CC BY
121
УДК 615.277.3.012:615.453.6
M. A. Baryshnikova, O. L. Orlova, A. P. Polozkova, Z. S. Shprakh, N. A. Oborotova
CREATION OF THE AMIRONIN PHARMACEUTICAL DOSAGE FORM AS TABLETS
N. N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow
ABSTRACT
Amironin - D,L-a-amino-P(n-[n-bis(P-chlorethyl)aminopheoxi]phenylpropionic acid hydrochlorid. Tironinic structure of the carrier of alkylating group directs the drug towards thyroid and tumors deriving from that gland. Drug form of amironin for peroral use was developed. The results present technological characteristics of amironin hydrochlorid substance, technology for tablets production and methods of quality control were developed.
Key words: amironin, technological characteristics, tablets, quality control.
М. А. Барышникова, О. Л. Орлова, А. П. Полозкова, З. С. Шпрах, Н. А. Оборотова
РАЗРАБОТКА ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ АМИРОНИНА В ВИДЕ ТАБЛЕТОК
ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН, Москва
РЕЗЮМЕ
Амиронин - D,L-a-амино-P{n-[n-бис(P-хлорэтил)аминофенокси] фенилпропионовой кислоты гидрохлорид. Тирониновая структура носителя алкилирующей группы придает препарату направленность на щитовидную железу и опухоли, исходящие из нее. Разработана лекарственная форма амиронина для перорального применения в виде таблеток. Изучены технологические характеристики субстанции амиро-нина гидрохлорида, разработаны технология получения таблеток и методы контроля качества.
Ключевые слова: амиронин, технологические характеристики, таблетки, контроль качества.
ВВЕДЕНИЕ
Алкилирующие агенты находят наиболее широкое практическое применение среди различных групп синтетических противоопухолевых соединений. В соответствии с теорией о целесообразности применения цитостатиков - производных аминокислот как потенциальных антиметаболитов аминокислотного обмена злокачественных опухолей [2] в ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина синтезирована субстанция амирона в виде основания, эфира и кислоты. В биологических экспериментах in vivo показано, что амирон в виде кислоты (амиронин) наиболее активен и менее токсичен [9].
Амиронин представляет собой Б,Ь-а-амино-Р {п-[п-бис(Р-хлорэтил) аминофенокси] фенил} пропионо-вой кислоты гидрохлорид. Тирониновая структура носителя алкилирующей группы придает препарату направленность на щитовидную железу и опухоли, исходящие из нее. Амиронин создан на основе ориги-
нального отечественного препарата фентирина, полученного в 50-х гг. XX века. С 1977 г. фентирин был разрешен для широкого клинического применения при хроническом лимфолейкозе и лимфоретикулезе, выявлен значительный иммуносупрессивный эффект соединения. При дальнейших исследованиях фентирина оказалось, что препарат неоднороден и представляет собой смесь дигидрохлорида и этилового эфира Б,Ь-а-амино-Р{п-ди(2-хлорэтил)аминофенокси]фенил} про-пионовой кислоты в соотношениях 22-35 % и 6578 % соответственно. Трудности стандартизации препарата при промышленном выпуске привели к исключению фентирина из Реестра лекарственных средств РФ.
В сотрудничестве с Санкт-Петербургским технологическим университетом удалось усовершенствовать методы синтеза препарата и на основе фентирина получить индивидуальные вещества: продукт промежуточной стадии синтеза в виде основания фентири-
на, названный амироном, и его производные - гидрохлорид (амиронин) и этиловый эфир.
В экспериментах in vivo исследована противоопухолевая активность этих соединений, полученные результаты показали преимущество амиронина по сравнению с амироном и вторым его производным - этиловым эфиром амирона [5; 8].
Целью настоящего исследования явилось создание лекарственной формы амиронина. В связи с плохой растворимостью амиронина в воде нами предложена лекарственная форма для перорального применения в виде таблеток.
Таблетки обладают рядом преимуществ перед другими лекарственными формами: удобством применения; точностью дозирования активного вещества; возможностью регулировать всасывание лекарственных веществ из таблетки в месте растворения и во времени; возможностью сочетания лекарственных веществ, не совместимых по физико-химическим свойствам и терапевтическому действию; возможностью маскировать неприятный вкус и запах; производственными преимуществами.
Для создания лекарственной формы в виде таблеток, в первую очередь, необходимо было разработать смесь для таблетирования, обладающую соответствующими необходимыми технологическими характеристиками. Технологические характеристики порошков предопределяют возможности использования конкретных видов прессования и необходимость введения в таблетируемую смесь ингредиентов, ответственных как за характеристики смеси, обеспечивающие стабильность процесса таблетирования (текучесть, равномерность заполнения матрицы, адгезия к прессующему инструменту и т.п.), так и за качество получаемых таблеток (распадаемость, растворимость, твердость и т.п.). Поэтому, в первую очередь, при разработке таблеток амиронина изучены технологические характеристики субстанции, в том числе фракционный состав, форма и соотношение параметров размера частиц, объемные характеристики, сыпучесть или подвижность, смачиваемость, прессуемость. Данные характеристики определили вид прессования, необходимость введения дополнительных ингредиентов, обеспечивающих возможность процесса таблетирова-ния, и соответствие качества полученных таблеток требованиям Государственной Фармакопеи (ГФ) [6].
Контроль качества разрабатываемых лекарственных средств является одним из основных составляющих компонентов системы их создания. Решение проблемы контроля качества лекарств невозможно без критического отбора критериев качества. Поэтому важным этапом разработки лекарственной формы амиронина явилось создание проекта Фармакопейной Статьи Предприятия (ФСП).
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Субстанция амиронина синтезирована в лаборатории химического синтеза НИИ ЭДиТО ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН.
При проведении исследований использованы вспомогательные вещества, соответствующие требованиям нормативной документации: ГФ XI издания, отдельных Фармакопейных и Временных фармакопейных статей, ГОСТов и МРТУ.
Технологические характеристики амиронина исследованы на приборах фирмы Етека (Германия) с применением стандартных методик. Насыпную массу определяли путем 20-кратного взвешивания массы субстанции амиронина, свободно насыпанного в цилиндр вместимостью 10 мл. Для получения таблеток использовался лабораторный пресс фирмы Етека (Германия).
Оценку качества препарата проводили по следующим основным показателям, характерным для контроля качества таблеток: описание (внешний вид), подлинность, средняя масса таблеток и отклонение в массе, распадаемость, посторонние примеси, количественное определение, растворение.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Исследование технологических характеристик субстанции амиронина гидрохлорида
При исследовании фракционного состава оказалось, что амиронин является полидисперсным порошком. Фракции с размером частиц 0,1-0,2 мм составляют около 60 %, фракции с размером частиц 0,2-0,6 мм - около 40 %. Неоднородный фракционный состав субстанции амиронина требует дополнительной гомогенизации субстанции по размеру частиц.
При исследовании линейных размеров и формы частиц амиронина выяснилось, что они имеют различную форму, размеры и шероховатость. Известно, что характер поверхности порошка имеет определенное значение для прогнозирования прочности таблетки. Так как частицы амиронина имеют слабо шероховатую поверхность и глубина выступов и впадин на поверхности частиц находится в пределах 1/2 - 1/3 их размера, порошок амиронина способен спрессовываться.
При исследовании текучести (сыпучести) оказалось, что субстанция амиронина плохо и нестабильно высыпается из вибрирующей воронки. Поэтому можно говорить лишь о приблизительном значении коэффициента текучести. Для улучшения текучести порошков необходимо увеличение фракции укрупненных и утяжеленных частиц, что обычно достигается гранулированием или созданием смеси, содержащей более крупные и тяжелые частицы.
При исследовании насыпной массы субстанции ами-ронина показано, что при свободном насыпании в цилиндр вместимостью 10 мл она составила 0,08-0,09 г/см3.
Приведенные технологические характеристики субстанции амиронина показывают, что прямое прессование неприемлемо. Для коррекции технологических характеристик субстанции амиронина массу для таблетирования получали методом влажной грануляции, после которой фракционный состав гранул для таблетирования стал равномерным (размер частиц
около 0,6 мм), насыпная масса составила 0,2 г/см3, а Описание (Внешний вид). Все полученные об-
сыпучесть стала равномерной и составила 3,0 г/с, разцы представляли собой круглые таблетки бело-смесь не электризовалась (табл. 1). го с сероватыми или желтоватым оттенком, с не-
Таблица 1
Технологические характеристики субстанции амиронина
Наименование технологической характеристики Субстанция Гранулы для таблетирования
Фракционный состав, мм 0,1-0,6 0,6
Насыпная масса, г/см3 0,08-0,09 0,2
Текучесть (сыпучесть), г/с около 0,1 3,0
Выбор вспомогательных веществ
Так как амиронин частично растворим в воде, в качестве гранулирующей жидкой фазы выбран 95%-ный этиловый спирт, а в качестве гранулирующего агента предложена легко растворимая в нем ацетил-фталилцеллюлоза. Для грануляции использовали 1 %-ный раствор ацетилфталилцеллюлозы.
Для улучшения текучести и коррекции насыпной массы в состав таблеток добавили крахмал. Кроме того, в таблетируемую массу введен стабилизатор -натрия хлорид, замедляющий гидролиз хлорэтилами-нов в присутствии влаги и корректирующий насыпную массу. Для исключения залипаемости на прессующий инструмент в состав таблеток введена «опуд-ривающая смесь», состоящая из талька, соли стеариновой кислоты и крахмала.
Таким образом, для получения модели таблеток ами-ронин смешивали с крахмалом и хлоридом натрия, увлажняли гранулирующей жидкостью и тщательно растирали до получения однородной массы. Полученную смесь сушили на воздухе в течение сут, затем растирали, добавляли опудривающую смесь и таблетировали. Но полученные таким образом модели не соответствовали требованиям ГФ XI по критерию «распадаемость». Все исследуемые модели таблеток набухали, но не распадались. Добавление в пропись таблеток амиронина разрыхлителя аэросила позволило получить таблетки, соответствующие требованям ГФ XI (распадаемость 7-8 мин). В результате проведенных исследований разработан следующий состав таблеток (в граммах):
Амиронин - 0,25 Крахмал - 0,10 Натрия хлорид - 0,05 Аэросил - 0,05 Опудривающая смесь - 0,05 Масса таблетки - 0,5 г
Контроль качества
Цель данного исследования - обеспечить объективный контроль за химико-фармацевтическими характеристиками новой лекарственной формы амиро-нина. Основные критерии качества лекарственной формы амиронина выбраны на основе требований ГФ XI, предъявляемых к таблеткам [6].
значительными вкраплениями серого цвета, без запаха.
Подлинность таблеток амиронина определяли спектрофотометрически и цветной реакцией с нин-гидрином. Ультрафиолетовый спектр (УФ-спектр) раствора препарата в спирте метиловом в области от 210 до 320 нм имеет максимумы поглощения при 260±2 нм и 301±2 нм.
Испытание на специфические примеси проводили с помощью тонкослойной хроматографии на хроматографических пластинках «Силуфол» УФ-254 в системе растворителей н-бутанол : кислота уксусная ледяная : вода в соотношении 3:1:1. Хроматограммы просматривали в УФ-свете или проявляли раствором нингидрина с последующим нагреванием при 110 °С в течение 15 мин. Пятна веществ, присутствующих в пробе, соответствовали по положению и интенсивности окрашивания пятнам стандартного образца вещества-свидетеля.
Среднюю массу таблеток, распадаемость, растворение, содержание талька определяли согласно требованиям ГФ XI. Таблетки всех полученных серий соответствовали требованиям ГФ XI по данным показателям.
Количественное определение. Наиболее удобным, быстрым и достаточно точным методом в фармацевтическом анализе, является метод УФ-спектрофотометрии [1; 3; 4].
В литературе приведены спектры многих производных хлорэтиламинов, имеющих, как правило, в растворах метанола и подкисленных водных растворах 2 полосы поглощения с максимумами при 260±2 нм и 301±2 нм. При этом интенсивность 1-й полосы на порядок превосходит интенсивность 2-й [7].
Обычно процедура разработки методики количественного определения по УФ-спектрам в лекарственной форме включает в себя ряд последовательно выполняемых этапов [10].
Для определения амиронина в таблетках применена стандартная спектрофотометрическая методика.
Электронный спектр поглощения 0,001%-ного раствора амиронина в метиловом спирте имеет выраженный максимум поглощения - при 260±2 нм [10]. Установлено, что раствор амиронина в метило-
вом спирте подчиняется закону Бугера-Ламберта-Бера в необходимом диапазоне концентраций от 2 до 20 мкг/мл (см. рисунок). Исследование влияния вспомогательных веществ на спектральные характеристики амиронина показало, что присутствие крахмала, талька, соли стеариновой кислоты и натрия хлорида не изменяет положения характеристического максимума, так как ни одно из вышеперечисленных веществ в спирте метиловом нерастворимо. Поэтому для количественного определения амиронина в таблетках в качестве раствора сравнения был использован спирт метиловый.
Методика. Около 0,5 г (точная навеска) растертых таблеток амиронина помещают в химический стакан вместимостью 50 мл, добавляют 30 мл 30%-ной уксусной кислоты и перемешивают в течение 15 мин. Полученную суспензию количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем 30%-ной уксусной кислотой до метки. Тщательно перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата. 0,2 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем метанолом до метки и перемешивают. Измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 260±2 нм в кювете с толщиной оптического слоя 10 мл относительно раствора сравнения. Параллельно определяют оптическую плотность стандартного раствора амиронина.
Приготовление стандартного раствора. Около
0,25 г субстанции амиронина (точная навеска) и
0,25 г (точная навеска) смеси вспомогательных ингредиентов, входящих в таблетку, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют уксусной кислоты 30%-ной около 70 мл, 0,20 мл 3%-ного спиртового раствора ацетилфталилцеллюлозы и тщательно взбалтывают в течение 15 мин. Доводят уксусной кислотой 30%-ной до метки, взбалтывают и фильтруют, отбрасывая первые 10 мл фильтрата, через бумажный фильтр. 0,2 мл фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят метанолом до метки.
Приготовление раствора сравнения. Точную навеску «смеси вспомогательных ингредиентов», входящих в таблетку, равную 0,25 г, 0,2 мл 3%-ного спиртового раствора ацетилфталилцеллюлозы помещают в мерную колбу вместимость 100 мл и тщательно взбалтывают с 70 мл уксусной кислоты 30%-ной в течение 15 мин, доводят уксусной кислотой 30%-ной до метки, снова взбалтывают, фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 10 мг фильтрата. 0,2 мл фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят метанолом до метки.
Содержание амиронина в таблетке рассчитывают по формуле:
А х Сст.хК
Проверка соблюдения закона Бугера-Ламберта-Бера для раствора амиронина в спирте метиловом:
по оси абсцисс - концентрация исследуемого раствора, мкг/мл;
по оси ординат - оптическая плотность исследуемого раствора.
где:
Х - содержание амиронина в таблетке, г;
А! - оптическая плотность исследуемого раствора;
Ад. - оптическая плотность стандартного раствора;
Сст - концентрация амиронина в стандартном растворе, г/ мл;
К - коэффициент разбавления, равный 25000.
Содержание амиронина в таблетке должно составлять 0,237-0,263 г.
В табл. 2 приведены результаты количественного определения амиронина в различных сериях лекарственной формы.
Предложенная методика количественного определения амиронина в таблетках может быть использована при контроле качества препарата в процессе как наработок, так и хранения. Относительная ошибка методики не превышает 1,5 %.
Срок годности таблеток исследуется.
ВЫВОДЫ
1. Исследованы технологические характеристики субстанции амиронина. Показано, что прямое прессование порошка амиронина неприемлемо.
2. Выбраны вспомогательные вещества для получения таблетированной лекарственной форы амиро-нина. Для грануляции смеси амиронина со вспомогательными веществами предложен 1%-ный раствор ацетилфталилцеллюлозы в спирте этиловом 95%-ном.
3. Разработана технология получения таблеток амиронина.
4. Разработан проект ФСП на таблетки амиронина.
Таблица 2
Результаты количественного определения амиронина в таблетках различных серий
Серия лекарственной формы
Оптическая
плотность
Найдено амиронина, г
Метрологические
характеристики
011205
0,454
0,458
0,454
0,464
0,462
0,467
0,239
0,241
0,239
0,244
0,243
0,246
Х=0,242 8х=2,828х10"3 8-х=1,155х10": ЛХ=2,968х10": б=1,226 %
031205
0,477
0,488
0,486
0,481
0,483
0,490
0,251
0,257
0,256
0,253
0,254
0,258
Х=0,255 8х=2,756х10"3 Б-х=1,125х 10-3 ЛХ=2,893х10": б=1,134 %
081106
0,488
0,492
0,483
0,477
0,494
0,486
0,257
0,259
0,254
0,251
0,260
0,256
Х=0,256 8х=3,316х10"3 8-х=1,354х10': ЛХ=3,481х10": б=1,359 %
ЛИТЕРАТУРА
1. Арзамасцев А. П. Ультрафиолетовые и инфракрасные спектры лекарственных веществ. - Атлас. - Москва, 1981. - с. 176.
2. Белоусова А. К. Биохимические подходы к химиотерапии опухолей. - Л., 1965. - 205 с.
3. Берштейн И. Я., Каминский Ю. Л. Спектрофотометрический анализ в органической химии. - Л., 1986. - 200 с.
4. Булатов М. И., Калинкин И. П. Практическое руководство по фотометрическим методам анализа. -Л., 1986. - 432 с.
5. Голубева И. С., Яворская Н. П., Смирнова Л. И. и др. Использование фентирина и амирона для иммуносупрессии животных с ксенографтами опухолей человека // Онкоиммунология. - 2002. - Т. 4., № 2. - С. 293.
6. ГФ XI, Вып. 2. - М.: Медицина, 1990. - С. 154.
7. Лопатин П. В. Основы направленного поиска и разработка готовых противоопухолевых лекарств из
группы хлорэтиламинов: Дис. ...д-ра фарм. наук. М., 1982.
8. Чикинева Н. А, Голубева И. С., Яворская Н. П. и др. Амирон как производное иммунодепрессанта и противоопухолевого средства фентирина // Иммуно-тропная терапия. - 2002. - Т.4, № 2. - С. 375-6.
9. Чикинева Н. А., Яворская Н. П., Голубева И. С. Изучение противоопухолевой активности нового производного хлорэтиламина - амирона и его производных // Химико-фармацевтический журнал. - 2001. - Т. 35, № 9. - С. 8-10.
10. Шпрах З. С. Совершенствование методов стандартизации и контроля качества противоопухолевых лекарственных средств, производных хлорэтиламина на основе аминокислот, их дипептидов и гидразидов. Дис. ... канд. фарм. наук. М., 1996. - 215 с.
Поступила 29.11.2006.
