CC BY
49
УДК 615.322
А. А. ШМЫГАРЕВА1, А. Н. САНЬКОВ1, В. А. КУРКИН2
СРАВНИТЕЛЬНОЕ ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КОРЫ КРУШИНЫ ЛОМКОЙ И ПЛОДОВ ЖОСТЕРА СЛАБИТЕЛЬНОГО
Оренбургская государственная медицинская академия 2Самарский государственный медицинский университет
A. A. SHMYGAREVA1 A. N. SANKOV1 V. A. KURKIN
COMPARATIVE PHYTOCHEMICAL STUDY OF BARK OF BUCKTHORN FRAGILE AND FRUITS OF BUCKTHORN PURGING
Orenburg State Medical Academy 2Samara State Medical University
РЕЗЮМЕ. Из коры крушины ломкой (Frangula alnus Mill.) выделены антрагликозиды - франгулин А (6-О-а-Ь-рамнопиранозид франгула-эмодина) и франгулин В (6-О-в>-В-апиофуранозид франгула-эмодина), а из плодов жостера слабительного (Rhamnus cathar-tica L.) - l-O-fi-D-глюкопиранозид эмодина (антра-гликозид) и 3-О-рутинозид рамнетина (флавоноид), идентифицированные на основе данных ЯМР-, УФ-и масс-спектров. Проведен сравнительный качественный анализ коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного с использованием метода тонкослойной хроматографии (ТСХ) и спектрофотометрии.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: FRANGULA ALNUS MILL., RHAMNUS CATHARTICA L, КРУШИНА ЛОМКАЯ, КОРА, ЖОСТЕР СЛАБИТЕЛЬНЫЙ, ПЛОДЫ, АНТРАЦЕНПРОИЗВОДНЫЕ, ФРАНГУЛИН А, ФРАНГУЛИН В, 1-О-В^-ГЛЮКОПИРАНОЗИД ЭМОДИНА, З-О-РУТИНОЗИД РАМНЕТИНА, ТСХ-АНАЛИЗ, СПЕКТРОФОТОМЕТРИЯ.
RESUME. Frangulin А (б-О-a-L-rhamnopyranoside of frangula-emodin) and frangulin В (б-О-fi-D-apiofuranoside of frangula-emodin) from Frangula alnus Mill. barks there were isolated. 1-O-в-D-glucopyranoside of emodin and З-О-rutinoside of rhamnetin from Rhamnus cathartica L. fruits there were isolated. The isolated compounds were identified by means of NMR-, UV-spectroscopy and mass spectrometry. A comparative qualitative analysis of Frangula alnus Mill. barks and Rhamnus cathartica L. fruits using the thin-layer chromatography and spectrophotometry were carried out.
KEY WORDS: FRANGULA ALNUS MILL., RHAMNUS CATHARTICA L., BARK, FRUITS,
Шмыгарева Анна Анатольевна - к. фарм. н., ст. препод. каф. управления и экономики фармации, фармацевтической технологии и фармакогнозии; 89123401517; a.shmygareva@mail.ru Саньков Анатолий Николаевич - к. м. н., доц., зав. каф. управления и экономики фармации, фармацевтической технологии и фармакогнозии; 8 (3532) 520612; k_upr_pharm@orgma.ru Куркин Владимир Александрович - д. фарм. н., проф., зав. каф. фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии; 8 (846) 2603359; Kurkinvladimir@syandex.ru
ANTHRACENDERIVATIVES, FRANGULIN A, FRANGULIN B, 1-O-B-D-GLUCOPYRANOSIDE OF EMODIN, З-О-RUTINOSIDE OF RHAMNETIN, TLC-ANALYSIS, SPECTROPHOTOMETRY.
ВВЕДЕНИЕ. Государственная фармакопея СССР XI издания в фармакопейных статьях «Кора крушины ломкой» и «Плоды жостера слабительного» в разделе «Качественные реакции» включает лишь пробирочные реакции [1]. Для коры крушины ломкой дана реакция с 10% раствором едкого натрия (при смачивании внутренней поверхности коры 1-2 каплями наблюдается кроваво-красное окрашивание). Реакция Борнтрегера используется для определения подлинности и коры крушины и плодов жостера. Данные реакции не потеряли своей актуальности, однако для дифференциального анализа близкородственных видов они не подходят.
Наиболее перспективный метод определения подлинности растительного сырья является тонкослойная хроматография (ТСХ) [2, 3], однако использование ТСХ возможно лишь на основе глубокого изучения компонентного состава лекарственных растений. Ранее нами выделены доминирующие вещества - франгулин А и франгулин В, в коре крушины ломкой [4], хотя в отечественной литературе сообщается только о наличии окисленных форм франгуларозида - глю-кофрангулина и франгулина (производные франгу-ла-эмодина) [5, 6]. В Европейской фармакопее расчет антраценпроизводных производится по глюкофрангу-лину А [7]. К доминирующим веществам в плодах жостера отечественные ученые относят антрагликозиды (глюкофрангулин, франгулин, франгула-эмодин) [5, 6].
ЦЕЛЬЮ настоящей работы является сравнительное исследование компонентного состава коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Объектами исследования служило сырье, изготовленное в Оренбургской области, г. Бузулук, близь реки Сакмара (2010 г.). Экстракцию сырья с использованием 70% этилового спирта, хроматографическое разделение экстрактивных веществ осуществляли на силикагеле L 40/100. Контроль за разделением веществ осуществляли с помощью
ТСХ анализа на пластинках «Silufol UV 254» и «Сорб-фил ПТСХ-АФ-А-УФ» в системах хлороформ-этанол (4:1), а также хлороформ-метанол-вода (26:14:3).
Спектры ЯМР 'Н выделенных веществ получали на приборах «Bruker АМ 300» (300 МГц), масс-спектры снимали на масс-спектрометре «Kratos MS 30» регистрацию УФ-спектров проводили с помощью спектрофотометра «Specord 40» (Analytik Jena).
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ. Плоды жостера слабительного (50 г) подвергали исчерпывающему экстрагированию 70% этиловым спиртом, сочетая при этом способ мацерации (24 ч) с последующей термической экстракцией при температуре 85-90° С. Водно-спиртовые экстракты упаривали под вакуумом до густого остатка (около 20 мл). Сгущенный экстракт высушивали на полиамиде и полученный порошок (экстракт + полиамид) наносили на слой полиамида, сформированный в воде. Колонку элюировали водой и водным раствором спирта этилового (20%; 40%; 70%; 96%). Из фракций, содержащих вещества 1-4, выпавшие осадки были отделены и затем перекристиллизо-ваны из водного спирта.
Соединение 1. 6-О-а-Ь-рамнопиранозид фран-гула-эмодина (франгулин А), кристаллы оранжевого цвета состава С21Н20О9. Т. пл. 227-230° С (водный спирт). УФ-спектр (EtOH Xmax, нм): 225, 262, 285, 300пл, 434. Спектр ЯМР 1Н (300 МГц, ДМСО-d^ б, м.д., J/Гц):
I.14 (3Н, д, J = 6, СН3 рамнозы), 2.40 (3Н, с, ароматическая СН3 при С-3), 3.3-4.2 (м, 4Н рамнозы), 5.60 (1Н, уширенный синглет, Н-111 рамнопиранозы), 6.87 (1Н, д, J = 2.5, Н-2), 7.12 (1Н, с, Н-7), 7.23 (1Н, д, J = 2.5, Н-4), 7.47 (1Н, с, Н 5), 11.85 (1Н, с, 1-ОН группы), 12.00 (1Н, с, 8-ОН группы). При кислотном гидролизе франгулин А расщепляется на рамнозу и агликон, представляющий собой франгула-эмодин (1,6,8-тригидрокси-3-метилантрахинон): М+ агликона 270 (30%), 256 (100%).
Соединение 2. 6-О-Р-Б-апиофуранозид франгула-эмодина (франгулин В), кристаллы оранжевого цвета состава С20Н18°9, М+ агликона 270 (30%), 256 (100%), т.пл. 184 187о С (водный спирт). УФ-спектр (EtOH, X , нм): 224, 263, 285, 300пл, 434. Спектр ЯМР 'Н (300 МГц, ДМС°-d6, б, м.д., J/Гц): 2.28 (3Н, с, ароматическая СН3 при С-3), 3.2-4.3 (м, 4Н апиофуранозы), 5.58 (1Н, д, J =3 4, Н-111 апиофуранозы), 6.82 (1Н, д, J = 2.5, Н-2), 7.12 (1Н, с, Н-7), 7.20 (1Н, д, J = 2.5, Н-4), 7.43 (1Н, с, Н-5),
II.84 (1Н, с, 1-ОН группы), 11.98 (1Н, с, 8-ОН группы). При кислотном гидролизе франгулин В расщепляется на апиозу и агликон, идентифицированный как фран-гула-эмодин (1,6,8-тригидрокси-3- метилантрахинон): М+ агликона 270 (30%), 256 (100%).
Соединение 3. 3-О-рутинозид рамнетина. Светло-желтое кристаллическое вещество состава С28Н32О16; УФ-спектр: Xmax 264, 272 пл, 368 нм. Спектр ЯМР >Н (300 МГц, дМСо-d. б, м.д., J/Гц): 7,66 (дд,
2,5 и 9 Гц, Н-61), 7,58 (д 9 Гц, Н-21), 6,82 (д, 9 Гц, Н-51), 6,65 (д, 2,5 Гц, Н-8) 6,35 (д, 2,5 Гц, Н-6), 5,32 (д, 7 Гц, Н-111 глюкозы), 4,82 (уш. с, Н-1111 рамнозы), 3,60-3,0 (м, 6Н глюкозы + 4Н рамнозы), 1,10 (д, 6 Гц, 3Н, СН3 рамнозы). При кислотном гидролизе расщепляется на глюкозу, рамнозу и агликон, идентифицированный как рамнетин (3,5,31,41-тетрагидрокси-7-метоксифлавон): М+ агликона 318 (100%), 167 (А+Н) (15%), 137 (В) (20%).
Соединение 4. 1-О-^-Б-глюкопиранозид эмодина, кристаллы оранжевого цвета состава С21Н20О10, М+ агликона 270 (100%); УФ спектр (ЕЮН, Хти, нм): 229, 271, 422. Спектр ЯМР 1Н (300 МГц, ДМССТ-^, б, м.д., ]/Гц): 2.40 (3Н, с, ароматическая СН3 при С-3), 3.14.6 (м, 4Н глюкопиранозы), 5.16 (1Н,д, ] = 7, Н-111 глю-копиранозы), 6.32 (1Н, д, ] = 2.5, Н-2), 7.18 (1Н, с, Н-7), 7.50 (1Н, с, Н-5), 7.56 (1Н, д, ] = 2.5, Н-4), 11.98 (1Н, с, 8-ОН группы). При кислотном гидролизе франгулин В расщепляется на апиозу и агликон, идентифицированный как франгула-эмодин (1,6,8-тригидрокси-3-метилантрахинон): М+ агликона 270 (30%), 256 (100%).
Исследование методом ТСХ показало, что доминирующими антрагликозидами коры крушины ломкой являются франгулин А и франгулин В. На хроматограмме водно-спиртового извлечения плодов жостера слабительного обнаружены другие компоненты - 1-О-^-Б-глюкопиранозид эмодина (антра-гликозид) и 3-О-рутинозид рамнетина (флавоноид). Результаты проведенных исследований позволяют для определения подлинности коры крушины ломкой рекомендовать ТСХ, причем с использованием стандартного образца франгулина А, имеющего, на наш взгляд, особое диагностическое значение для сырья данного растения. Для диагностики плодов жостера слабительного может быть успешно использовано определение доминирующего компонента флавоноид-ной природы - 3-О-рутинозида рамнетина, имеющего диагностическое значение. Интересно, что именно это вещество обусловливает характер кривой поглощения в УФ-спектре водно-спиртового извлечения плодов жостера слабительного (рис. 1).
В случае коры крушины ломкой характер кривой поглощения в УФ-спектре обусловливают антрацен-производные (рис. 1), что более наглядно иллюстрируется УФ-спектром водно-спиртового извлечения сырья данного растения в присутствии щелочно-ам-миачного раствора (рис. 2).
Методика ТСХ-анализа плодов жостера слабительного. Около 1 г измельченного сырья (с точностью до ± 0,01 г) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 70% этилового спирта. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 30 мин. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр («красная» полоса).
Рисунок 1 - Электронные спектры водно-спиртовых извлечений коры крушины ломкой (1) и плодов жостера слабительного (2). Обозначения: по оси ординат - оптическая плотность; по оси абсцисс - длина волны, нм
Рисунок 2 - Электронные спектры водно-спиртовых извлечений плодов жостера слабительного (1) и коры крушины ломкой (2) в присутствии щелоч-но-аммиачного раствора. Обозначения: по оси ординат - оптическая плотность; по оси абсцисс - длина волны, нм
На линию старта пластинки «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» микропипеткой наносят 0,01 мл извлечения и 0,01 мл 0,1% раствора стандартного образца франгулина А. Пластинку с нанесенными пробами помещают в камеру со смесью растворителей: хлороформ - метанол - хлороформ (26:14:3) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 8 см, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин. и просматривают в УФ-свете. При просмотре хроматограммы в видимом свете на уровне пятна франгулина А (величина К.г около 0,7) обнаруживается пятно желтого цвета, имеющее желто оранжевую флуоресценцию в УФ свете при длине волны 254 нм; допускается наличие других пятен. Затем
пластинку опрыскивают раствором диазобензол-сульфокислоты и помещают в сушильный шкаф на 2 мин. при 100-150° С. При этом на уровне пятна стандартного образца франгулина А обнаруживается доминирующее пятно красного цвета с величиной К.г около 0,7 (франгулин А): допускается наличие других пятен.
Таким образом, результаты сравнительного исследования компонентного состава коры крушины ломкой и плодов жостера слабительного позволили установить, что диагностическое значение имеют соответственно франгулин А (антрагликозид) и 3-О-рутинозид рамнетина (флавоноид), что может быть успешно использовано для целей стандартизации сырья данных близкородственных видов.
ВЫВОДЫ.
В результате сравнительного фотохимического исследования из коры крушины ломкой (Frangula alnus Mill.) выделены антрагликозиды - франгулин А (6-О-а-Ь-рамнопиранозид франгула-эмодина) и франгулин В (б-О-^-Б-апиофуранозид франгула-эмодина), а из плодов жостера слабительного (Rham-nus cathartica L.) - 1-О-^-Б-глюкопиранозид эмодина (антрагликозид) и 3-О-рутинозид рамнетина (флаво-ноид).
Франгулин А как один из доминирующих антра-гликозидов представляет наибольший интерес в качестве химического диагностического признака коры крушины ломкой.
Разработана методика определения подлинности коры крушины ломкой с использованием тонкослойной хроматографии путем обнаружения диагностического компонента - франгулина А в присутствии соответствующего стандартного образца.
Для целей стандартизации плодов жостера слабительного особый интерес представляет 3-О-рутинозид рамнетина (флавоноид), что нашло отражение в методике определения подлинности сырья данного растения методом ТСХ.
Сравнительное изучение электронных спектров водно-спиртовых извлечений показало, что характер кривой поглощения в случае коры крушины ломкой обусловливают антрагликозиды, а в плодах жостера
слабительного - флавоноиды, что может быть успешно использовано для идентификации сырья данных близкородственных видов.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:
1. Государственная Фармакопея СССР. Одиннадцатое издание / МЗ СССР. - Вып. 2. - М. : Медицина, 1990. - 400 с.
2. Куркин, В. А. Фармакогнозия : учебник. - 2-е изд., перераб. и доп. / В. А. Куркин. - Самара : ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», 2007. - 1239 с.
3. Куркин, В. А. Фитохимическое исследование коры крушины ломкой / В. А. Куркин, А. А. Шмыгарева // Медицинский альманах. - 2012. - № 1. - С. 218-220.
4. Wagner, H. Plant Drug Analysis. A Thin Layer Chromatography Atlas / Н. Wagner, S. Bladt. - Berlin-Heidelberg-New York : Springer Verlag, 1996. - 384 p.
5. Георгиевский, В. П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В. П. Георгиевский, Н. Ф. Комиссаренко, С. Е. Дмитрук. - Новосибирск : Наука, Сибирское отд., 1990. - 333 с.
6. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейство Rutaceae - Elaeagnaceae. - Л. : Наука, 1988. - С. 182-186.
7. European Pharmacopoeia. - 4-th Ed. - Rock-ville: United States Pharmacopoeial Convention, Inc. - 2002. - P. 1224-1225.
ХИРУРГИЯ
УДК 616.329:61633]-089.843 П. В. САМОЙЛОВ
РАЗРАБОТКА ТЕХНИКИ И АНАТОМИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ МИКРОХИРУРГИЧЕСКИХ ПИЩЕВОДНО-ЖЕЛУДОЧНЫХ АНАСТОМОЗОВ
Оренбургская государственная медицинская академия Оренбургский областной клинический онкологический диспансер
P. V. SAMOYLOV
DEVELOPMENT OF TECHNOLODGY AND ANATOMICAL BASIS OF MICROSURGICAL ESOPHAGOGASTRIC ANASTOMOSES
Orenburg State Medical Academy Orenburg regional Clinical Oncology Center
РЕЗЮМЕ. Дано анатомическое обоснование микрохирургических пищеводно-желудочных анастомозов при резекции пищевода и кардиального отдела желудка.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: МИКРОХИРУРГИЯ, ПИЩЕВОДНО-ЖЕЛУДОЧНЫЙ АНАСТОМОЗ.
SUMMARY. Anatomical basis of microsurgical esopha-gogastrical anastomosis in resection of esophagus and cardial part of stomach has been given.
Самойлов Петр Владимирович - к. м. н., врач-хирург; 89033602335
KEY WORDS: MICROSURGERY ESOPHAGOGASTRIC ANASTOMOSIS.
На протяжении всей истории хирургии пищевода и кардии желудка проблема формирования анастомоза между остающейся его частью после резекции и нижележащими отделами желудочно-кишечного тракта всегда занимала ведущее место. И хотя за последние годы достигнуты общеизвестные и значительные позитивные сдвиги, актуальность вопроса отнюдь не уменьшилась.
