CC BY
81
УДК 615.014:615.246
РАЗРАБОТКА НОВЫХ ПОДХОДОВ К СТАНДАРТИЗАЦИИ ПРОКТОФИТОЛА
В.А. Куркин, А.А. Шмыгарева, А.Н. Саньков,
ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет»
Куркин Владимир Александрович - e-mail: [email protected]
Разработаны новые подходы к стандартизации противогеморроидального сбора (Проктофитол) на основе результатов исследования химического состава коры крушины ломкой. Данные подходы заключаются в определении суммы антраценпроизводных методом спектрофотометрии при аналитической длине волны 524 нм с использованием франгулина А в качестве стандартного образца. Содержание суммы антраценпроизводных в сборе «Проктофитол» варьирует в пределах от 3,50 до 3,84% (в пересчете на франгулин А).
Ключевые слова: противогеморроидальный сбор, проктофитол, Frangula alnus Mill., крушина ломкая, кора, антраценпроизводные, франгулин А, спектрофотометрия.
The methodological approaches for standardization of antihemorrhoidal species (Proctophytol) were developed on the base of results of chemical investigationc of Frangula alnus Mill. barks. These approaches consist in the determination of anthracenderivatives by means of spectrophotometry at analytical wavelength 524 nm and using of frangulin A as standard sample. The contents of the total anthracend-erivatives in species «Proctophytol» are varied with 3,50 to 3,84% (calculated on frangulin A).
Key words: antihemorrhoidal species, proctophytol, Frangula alnus Mill., barks, anthracenderivatives, frangulin A, standardization, spectrophotometry.
Введение
Сбор противогеморроидальный «Проктофитол» широко применяется в качестве слабительного, спазмолитического и гемостатического средства для профилактики и лечения геморроя [1-4]. В состав сбора «Проктофитол» входят кора крушины, листья сенны, трава тысячелистника, плоды кориандра и корни солодки - по 20% [1-3].
Известно, что слабительное действие проктофитола обусловлено наличием антраценпроизводных, содержащихся в коре крушины и листьях сенны [1-4]. Принимая во внимание значительный удельный вес в Проктофитоле компонентов (40%), содержащих антраценпроизводные, а также то обстоятельство, что именно данные вещества оказывают слабительный эффект [2-8], представляется актуальной разработка подходов к стандартизации данного препарата, предусматривающих определение производных антрахинона.
Цель исследования: разработка методики количественного определения суммы антраценпроизводных в противогеморроидальном сборе «Проктофитол».
Материалы и методы
Объектом исследования служило сырье промышленно-гообразцаПроктофитола (ОАО«Красногорсклексредства»; 2011, 2012 и 2013 гг.), листьев сенны (ОАО
«Красногорсклексредства»; 2012 г.) и коры крушины ломкой (ООО ПКФ «Фитофарм»; 2012 г.).
Электронные спектры измеряли на спектрофотометрах «Specord 40» (Analytik Jena) и «UNIC0-2800» в кюветах с толщиной слоя 10 мм.
Результаты и их обсуждение
Ранее с целью обоснования методических подходов к стандартизации коры крушины ломкой проведено исследование по выделению веществ из сырья данного растения [9, 10]. Было установлено, что доминирующими компонентами являются 6-О-а^-рамнопиранозид франгула-эмодина (франгулин А) и 6-О-р-О-апиофуранозид франгула-эмодина (франгулин В), причем было обосновано использование в методиках анализа коры крушины ломкой франгулина А в качестве стандартного вещества [9, 10]. В ходе разработки методики количественного опреде-
ления суммы антраценпроизводных в проктофитоле изучены УФ-спектры растворов водно-спиртовых извлечений из данного сбора, растворов водно-спиртовых извлечений из коры крушины ломкой, а также раствора франгулина А. Кроме того, изучены также в сравнительном плане растворы водно-спиртовых извлечений из листьев сенны, входящих в состав проктофитола.
Исследование УФ-спектров раствора исходного водноспиртового извлечения из проктофитола показало (рис. 1), что характерным является наличие максимума поглощения при 269±2 нм. Сравнительное исследование УФ-спектров растворов исходных водно-спиртовых извлечений из коры крушины ломкой (рис. 2) и листьев сенны свидетельствует о том (рис. 3), что вещества обоих видов сырья в значительной мере определяют характер кривой поглощения водно-спиртового извлечения из проктофитола (рис. 1). При исследовании щелочно-аммиачного раствора водно-спиртового извлечения из проктофитола в электронном спектре обнаруживается характерный максимум поглощения при длине 524±2 нм (рис. 1). Сравнительное исследование УФ-спектров щелочноаммиачных растворов водно-спиртовых извлечений из коры крушины ломкой (рис. 2) и листьев сенны показало
(рис. 3), что в случае обоих видов сырья имеет место вклад в кривую поглощения веществ исследуемых видов сырья в кривую поглощения щелочно-аммиачного раствора водно-спиртового извлечения из проктофитола (рис. 1), однако в наибольшей степени корреляция наблюдается со щелочно-аммиачным раствором водно-спиртового извлечения из коры крушины ломкой (рис. 2). Ранее нами было показано, что одним из характерных антраценпроизводных коры крушины ломкой является франгулин А [9, 10]. В этой связи нами проведено исследование раствора франгулина А и показано, что в УФ-спектре щелочноаммиачного раствора данного вещества также присутствует характерный максимум поглощения при длине 524±2 нм (рис. 4). Это дает основание, что пересчет содержания суммы антраценпроизводных в сборе «Проктофитол» надо осуществлять на франгулин А. Следовательно, как и в случае коры крушины ломкой [9], в качестве аналитической длины волны может быть использовано значение 524 нм, а стандартным образцом может служить доминирующий антрагликозид - франгулин А, причем в случае отсутствия данного стандарта в расчетной формуле может быть использовано теоретическое значение удельного показателя поглощения (Е|°^) - 180 [9].
РИС. 1.
Электронные спектры исходного раствора (1) и щелочно-аммиачного раствора (2) водно-спиртового извлечения из проктофитола.
1 У
1
<
В® ' [пт]
РИС. 2.
Электронные спектры исходного раствора (1) и щелочно-аммиачного раствора (2) водно-спиртового извлечения из коры крушины ломкой.
РИС. 3.
Электронные спектры исходного раствора (1) и щелочно-аммиачного раствора (2) водно-спиртового извлечения из листьев сенны.
РИС. 4.
Электронные спектры исходного раствора франгулина А (1) и щелочно-аммиачного раствора франгулина А (2).
С целью разработки методики количественного определения суммы антраценпроизводных нами определены оптимальные условия экстракции антраценпроизводных из сбора «Проктофитол»: экстрагент 40% этиловый спирт; соотношение «сырье-экстрагент» - 1:50; время экстракции -извлечение на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 90 мин (таблица 1).
ТАБЛИЦА 1.
Зависимость полноты извлечения суммы антраценпроизводных из сбора «Проктофитол»
Методика количественного определения суммы антраценпроизводных в проктофитоле. Аналитическую пробу сбора измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г измельченного сбора (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 40% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарированных весах с точностью до ±0,01 г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 90 мин. Затем колбу закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр («красная» полоса) и охлаждают в течение 30 мин. Испытуемый раствор готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора до метки щелочно-аммиачным раствором (испытуемый раствор А). Испытуемый раствор А помещают в колбу емкостью 50 мл и нагревают в течение 15 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником. После охлаждения измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 524 нм. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную.
Примечание: Приготовление раствора франгулина А-стандартного образца. Около 0,02 г (точная навеска) франгулина А помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 30 мл 70% этилового спирта при нагревании на водяной бане. После охлаждения содержимого колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 70% этиловым спиртом до метки (раствор А франгулина А). 1 мл раствора А франгулина А помещают в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора до метки щелочно-аммиачным раствором (испытуемый раствор Б). Раствор Б помещают в колбу емкостью 50 мл и нагревают в течение 15 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником. После охлаждения измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 524 нм. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную.
Содержание суммы антраценпроизводных в проктофитоле в пересчете на франгулин А и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
_ /)*т0 *50*1*50*100*100 , £)0*/и *50*1 *25*(100-Ж)
где Э - оптическая плотность испытуемого раствора;
Эо - оптическая плотность раствора РСО франгулина А;
т - масса сырья, г;
то - масса РСО франгулина А, г;
- потеря в массе при высушивании в процентах.
Упрощенная формула расчета как альтернатива:
х_ £>*50*50*100 /и*180*(100 —ЖУ
где Э - оптическая плотность испытуемого раствора;
- потеря в массе при высушивании в процентах;
180 - удельный показатель поглощения РСО франгулина А.
Метрологические характеристики методики количественного определения содержания суммы антраценпроизводных в проктофитоле представлены в таблице 2. Результаты статистической обработки проведенных опытов свидетельствуют о том, что ошибка единичного определения суммы антраценпроизводных в проктофитоле с доверительной вероятностью 95% составляет ±4,25% (таблица 2).
ТАБЛИЦА 2.
Метрологические характеристики методики количественного определения суммы антраценпроизводных в проктофитоле
f $ Р, % 1 (М) X Е, %
10 3,84 0,073 95 2,23 ±0,163 ±4,25
ТАБЛИЦА 3.
Содержание суммы антраценпроизводных в различных образцах проктофитола
Характеристика образца сырья Содержание суммы антраценпроизводных в абсолютно сухом сырье (в %) в пересчете на франгулин А
ОАО «Красногорсклексредства» (Московская область, 2011 г.) 3,50±0,10
ОАО «Красногорсклексредства» (Московская область, 2012 г.) 3,80±0,12
ОАО «Красногорсклексредства» (Московская область, 2013 г.) 3,84±0,11
Экстрагент Соотношение сырье/ экстрагент Время экстракции, мин Содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на франгулин А и абсолютно сухое сырье (в %)
30% этиловый спирт 1:50 60 3,50±0,06
40% этиловый спирт 1:50 60 3,62±0,05
50% этиловый спирт 1:50 60 3,66±0,04
60% этиловый спирт 1:50 60 3,69±0,05
70% этиловый спирт 1:50 60 3,70±0,07
80% этиловый спирт 1:50 60 3,75±0,08
40% этиловый спирт 1:50 30 3,79±0,06
40% этиловый спирт 1:50 90 3,84±0,05
40% этиловый спирт 1:50 120 3,81±0,06
40% этиловый спирт 1:30 90 3,80±0,08
40% этиловый спирт 0,111 90 3,77±0,05
40% этиловый спирт 0,181 90 3,76±0,06
С использованием разработанной методики нами проанализирован ряд образцов проктофитола (таблица 3) и при этом определено, что содержание суммы антрацен-производных варьирует от 3,50 до 3,84%, что позволяет рекомендовать в качестве нижнего предела для сырья данного растения содержание суммы антраценпроизвод-ных не менее 3,0%.
Выводы
1. На основе результатов химического исследования коры крушины ломкой разработаны методологические подходы к стандартизации проктофитола, заключающиеся в определении антраценпроизводных и использовании в методиках анализа стандартного образца франгулина А.
2. Разработана методика количественного определения суммы антраценпроизводных в пересчете на франгулин А в проктофитоле с использованием 40% этилового спирта в качестве экстрагента и УФ-спектроскопии при аналитической длине волны 524 нм.
4. Результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать нижний предел содержания суммы антраценпроизводных в проктофитоле не менее 3,0%.
ЛИТЕРАТУРА
1. Государственный реестр лекарственных средств. Т. 1. Официальное издание. М. 2008. 1398 с.
Gosudarstvennyj reestr lekarstvennyh sredstv. Oficial'noe izdanie. T. 1. M.
2008. 1398 s.
2. Куркин В.А. Фармакогнозия: учебник для студентов фармацевтических вузов. Изд. 2-е, перераб. и доп. Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2007. 1239 с.
Kurkin V.A. Farmakognozija: Uchebnik dlja studentov farmacevticheskih vuzov. Izd. 2-e, pererab. i dop. Samara: OOO «Ofort», GOU VPO «SamGMU Roszdrava», 2007. 1239 s.
3. Куркин В.А. Основы фитотерапии: Учебное пособие для студентов фармацевтических вузов. Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава»,
2009. 963 с.
Kurkin V.A. Osnovy fitoterapii: Uchebnoe posobie dlja studentov farmacevticheskih vuzov. Samara: OOO «Ofort», GOU VPO «SamGMU Roszdrava», 2009. 963 s.
4. Машковский М.Д. Лекарственные средства. 16-е изд., перер., испр. и доп. М.: Новая волна, 2012. 1216 с.
Mashkovskii M.D. Lekarstvennye sredstva. 16-e izd., perer., ispr. i dop. M.: Novaya volna, 2012. 1216 s.
5. Асенов И., Николов С. Фармакогнозия. София: Медицина и физкультура, 1988. 466 с.
Asenov I., Nikolov S. Farmakognozija. Sofija: Medicina i fizkul’tura, 1988. 466 s.
6. Георгиевский В.П., Комисаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск: Наука, Сибирское отд.,1990. 333 с.
Georgievskii V.P., Komissarenko N.F., Dmitruk S.E. Biologicheski aktivnye veshchestva lekarstvennyh. Novosibirsk: Nauka, Sibirskoe otd., 1990. 333 s.
7. Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия: учебник. М.: Медицина, 2002. 656 с.
Murav’eva D.A., Samylina I.A., Yakovlev G.P. Farmakognozija: uchebnik. M.: Medicina, 2002. 656 s.
8. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейство Rutaceae - Elaeagnaceae. Л.: Наука, 1988. С. 182-186.
Rastitel’nye resursy SSSR: Cvetkovye rastenija, ih himicheskii sostav, ispol’zovanie; Semeistvo Rutaceae - Elaeagnaceae. L.: Nauka, 1988. S. 182-186.
9. Куркин В.А., Шмыгарева А.А. Определение антраценпроизводных в коре крушины ломкой. Фармация. 2010. Т. 58. № 8. С. 9-12.
Kurkin V.A., Shmygareva A.A. Opredelenie antracenproizvodnyh v kore krushiny lomkoi. Farmacija. 2010. T. 58. № 8. S. 9-12.
10. Куркин В.А., Шмыгарева А.А Фитохимическое исследование коры крушины ломкой. Медицинский альманах. 2012. № 1 (20). С. 218-220.
Kurkin V.A., Shmygareva A.A. Fitohimicheskoe issledovanie kory krushiny lomkoi // Medicinskii Almanah. 2012. № 1 (20). S. 218-220.
