CC BY
0
| ГЕМАТОЛОГИЯ И ТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2022; ТОМ 67; №2 |
широкое применение при лечении тяжелых заболеваний различного профиля.
Цель работы. В 2008 году получено регистрационное удостоверение на выпуск Габриглобина®-1§0 в форме «раствор для ин-фузий». В 2009 году производился выпуск Габриглобина®-1§О в сухой и жидкой форме. В связи с запросом медицинских организаций и удобством применения лекарственного препарата в растворе для инфузий было принято решение о прекращении выпуска сухого габриглобина®-1^0.
Торговое наименование: Габриглобин®-1^0
.Международное непатентованное, или группировочное, или химическое наименование: иммуноглобулин человека нормальный.
Лекарственная форма: раствор для инфузий.
Материалы и методы. Ведется постоянная работа по усовершенствованию технологического процесса выпуска препарата Габриглобин®-1^0. Качество препарата соответствует нормативным требованиям. Внедрена и активно работает система фарма-конадзора.
Результаты и обсуждение. Габриглобин®-1^0 нашел широкое применение в качестве заместительной терапии при первичных и вторичных иммунодефицитах (врожденная гипо- и агамма-гло-булинемия, множественная миелома, хронический лимфоидный лейкоз, врожденный синдром приобретенного иммунодефицита
человека (СПИД) у детей и многие другие заболевания). Особое место в повседневной практике клинических подразделений стационаров занимает применение Габриглобина®-1^0 при тяжелых формах бактериальных и вирусных инфекций. Это пневмонии, сепсис, состояния пациентов после перенесенных ДТП, послеоперационные осложнения. Препарат Габриглобин®-1^0 доказал свою эффективность при лечении пациентов с тяжелой формой новой коронавирусной инфекции. Кроме внутривенного иммуноглобулина ОБУЗ «ИОСПК» выпускает целый ряд препаратов крови: Альбумин 10%, раствор для инфузий, выпуск с 1972 г.; Альбумин, раствор для инфузий 20%, выпуск с 2009 г.; Иммуноглобулин человека антирезус ККо(О), раствор для внутримышечного введения 300 мкг/доза, выпуск с 1979 года. ОБУЗ «ИОСПК» является единственным производителем антирезусно-го иммуноглобулина в Российской Федерации. Иммуноглобулин человека антистафилококковый, раствор для внутримышечного введения 100 МЕ, выпуск с 1981 года. Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения, выпуск с 1975 года.
Заключение. Спрос на препарат велик, но производственные возможности ограничены в связи с недостаточным количеством производственных мощностей. Планы:увеличение объемов производства Габриглобина®-1^0 с использованием большего количества производственных площадок.
Ужакин В. В., Токарева В. В., Касьянов Е. В., Гасанов Н. П., Харитонов Ю. В., Безверхий А. А.
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА ПЛАЗМАФЕРЕЗА (ПА) У БЕРЕМЕННЫХ С ВЫСОКИМ УРОВНЕМ АНТИФОСФОЛИПИДНЫХ АНТИТЕЛ (АФА)
ГБУ РО «Перинатальный центр»
Введение. Одной из основных проблем во время беременности является рост числа нарушений системы гемостаза. Коррекция нарушений гемостаза во время беременности является чрезвычайно актуальной задачей сохранения беременности. Высокий уровень АФА является важным механизмом в структуре репродуктивных потерь и других осложнений беременности, поражая сосуды любого калибра (от капилляров до аорты). Особенно важно учитывать влияние АФА при наличии в анамнезе акушерской патологии (привычное невынашивание, неразвивающаяся беременность, антенатальная гибель плода, задержка развития плода). В литературе имеются данные об эффективности использования метода ПА, позволяющего существенно снизитьуровень АФА.
Цель работы. Провести анализ эффективности метода ПА у беременных с высокимуровнем АФА.
Материалы и методы. Исследования проводилисьу 87 беременных на разных сроках беременности (18—28 недель). Возраст беременных от 22 до 38 лет. Основным показанием для назначения сеансов ПА являлось повышение уровня АФА (волча-ночные и антикардиолипиновые антитела классов и/или
1§М) крови при повторном обследовании выше нормальных величин, а также отсутствие эффекта от проводимой комплексной
терапии (фраксипарин, клексан, аспирин). Курс лечения состоял из 3—5 сеансов ПА, объем плазмоэксфузии составлял 30% объема циркулирующей крови. Плазмозамещение осуществлялось раствором стерофундина. Сеансы ПА проводили на аппарате «Haemoneti.cs». Все беременные отмечали хорошую переносимость данного метода лечения. Осложнений при проведении сеансов ПА не отмечалось.
Результаты и обсуждение. Анализ проведенных исследований показал, что у всех беременных наблюдались исходные нарушения системы гемостаза различной степени выраженности: по-вышениеуровня фибриногена,удлинение ПВ,укорочение АЧТВ, повышение РФМК, а также повышение уровня АФА. После проведенного курса ПА у всех беременных снизился уровень АФА до нормальных значений, причему 75 — после 3 сеансов, ау12 — потребовалось проведение 5 сеансов ПА. Необходимо отметить, что снижение уровня АФА сопровождалось нормализацией показателей гемостаза. К концу беременности у всех обследуемых отмечалсяуровень АФА в пределах допустимых значений.
Заключение. Проведенные исследования позволяют отметить высокую эффективность метода ПА, способствуя снижениюуров-ня АФА до нормальных величин коррекции нарушений гемостаза.
Февралева И. С., Глинщикова О. А., Судариков А. Б.
КАК ИЗБЕЖАТЬ ПОЛУЧЕНИЯ ЛОЖНООТРИЦАТЕЛЬНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ ПРИ ПЦР-АНАЛИЗЕ НА СОУ1Б-19
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Сегодня, в пандемию СОУТО-19, самым востребованным в мире молекулярно-генетическим анализом является полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в режиме реального времени (ОТ-ПЦР) на 8АК8-СоУ-2. Однако врачи отмечают, что около 40% результатов теста на СОУТО-19 при наличии клинических проявлений заболевания отрицательны. Ложноотрицательный анализ — это несвоевременное назначение адекватного лечения и десятки людей, контактировавших с неизолированным инфицированным человеком. Несмотря на то что в мире существует множество официальных высокочувствительных тест-систем для ОТ-ПЦР СОУТО-19, поиск новых
надежных методов, минимизирующих получение ложноотрица-тельных результатов, продолжается.
Цель работы. Разработать систему для ПЦР-диагностики COVID-19, контролирующую прохождение всех стадий анализа для исключения получения ложноотрицательного результата.
Материалы и методы. Мазок из носоглотки брали ватным тупфером, который затем помещали в пробирку Эппендорф с 300 мкл PBS. 100 мкл полученной суспензии переносили для выделения РНК набором «Рибопреп» Амплисенс. ОТ-ПЦР с выделенной РНК проводили в совмещенном режиме реактивами фирмы «Синтол». Последовательности праймеров
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
для выявления контрольной РНК и СО"УЮ-19 приведена в таблице.
Результаты и обсуждение. Анализ на СОУЮ-19 обычно состоит из 4 этапов. 1-й этап — взятие материала; 2-й этап — выделение РНК; 3-й этап — обратная транскрипция выделенной РНК; 4-й этап — ПЦР кДНК Причиной ложноотрицательного результата может быть некачественный мазок или вообще пустой тупфер, плохое выделение РНК, инактивация обратной транс-криптазы или Тад-полимеразы в пробе. Для контроля прохождения всего процесса в коммерческих системах к суспензии для выделения РНК добавляется контрольная ДНК, которая проходит вместе с РНК вируса все стадии процесса. В качестве внешнего положительного контроля может быть добавлен какой-нибудь РНК-содержащий вирус (например, бактериофаг М8-2). Если по окончании процесса будет получена амплификация контрольной ДНК/РНК, то в образце гарантированно прошли 2-я, 3-я и 4-я стадия процесса. Однако если не удалось взять материал от больного или имела место попытка фальсификации пробы, мы этого не увидим и получим ложноотрицательный результат. Мы предлагаем систему, контролирующую все 4 стадии процесса. Если мазок былуспешно взят, то в суспензию вместе с вирусом попадут клетки слизистой. РНК, выделенная из них, пройдет стадию обратной транскрипции и амплификацию. В нашу систему для ОТ-ПЦР входят праймеры для выявления РНК вируса и РНК гена АВЬ1 человека. Их дизайн таков, что они могут работать только с кДНК гена АВЫ, но не с его ДНК. Поэтому появление амплификации кДНК гена АВЫ в пробе будет свидетельствовать об успешном прохождении всех стадий — успешном мазке, выделении РНК, обратной транскрипции и ПЦР. При отсутствии амплификации РНК вируса можно гарантировать истинно отрицательный результат (рис.). Эти праймеры можно
применять для внутреннего контроля прохождения ОТ-ПЦР любых РНКовых вирусов, например НСУ и ВИЧ.
Заключение. Разработан метод ПЦР-диагностики вАКв-СоУ-2, позволяющий исключить ошибки, приводящие к ложно-отрицательным результатам на всех стадиях анализа.
Таблица. Последовательности праймеров COVID-19 и внутреннего контроля ОТ-ПЦР
для выявдения РНК
Название праймера Последовательность праймеров (5'-3')
NUC прямой * GCGTTCTTCGGAATGTCG
NUC обратный * TTGGATCTTTGTCATCCAATTTG-3'
ЗондЫиС* RóG-AACGTGGTTGACCTACACAGST-(RTQl)
ABL1 К прямой ** GTCCACACTGCAATGTTTTTGTG
ABL1 К обратный ** GAGTTCCAACGAGCGGCTTCACTC
Зонд ABU К** FAM-CCAGTAGCATCTGACTTTGAGCCTCAG-RTQ1
* — Праймеры NUC взяты из статьи «Improved Molecular Diagnosis of COVID-19 by the Novel, Highly Sensitive and Specific COVID-19-RdRp/Hel Real-Time Reverse Transcription-PCR Assay Validated In Vitro and with Clinical Specimens», J Clin Microbiol. 2020 Apr 23;58(5): 00310-20
**- Праймеры ABL1 К, предложенные авторами для внутреннего контроля анализа на COVID-19, амплифи-цирующие только кДНК, но не геномную ДНК
Февралева И. С., Глинщикова О. А., Сидорова Ю. В., Якутик И. А., Судариков А. Б.
К ВОПРОСУ О ПОДБОРЕ ПРАЙМЕРОВ КОНТРОЛЬНОГО ГЕНА ДЛЯ АДЕКВАТНОЙ ОЦЕНКИ ЭКСПРЕССИИ ХИМЕРНЫХ
ТРАНСКРИПТОВ
ФГБУ «НМИЦ гематологии» Минздрава России
Введение. Оценка уровня экспрессии химерных транскрип-тов, являющихся маркерами онкогематологических заболеваний, осуществляется по соотношению между пороговыми циклами амплификации химерного транскрипта и контрольного гена при исследовании методом ПЦР на кДНК. Рутинные методы выделения РНК не гарантируют отсутствие примесей геномной ДНК, которая в дальнейшем участвует в амплификации. Это приводит к завышению экспрессии контрольного гена и, как следствие, к заниженной оценке относительного количествахимерной РНК, атакже к завышенной оценке чувствительности метода. Использование обработки выделенной РНК ДНКазами существенно усложняет и удорожает анализ, а также может приводить к деградации тар-гетных последовательностей. В настоящем сообщении мы описываем простое и эффективное решение данной проблемы.
Цель работы. Разработать метод для количественной оценки экспрессии химерных транскриптов в ОТ-ПЦР по отношению к контрольному гену ABL1, не чувствительный к примеси геномной ДНК.
Материалы и методы. Тотальную РНК из лейкоцитов периферической крови или клеток костного мозга больных выделяли по методу Хомчинского. Для ОТ-ПЦР использовали набор реагентов «Reverta L» (ЦНИИ эпидемиологии) и реактивы фирмы «Синтол».
Результаты и обсуждение. В работе использовали праймеры длягенаАВЫ, фланкирующие фрагмент ДНК длиной в 139708 ну-клеотидов, содержащий 2 интрона (табл.). Такая длина исключает его амплификацию в ПЦР. В то же время кДНК этого фрагмента имеет длину всего ЮОнуклеотидов. Праймеры же, рекомендуемые
ассоциацией Europe Against Cancer (ЕАС) и широко используемые в составе коммерческих диагностических наборов, фланкируют относительно короткий фрагмент ДНК гена ABL1 длиной 687 нуклеотидов и фрагмент кДНК длиной 124 нуклеотида. При этом примесь геномной ДНК коамплифицируется с кДНК транскрипта в ПЦР, что занижает расчетное относительное количество химерного транскрипта. На рисунке показано сравнение результатов оценки уровней экспрессии химерного транскрипта CBFB::MYH11 у больного с ОМЛ, полученных с праймерами
