CC BY
0
ние 7 ч при 250°, затем температуру устанавливали согласно режиму работы хроматографа.
Для количественной оценки результатов анализа воздуха производили предварительную калибровку прибора в оптимальных условиях. С этой целью весовым методом готовили искусственные смеси. В микроампулу брали 0,05^-0,005 г димера метилциклопентадиена и вносили в емкость (5—10 л), которую закрывали пробкой. Концентрация димера метилциклопентадиена в приготовленной смеси должна была составлять 0,001-=--Ь-0,1 мг/мл. Затем установленный объем смеси вводили в хроматограф и подвергали анализу. Количественное определение проводили методом абсолютной калибровки по общепринятой методике (С. Ф. Яворовская, Л. П. Анваер; Tully). На основе эталонных смесей димера метилциклопен-дадиена с воздухом осуществляли калибровку воздушных смесей в интервале концентраций 0,001—1 мг/л димера метилциклопентадиена. При этом вычисляли калибровочный коэффициент, позволяющий определять по величине суммы площадей пиков и объему взятой пробы содержание димера метилциклопентадиена в исследуемом воздухе. Этот коэффициент оказался равным 0,00017 мг/см2.
Среднее отклонение при определении содержания димера метилциклопентадиена не превышало 15—20%. Чувствительность метода составляла ЫО-6 г/л, продолжительность анализа—15—20 мин.
ЛИТЕРАТУРА. Яворовская С. Ф., Анваер Л. П.— «Гиг. и сан.», 1969, №9, с. 94—96,—S о 1 а rs k i W., Zielinski Е,—«Chem. analyt.», 1971, v. 16, р. 1067—1070,—Т u 1 1 у W. F.— «J. chromatogr. Sei.», 1971, v. 9, p. 635—638.
Поступила 30/VI1 1976 r.
За рубежом
УДК 614.31:614.73:547.21]-074
Доктор техн. наук П. П. Дикун, Л. Д. Костенко, Н. Д. Красницкая
РЕЗУЛЬТАТЫ МЕЖДУНАРОДНОЙ КООПЕРАТИВНОЙ ПРОВЕРКИ ТОЧНОСТИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПОЛИЦИКЛИЧЕСКИХ УГЛЕВОДОРОДОВ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ С ПОМОЩЬЮ КВАЗИЛИНЕЙЧАТЫХ СПЕКТРОВ
Научно-исследовательский институт онкологии им. проф. Н. Н. Петрова Министерства здравоохранения СССР, Ленинград
При онколого-гигиенических исследованиях часто возникает необходимость определения весьма низких концентраций (порядка 1 мкг/кг) канцерогенных полициклических ароматических углеводородов (ПАУ) в продуктах сложного состава, например пищевых. Такие задачи можно успешно решать при использовании квазилинейчатых спектров флюоресценции. Низкое содержание определяемых ПАУ вынуждает, однако, применять при анализе ряд предварительных операций, имеющих целью выделение искомых веществ. Многоступенчатость методов анализа создает опасность искажения результатов в связи с потерей вещества на отдельных этапах исследования, например, при омылении, экстракции, хроматографнческом разделении. Следует остерегаться также искажения результатов анализа вследствие влияния на интенсивность флюоресценции тушения или реабсорб-ции излучения. Все это может обусловить несопоставимость данных, получаемых в разных лабораториях.
В связи с изложенным при оценке той или иной методики анализа, основанной на использовании квазилинейчатых спектров флюоресценции ПАУ, необходимо учитывать не только ее чувствительность и воспроизводимость результатов, но и процент открытия определяемого вещества, чему еще мало уделяется внимания. В 1970 г. Международным союзом теоретической и прикладной химии (ЮПАК) совместно с Ассоциацией официальных химиков-аналитиков была организована международная кооперативная апробация многокомпонентного метода определения ПАУ в копченых продуктах (Howard и соавт., 1966; Howard и соавт., 1968). Этот метод, рекомендованный ЮПАК в качестве стандартного, включает следующие основные операции: 1) экстракцию этанолом с одновременным омылением, 2) многоступенчатую экстракцию изооктаном из водно-спиртового раствора, 3) фильтрование изооактанового раствора через колонку из флоризила и элюирова-ние углеводородной фракции бензолом, 4) удаление бензола, растворение в изооктане и промывку фосфорной кислотой, 5) очистку переводом фракции из изооктана в диметилсульфоксид и снова в изооктан, 6) очистку с помощью колонки из флоризила, 7) очистку с помощью нисходящей бумажной хроматографии, 8) фракционирование тонкослойной хроматографией на ацетил ированной целлюлозе, 9) количественный спектральный анализ (адсорбционный, но в качестве дополнительного средства допускается и флюоресцентный).
Авторы метода придают первостепенное значение высокой стандартизации реактивов. Установлено, например, что применение некоторых образцов флоризила приводит к резкому занижению результатов. Поэтому все участники кооперативного исследования получили вместе с образцами продуктов также и специально приготовленный флоризил. Физико-химическим отделом Инспекции по контролю за пищевыми продуктами и лекарствами Министерства здравоохранения США были приготовлены и разосланы на анализ закодированные пробы, содержавшие определенные количества ПАУ.
Мы являлись участниками этого исследования, однако анализы производили не тем методом, который был рекомендован организаторами исследования, а методом, применявшимся нами в повседневной практике (П. П. Дикун). Благодаря этому мы имели возможность оценить в строгих условиях процент открытия ряда ПАУ при анализе закодированных образцов нашим методом, основанным на использовании квазилинейчатых спектров флюоресценции, и сопоставить его с данными, полученными методом, рекомендованным ЮПАК. Ниже излагаются результаты этой работы.
Как видно из работы, в которой приведены результаты упомянутого выше кооперативного исследования (Fació и соавт.) объектом изучения была копченая ветчина. В каждую лабораторию, принимавшую участие в работе, были высланы в герметически закрытых банках 4 образца весом по 100 г, имевшие обозначения X, 1, 2 и 3. Относительно образца X сообщено, что в него добавлено четыре ПАУ (3,4-бензпирен, 1,2-бензпирен, 1,2-бенз-антрацен и 1,12-бензперилен), каждого в количестве 10 мкг/кг. Этот образец был выслан для того, чтобы исследователь мог на нем отработать методику анализа. Образец 1 являлся контрольным (в него не добавляли ПАУ). Образцы 2 и 3 содержали все четыре упомянутых выше ПАУ, однако участникам работы не сообщали, в каких количествах. Эти сведения были получены только после представления результатов анализа. Мы произвели исследование всех 4 образцов по одной и той же методике, краткое описание которой приводим ниже.
Пробу подвергали омылению (щелочному гидролизу). Для этого ее помещали в круглодонную колбу, добавляли в нее 20 г КОН, растворенного в 20 мл воды, и 100 мл 96% этилового спирта и кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч. Охлажденный гидролизат разбавляли трехкратным объемом воды и экстрагировали 4 раза порциями по 200 мл диэтилового эфира. Эфирный экстракт промывали 5% раствором НС1 и водой до нейтральной реакции, а затем обезвоживали Na2S04. Полученный после от-
Таблица 1
Результаты анализа закодированных образцов копченой ветчины
Определяемое вещество Количество ПАУ, мг/кг Средний процент
внесенное в образцы 2. 3. X найдено в образцах среднее из найденных в образцах 2, 3. X обнаружения разброса данных
1 2 3 X
3,4-бензпирен 10 0 10,0 9,8 8,6 9,5 95 6
1,2-бензпирен 10 0 8,9 14,2 11,0 11,1 111 17
1,2-бензантрацен 10 0 9,0 9,8 10,4 9,7 97 5
1,12-бензперилен 10 0 9,4 8,0 9,8 9,1 91 7
гонки эфира остаток растворяли в 10 мл бензола и адсорбировали на колонку из А1г03 высотой 6 см и диаметром 8 см, приготовленную осаждением адсорбента из бензола. ПАУ элюировали из колонки бензолом. Полученный после отгонки бензола остаток фракционировали методом тонкослойной хроматографии на незакрепленном слое АК03. Флюоресцирующие зоны выделяли при освещении пластинки ультрафиолетовым светом. Собранный с них адсорбент элюировали диэтиловым эфиром. Элюат переводили в н-гек-сан и фотографировали квазилинейчатые спектры флюоресценции выделенных фракций с целью идентификации ПАУ. Во фракциях, в которых были идентифицированы соответствующие ПАУ, производили количественное определение последних методом внутреннего стандарта, также основанным на использовании квазилинейчатых спектров флюоресценции (П. П. Ди-кун).
Полученные нами результаты изучения закодированных образцов приведены в табл. 1. В ней перечислены количества ПАУ, внесенные в продукт при приготовлении образцов (во время проведения анализа эти данные нам были известны только в отношении образца X). Поскольку, как оказалось, в три образца было добавлено одинаковое количество ПАУ, мы приводим в табл. 1, кроме данных, полученных при анализе каждого образца, также среднюю концентрацию, выявленную в этих образцах, и указываем средний процент обнаружения и средний разброс данных, полученных при изучении трех, по существу одинаковых, образцов.
Таблица 2
Содержание полициклических углеводородов в ветчине (мкг'мг)
Образец 1 Образец 2 Образец 3
Исследова тель С и * СО с вэ сч < и Ч с 10 С из СО с (в С4 < (0 5 с из С (0 ■г со с 10 С4 < и с (О
А В с э Е Р в Н I Л К ь 0 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 2 0 0 0 0 1 0 0 0 6 6 7 5 7 5 9 7 9 10 10 8 7 8 7 7 7 9 8 4 9 9 10 8 8 10 9 10 7 8 9 6 9 9 8 0 8 9 8 9 7 9 10 8 9 9 10 8 7 7 7 7 7 7 7 5 10 10 8 8 7 7 6 7 6 8 6 5 14 10 8 9 8 9 10 8 10 9 8 5 10 10 0 6 7 7 7 8 7 9 7 5 8 10 8
Примечание. Здесь и в табл. 3 3,4-БП — 3,4-бензпирен, 1,2-БП — 1,2-бенз-пирен, БА— 1,2-бензантрацен, БПЛ — 1,12-бензперилен.
3 Гигиена н санитария № 5
65
Таблица 3
Статистическая обработка данных
СрсдивЯ процент 3,4-БП 1,2-БП БА БПЛ
Обнаружения 71,5 74,5 86,6 81,0
Разброса данных 12,7 12,35 9,01 9,37
В табл. 2, перепечатанной из статьи Fació и соавт., приведены результаты, полученные участниками международного кооперативного исследования. Наши результаты в округленном виде представлены в этой таблице в строке J.
В табл. 3, взятой из той же работы, приведены результаты статистической обработки данных кооперативного исследования (при этой обработке данные I и J были исключены, поскольку они были получены другими методами.
Из сравнения данных, приведенных в табл. 1, 2 и 3, видно, что использованный нами относительно простой метод давал возможность определять три соединения (3,4-бензпирен, 1,2-бензатрацен и 1,12-бензперилен) с большим процентом обнаружения вещества и при меньшем разбросе данных, чем более сложный метод, рекомендованный ЮПАК. Несколько хуже были результаты определения четвертого соединения — 1,2-бензпирена. Это можно объяснить, вероятно, отсутствием у нашей лаборатории опыта определения содержания данного вещества.
ЛИТЕРАТУРА. ДикунП. П. Рекомендации по применению методов1оп-ределения 3,4-бензпирена и других полициклических углеводородов в различных ¿продуктах. Методическое письмо. Л., 1965.— Fació Т., W h i t е R., Howard J.— tj. Ass. official analyt. Chem.», 1973, v. 56, p. 68—70,— Howard J., Peague <R., White R. et a.— Ibid., 1966, v. 49, p. 595—611.— Howard J., Facio Т., White R. et a.— Ibid., 1968, v. 51, p. 122—9.
Поступила 8/X 1976 r.
Дискуссии и отклики читателей
УДК 613.632:546.3 + 615.916:546.3].015.3
Проф. А. В. Рощин
ПРОБЛЕМА СООТНОШЕНИЙ МЕЖДУ ДОЗОЙ И ЭФФЕКТОМ В ТОКСИКОЛОГИИ МЕТАЛЛОВ
Центральный ордена Ленина институт усовершенствования врачей, Москва
Проблемы токсикологии металлов привлекают все большее внимание токсикологов и гигиенистов всего мира. Среди таких проблем, как физико-химические свойства и токсичность, всасывание, распределение, кумуляция и выведение, превращение соединений металлов и механизмов их взаимодействия с биохимическими системами организма, проблема соотношений между дозой и эффектом занимает особое место, потому что она теснейшим образом связана с гигиеническим нормированием. Однако взаимоотношения между дозой и эффектом не могут быть рассмотрены вне концепций критического органа, критического и субкритического эффектов, действия
