB4/DRB5/DOA1/DOB1/DPA1/DPB1) также улучшает результаты алло-ТГСК.
Цель работы. Анализ результатов HLA-типирования доноров регистра «НМИЦ гематологии», проведенного с помощью NGS, и экспонирования результатов в информационном ресурсе BMDS.info.
Материалы и методы. С января 2020 г. по октябрь 2021 г. лабораторией тканевого типирования ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России методом NGS HLA-генотипировано 5900 доноров регистра «НМИЦ гематологии» при использовании платформы MiSeq (Illumina, США). 3550 доноров генотипировано
с помощью 8-локусного (A/B/C/DRB1/DRB3/DRB4/DRB5/DOB1) набора AllType NGS Amplification Kits (One Lambda, США), остальные — с помощью 11-локусного (A/B/C/DRB1/DRB3/ DRB4/DRB5/DOA1/DOB1/DPA1/DPB1) набора того же производителя. Анализ полученных последовательностей HLA-генов проводили при помощи компьютерной программы TypeStream Visual Software (TSV) (One Lambda, США).
Результаты и обсуждение. Для HLA-генов класса I — HLA-A, -В, -С в подавляющем большинстве случаев результаты типирования получены науровне отдельного аллеля, например А*01:01:01:01 или ВМ4:03:02. Выявлено значительное число аллелей, отличающихся от имеющихся в базе данных аллелей HLA-генов — IPD-IMGT/HLA, однонуклеотидными заменами. Несколько аллелей генов HLA-B и -С отличались заменами в UTR-областях генов и не могли быть отдифференцированы друг от друга, например В*18:01:01:02/05 или С*07:01:01:01/16. Для HLA-генов класса II результаты типирования варьировали по уровню разрешения от высокого до аллельного. Результаты типирования всех доноров были внесены в базу данных BMDS.info (НИИ ДОГиТ им. P.M. Горбачевой) в соответствии с возможностями данного информационного ресурса, т.е. по пяти HLA-генам — А, В, -С, -DRB1,-DOB1 с максимально возможным разрешением на уровне 3-го поля (т.е., по последовательностям экзонов).
