CC BY
12
72 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
А.В. Суханова1-3, М.А. Барышникова2- 3, И.Р. Набиев1- 3
конъюгаты квантовых точек в функциональном имэджинге и высокочувствительных биохимических тестах
Университет Реймса Шампань-Арденн, Реймс, Франция; 2ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия;
3Национальный исследовательский ядерный университет «МИФИ», Москва, Россия
Ранняя детекция злокачественных новообразований, и особенно микрометастазов и диссеминированных раковых клеток, является до сих пор непростой задачей. Внедрение высокочувствительных диагностических средств в онкологии улучшит диагностическую и лечебную стратегии с хорошими шансами на увеличение эффективности лечения пациентов. С этой целью мы демонстрируем в настоящей работе использование нанозондов, созданных на базе конъюгатов однодоменных антител (одАТ) и флуоресцентных квантовых точек (КТ), для одно- и двухфо-тонной детекции и имэджинга опухолевых клеток рака молочной железы и поджелудочной железы, экспрессиру-ющих HER2 или CEA онкомаркеры, в биологических образцах.
Существующие фотонные методы in vitro и in vivo диагностики и имэджинга страдают от фотовыцветания красителей и трудностей их детекции в оптически «шумном» клеточном и тканевом окружении. Как альтернативный материал, полупроводниковые КТ могут быть высокоэффективны для клеточного мечения и сенсинга. Нами показано, что при анализе тонких (5—10 мкм), заключенных в парафин, и толстых (50 мкм), заключенных в агарозу, срезов тканей удается детектировать HER2- и CEA-поло-жительные опухолевые клетки человека, инфильтрованные в окружающие их здоровые ткани или метастазирующие в различные органы, включая мозг, яичники, легкие, печень и лимфатические узлы. Показано, что нанозонды КТ-одАТ существенно превосходят традиционные флуоресцентно-меченные антитела по чувствительности детекции диссеминированных раковых клеток и микрометастазов. КТ-конъюгаты обладают более низким фотообесцвечиванием и более высокой яркостью флуоресценции, обеспечивая лучшую дискриминацию положительных сигналов по сравнению с фоном. Кроме этого, очень высокие сечения двухфотонного поглощения КТ и маленький размер нанозондов обеспечивают эффективный имэджинг толстых срезов тканей, недоступный для традиционных фотонных зондов. Таким образом, разработанные конъюгаты КТ-одАТ являются мощным средством для детекции микрометастазов и диссеминирован-ных опухолевых клеток, которое поможет улучшить раннюю диагностику рака и отслеживать распространение опухоли.
А.Н. Тевяшова12, Е.Н. Бычкова1, Н.М. Малютина1, Л.Г. Деженкова1
разработка Готовой лекарственной формы противоопухолевого препарата оливамида, нового полусинтетического производного оливомицина а
ФГБНУ НИИНА, Москва, Россия; 2РХТУ им. Д.И. Менделеева, Москва, Россия
введение. Выбор лекарственной формы имеет особое значение для достижения терапевтической эффективности и безопасности при разработке лекарственных препаратов. Оливамид (^^диметиламиноэтиламид 1'-дез-(2,3-диги-дрокси-^бутироил)-1'-карбоксиоливомицина А) является производным антибиотика оливомицина А (ЛХТА-1599, М.Н. Преображенская и др. Патент РФ № 2 453 552, 2012), отобранным в ходе предварительных исследований для углубленных доклинических исследований в качестве кандидата в противоопухолевые средства.
Цель исследования. Задача исследования заключалась в разработке готовой лекарственной формы оливамида, обладающей хорошей растворимостью в водных средах, характеризующейся высокой стабильностью при хранении и имеющей высокую противоопухолевую активность.
материалы и методы. Оливамид получен реакцией пери-одатного окисления боковой цепи агликона оливомицина и последующим амидированием карбоксильной группы промежуточного интермедиата, оливомицина SA, 2-аминоддиме-тиламином в присутствии конденсирующего агента РуВОР. Изучение стабильности готовой лекарственной формы проводили методом «ускоренного старения». Антипролифера-тивную активность определяли в МТТ-тесте.
результаты. В ходе проведенных работ исследованы жидкие лекарственные формы, предназначенные для парентерального введения, и лиофильно высушенные лекарственные формы для парентерального введения, содержащие различные вспомогательные вещества. Для полученных прототипов готовых лекарственных форм для парентерального введения на основе оливамида изучены стабильность при хранении в условиях ускоренного старения и антипролиферативная активность в отношении опухолевых клеток линии НСТ-116. Установлено, что ни один из прототипов жидких лекарственных форм не обладал достаточной стабильностью в условиях ускоренного старения ввиду высокой лабильности фармацевтической субстанции оливамида в растворе. В качестве неактивных формообразующих вспомогательных веществ (наполнителей) для лиофильно высушенных лекарственных форм исследованы маннит и лактоза, в качестве пролонгатора действия — поливинилпирролидон, в качестве модификаторов действия и стабилизаторов — 3-гидрокосипропил-Р-циклодекстрин и полоксамер 188 (Р1игопю® F-68), в качестве стабилизаторов — аскорбиновая кислота и бензоат натрия. На основании данных о качестве твердых готовых лекарственных форм (способности смеси давать устойчивую таблетку после лиофильной сушки), стабильности в условиях искусственного старения и антипролиферативной активности среди прототипов готовых лекарственных форм отобран оптимальный состав, обеспечивающий хорошую растворимость, высокую стабильность и высокую противоопухолевую активность готовой лекарственной форме на основе оливамида.
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
73
Заключение. В ходе проведенных работ разработана готовая лекарственная форма Оливамида, обладающая хорошей растворимостью, высокой стабильностью и противоопухолевой активностью. Готовая лекарственная форма «оливамид, лиофилизат для приготовления инъекций» передана на дальнейшие доклинические исследования.
Н.П. Ткаченко, М.А. Каплан, И.А. Замулаева, В.Н. Капинус, Е.В. Ярославцева-Исаева, Е.И. Селиванова, И.С. Спиченкова
эффекты системной фотодинамической терапии при лечении пациентов со злокачественными новообразованиями кожи
МРНЦим. А.Ф. Цыба — филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, Обнинск, Калужская область, Россия
введение. Известно, что циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК) оказывают влияние на течение опухолевого процесса и эффективность лечения. Опухолевые стволовые клетки являются фракцией, резистентной к действию ионизирующего излучения и ряда химиопрепаратов.
Цель исследования. Анализ динамики количества ЦОК после локальной и системной фотодинамической терапии (ФДТ) у пациентов со злокачественными новообразованиями кожи, а также изучение механизмов системной ФДТ
материалы и методы. Обследовано 39 пациентов. Среди них у 11 больных базально-клеточным раком кожи (БКРК) сТ1—2^М0 проведена локальная ФДТ; у 9 пациентов с БКРК сТ1—2^М0 — локальная ФДТ в сочетании с системной; 19 пациентов с меланомой получили сеанс системной ФДТ Методика сеанса системной ФДТ заключается в одновременном внутривенном введении фотосенсибилизатора хлоринового ряда фотолона (1,0—1,2 мг/кг) и проведении лазерного облучения крови пациента на аппарате «Латус 0,4» (X = 662 нм, мощность 20 мВт) при помощи световода, вводимого в кубитальную вену противоположной руки. Продолжительность сеанса — 50 мин. Сеанс локальной ФДТ проводился через 2 ч: световая доза 200—300 Дж/см2, плотность мощности — 300—400 мВт/см2. При помощи проточной цитометрии проводили идентификацию ЦОК по иммунофенотипу Ер-САМ (CD326)+CD45-. Среди ЦОК определяли опухолевые клетки, экспрессиру-ющие маркер СD44, который применяется для выявления стволовых (стволовоподобных) клеток опухолей.
результаты. Через 3 сут после лечения в подгруппе пациентов с БКРК, получавших локальную ФДТ в сочетании с системной, отмечено снижение частоты ЦОК более чем в 2 раза от исходной величины (р <0,05). Наблюдалась тенденция (р = 0,145) к снижению частоты ЦОК в группе больных меланомой, получивших только сеанс системной ФДТ Не было изменений частоты ЦОК в подгруппе пациентов с БКРК, получавших только локальную ФДТ. Подобным образом после лечения изменялось количество стволовых CD44+ клеток. Уменьшение частоты ЦОК сопровождалось повышением уровня их апоптотической гибели.
Заключение. Наши данные указывают на эффективность системной ФДТ у пациентов со злокачественными
новообразованиями кожи, отмечена элиминация ЦОК, включая стволовоподобные опухолевые клетки. Причиной уменьшения частоты ЦОК, предположительно, является гибель этих клеток, в том числе путем апоптоза. Системная ФДТ является эффективным дополнением к традиционным методам лечения опухолевых новообразований кожи.
Д. С. Третьякова, С.В. Хайдуков, Е.Л. Водовозова
влияние липофильного пролекарства метотрексата в мембране липосом на взаимодействия с субпопуляциями лейкоцитов крови человека
ФГБУН ИБХ РАН, Москва, Россия
введение. Ранее нами показано, что липосомы размером 100 нм на основе природных фосфолипидов, несущие в липидном бислое метотрексат в виде липофильного пролекарства — диолеоилглицеридного сложного эфира (MTXDG), менее токсичны и эффективнее ингибируют рост опухоли по сравнению с интактным метотрексатом на модели Т-клеточной лимфомы мышей.
Цель исследования. Изучение влияния введения MTXDG в состав липосом на их взаимодействия с субпопуляциями лейкоцитов крови человека ex vivo с помощью ци-тофлуориметрии, а также установление вклада ганглиозида GM1 в экранирование липосом от захвата клетками моно-цитарно-макрофагальной защитной системы. Известно, что ганглиозид GM1 стабилизирует липосомы в циркуляции.
материалы и методы. Методом экструзии через поры размером 100 нм получали липосомы на основе яичного фос-фатидилхолина (ePC) следующего состава: L1 — чистый ePC, L2 - ePC-MTXDG, 9 : 1 (мол.), L3 - ePC-MTXDG-ганглио-зид GM1, 8 : 1 : 1 (мол.). Все препараты липосом содержали 1 мол. % флуоресцентно-меченного фосфатидилхолина. Свежую кровь здоровых доноров, собранную над гепарином, инкубировали с липосомами (10 : 1, об.) при 37 °С от 30 мин до 3 ч, затем образцы промывали на холоде, высаживали клетки центрифугированием и обрабатывали гипотоническим буфером, содержащим хлорид аммония, для лизиса эритроцитов. Чтобы исключить сигнал флуоресценции непоглощенных липосом, адсорбированных на поверхности клеток, использовали тушитель флуоресценции - кристаллический фиолетовый. Измерения проведены на проточном цитофлуориметре FC500 (Beckman Coulter, США) и проанализированы с помощью программного пакета CXPanalysis (Beckman Coulter, США).
результаты. Гистограммы FACS-анализа свидетельствуют о принципиальной разнице в связывании с лейкоцитами липосом с MTXDG (L2 и L3) и липосом без пролекар-ства (L1). Уже через 30 мин инкубации 85 % нейтрофилов содержали липосомы L1, а через 2 ч - все 100 %. Моноциты более медленно поглощали липосомы L1, но к 2 ч инкубации практически вся популяция их захватывала. Напротив, липосомы L2 и L3 в течение 30 мин ассоциировали лишь с 15 и 11 % нейтрофилов соответственно. Затем пул отреагировавших нейтрофилов постепенно увеличивался - к 3 ч инкубации он достигал 61,5 и 70 % для липосом L2 и L3 соответственно; в ходе всей инкубации степень фагоцитоза этих липосом продолжала
