CC BY
174
IVh
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
УДК 615.32:615.012
ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КОРЫ КРУШИНЫ ЛОМКОЙ
В.А. Куркин, А.А. Шмыгарева,
ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет»
Куркин Владимир Александрович - e-mail: [email protected]
Из коры крушины ломкой (Frangula alnus Mill.) впервые в Российской Федерации выделены франгулин А (Б-О-а^-рамнопиранозид франгула-эмодина) и франгулин В (Б-О-р^-апиофуранозид франгула-эмодина), идентифицированные на основе данных ЯМР-, УФ- и масс-спектров. Разработана методика определения подлинности сырья крушины с использованием тонкослойной хроматографии.
Ключевые слова: Frangula alnus Mill., крушина ломкая, кора, антраценпроизводные, франгулин А, франгулин В, ТСХ-анализ.
Frangulin А (Б-О-а-L-rhamnopyranoside of frangula-emodin) and frangulin В (Б-О-р-D-apiofuranoside of frangula-emodin) from Frangula alnus Mill. barks there were isolated. The isolated compounds were identified by means of NMR-, UV-spectroscopy and mass spectrometry. Predominant anthraglycoside frangulin А has the most importance as the chemical diagnostic characteristic for the Frangula alnus barks. The methodic of the indentification Frangula alnus drugs was developed with using of TLC.
Key words: Frangula alnus Mill., bark, anthracenderivatives, frangulin A, frangulin B, TLC-analysis.
Введение
В соответствии с Государственной фармакопеей СССР XI издания раздел «Качественные реакции» в фармакопейной статье «Кора крушины ломкой» (ст. 2) включает лишь пробирочные реакции [1]. Используемая в данной нормативной документации реакция с 10%-м раствором едкого натрия (при смачивании внутренней поверхности коры 1-2 каплями наблюдается кроваво-красное окрашивание), а также реакция Борнтрегера не потеряли своей актуальности, однако в случае лекарственных средств (отвар, экстракт жидкий, экстракт сухой, сироп и др.) они не позволяют в полной мере решать проблему определения подлинности. Одним из перспективных методов определения подлинно-
сти растительного сырья и фитопрепаратов является тонкослойная хроматография (ТСХ) [2, 3], однако использование ТСХ возможно лишь на основе глубокого изучения компонентного состава лекарственных растений. На наш взгляд, внедрению современных методов анализа коры крушины ломкой и препаратов на ее основе препятствует противоречивость данных относительно компонентного состава антра-гликозидов данного сырья. Так, в отечественной литературе сообщается о наличии в коре крушины ломкой окисленных форм франгуларозида - глюкофрангулина и франгулина (производные франгула-эмодина) [4-6], тогда как зарубежные ученые ориентируются на глюкофрангулин А и В, а также франгулин А и В [3, 7, 8]. В соответствии с этим в
Европейской фармакопее предусмотрен перерасчет на глю-кофрангулин А содержания суммы производных антрацена, или суммы глюкофрангулинов [9].
Целью настоящей работы является исследование компонентного состава антрагликозидов коры крушины ломкой.
Материал и методы
Объектом настоящего исследования служили образцы коры крушины ломкой, заготовленные в Ботаническом саду Самарского государственного университета в апреле-мае 2009 года, а также промышленный образец сырья (ПКФ «Фитофарм» Краснодарского края). Экстракцию сырья с использованием 70% этилового спирта, хроматографическое разделение экстрактивных веществ осуществляли на силикагеле L 40/100. Контроль за разделением веществ осуществляли с помощью ТСХ-анализа на пластинках «Silufol UV 254» и «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» в системах хлороформ-этанол (4:1), а также хлороформ-метанол-вода (26:14:3).
Спектры ЯMP 1H выделенных веществ 1 и 2 получали на
приборах «Bruker AM 300» (300 MR_0, масс-спектры снимали на масс-спектрометре «Kratos MS-30», регистрацию УФ-спектров проводили с помощью спектрофотометра «Specord 40» (Analytik Jena).
Результаты и их обсуждение
Кору крушины ломкой (200 г) подвергали исчерпывающему экстрагированию 70%-м этиловым спиртом, сочетая при этом способ мацерации (24 ч) с последующей термической экстракцией при температуре В5-90°С. Водно-спиртовые экстракты упаривали под вакуумом до густого остатка (около 50 мл). Сгущенный экстракт высушивали на силикагеле L 40/100 и полученный порошок (экстракт+силикагель) наносили на слой силикагеля, сформированный в хлороформе. Хроматографическую колонку элюировали хлороформом и смесью хлороформ-этанол в различных соотношениях (97:3; 95:5; 93:7; 90:10; В5:15; В0:20; 70:30, 60:40, 50:50).
Из фракций, содержащих вещества 1 и 2 (рис. 1), выпавшие осадки оранжевого цвета были отделены и затем пере-кристиллизованы из водного спирта.
Соединение 1. 6-О-а^-рамнопиранозид франгула-эмодина (франгулин А), кристаллы оранжевого цвета состава С^^^ т.пл. 227-2З0°С (водный спирт). УФ-спектр (EtOH, Xmax, нм): 225, 262, 2В5, 300пл, 434. Спектр ЯMP 1H (300 M^, ДMСО-d6, 8, м.д., J/Г ц): 1.14 (3H, д, J = 6, Щ рам-нозы), 2.40 (3H, с, ароматическая С^ при С-3), 3.3-4.2 (4H рамнозы), 5.60 (1H, уширенный синглет, H-11 рамнопирано-зы), 6.В7 (1H, д, J = 2.5, H-2), 7.12 (1H, с, H-7), 7.23 (1H, c, J = 2.5, H-4), 7.47 (1H, с, H-5), 11.В5 (1H, c, 5-OH группы), 12.00 (1H, c, В-OH группы). При кислотном гидролизе франгулин А расщепляется на рамнозу и агликон, представляющий собой франгула-эмодин (1,6,В-тригидрокси-З-метилантрахинон): M+ агликона 270 (30 %), 256 (100 %).
Соединение 2. 6-О-р-О-апиофуранозид франгула-эмодина (франгулин В)., кристаллы оранжевого цвета состава Q^sA, M+ агликона 270 (30%), 256 (100%), т.пл. 1В4-1В7 оС (водный спирт). УФ-спектр (EtOH, Xmax, нм): 224, 263, 2В5, 300пл, 434. Спектр ЯMP 1H (300 M^, ДMСО-d6, 8, м.д., J/Гц): 2.2В (3H, с, ароматическая С^ при С-3), 3.2-4.3 (4H апиофуранозы), 5.5В (1H, д, J = 4, H-11 апиофуранозы), 6.В2 (1H, д, J = 2.5, H-2), 7.12 (1H, с, H-7), 7.20 (1H, c, J = 2.5, H-4), 7.43 (1H, с, H-5), 11.В4 (1H, c, 5-OH группы), 11.9В (1H, c,
8-ОН группы). При кислотном гидролизе франгулин В расщепляется на апиозу и агликон, идентифицированный как франгула-эмодин (1,6,8-тригидрокси-3-метилантрахинон): М+ агликона 270 (30%), 256 (100%).
РИС. 1.
Антрагликозиды, выделенные из коры крушины ломкой.
Франгулин А (1)
Франгулин В (2)
РИС. 2.
Схема тонкослойной хроматограммы компонентов коры крушины ломкой.
Обозначения: 1 - водно-спиртовое извлечение сырья; 2 - франгулин А;
- франгулин В; 4 - франгула-эмодин; 5 - глюкофрангулин А; б - глюкофрангулин В.
Исследование методом ТСХ показало, что доминирующим антрагликозидом коры крушины ломкой является франгулин А (рис. 2). На хроматограмме водно-спиртового
IVh
МЕДИЦИНСКИЙ
АЛЬМАНАХ
извлечения коры крушины ломкой обнаружены также фран-гулин В и франгула-эмодин (рис. 2). Кроме того, литературные данные [3] позволяют идентифицировать еще два антрагликозида - глюкофрангулин А и глюкофрангулин В (рис. 2). Результаты проведенных исследований позволяют для определения подлинности коры крушины ломкой рекомендовать ТСХ, причем с использованием стандартного образца франгулина А, имеющего, на наш взгляд, особое диагностическое значение для сырья данного растения.
Методика ТСХ-анализа коры крушины ломкой. Около 1 г измельченного коры крушины ломкой (с точностью до ±0,01 г) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл 70% этилового спирта. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 30 мин. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр («красная» полоса).
На линию старта пластинки «Сорбфил-ПТСХ-АФ-А-УФ» микропипеткой наносят 0,01 мл извлечения и 0,01 мл 0,1% раствора стандартного образца франгулина А. Пластинку с нанесенными пробами помещают в камеру со смесью растворителей: хлороформ - метанол - хлороформ (26:14:3) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдёт около 8 см, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин. и просматривают в УФ-свете. При просмотре хроматограммы в видимом свете на уровне пятна франгулина А (величина ^ около 0,7) обнаруживается пятно желтого цвета, имеющее желто-оранжевую флуоресценцию в УФ-свете при длине волны 254 нм; допускается наличие других пятен. Затем пластинку опрыскивают раствором диазобензолсульфокислоты и помещают в сушильный шкаф на 2 мин. при 100-105°С. При этом на уровне пятна стандартного образца франгулина А обнаруживается доминирующее пятно красного цвета с величиной ^ около
0,7 (франгулин А); допускается наличие других пятен.
Таким образом, результаты исследования компонентного состава антрагликозидов коры крушины ломкой позволили установить, что доминирующим веществом данного сырья является франгулин А (6-О-а-1_-рамнопиранозид франгула-эмодина), имеющий особое диагностическое значение, что
может быть использовано для целей стандартизации.
Выводы
1. Из коры крушины ломкой (Frangula alnus Mill.) впервые в Российской Федерации выделены франгулин А (6-O-a-L-рамнопиранозид франгула-эмодина) и франгулин В (6-О-р-D-апиофуранозид франгула-эмодина).
2. Франгулин А как доминирующий антрагликозид представляет наибольший интерес в качестве химического диагностического признака коры крушины ломкой.
3. Разработана методика определения подлинности сырья крушины с использованием тонкослойной хроматографии путем обнаружения франгулина А в присутствии соответствующего стандартного образца.
Работа выполнена при поддержке проекта 02.740.11.0650 ФЦП «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 годы.
ЛИТЕРАТУРА
1. Государственная Фармакопея СССР. Одиннадцатое издание. Вып. 2.
М.: Медицина, 1990. 400 с. гущ
2. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов (фак-тов.). 2-е изд., перераб. и доп. Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ», 2007. 1239 с.
3. Wagner H., Bladt S. Plant Drug Analysis. A Thin Layer Chromatography Atlas. Berlin-Heidelberg-New York: Springer Verlag. 1996. 384 p.
4. Георгиевский В.П., Комисаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск: Наука, Сибирское отд., 1990. 333 с.
5. Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия: Учебник. М.: Медицина, 2002. 656 с.
6. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейство Rutaceae - Elaeagnaceae. Л.: Наука, 1988. С. 182-186.
7. Muzychkina R.A. Natural Anthraquinones. Biological properties and physicochemical characteristics. /Ed. by G.A. Tolstikov. Moscow: PHASIS, 1998. 864 p.
8. Wagner H. Pharmazeutische Biologie. Drogen und ihre Inhaltsstoffe. Stuttgart-New York: Gustav Fischer Verlag. 1993. 522 р.
9. European Pharmacopoeia. 4-th Ed. Rockville: United States Pharmacopoeia! Convention, Inc. 2002. P. 1224-1225.
