CC BY
11
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
73
Заключение. В ходе проведенных работ разработана готовая лекарственная форма Оливамида, обладающая хорошей растворимостью, высокой стабильностью и противоопухолевой активностью. Готовая лекарственная форма «оливамид, лиофилизат для приготовления инъекций» передана на дальнейшие доклинические исследования.
Н.П. Ткаченко, М.А. Каплан, И.А. Замулаева, В.Н. Капинус, Е.В. Ярославцева-Исаева, Е.И. Селиванова, И.С. Спиченкова
эффекты системной фотодинамической терапии при лечении пациентов со злокачественными новообразованиями кожи
МРНЦим. А.Ф. Цыба — филиал ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, Обнинск, Калужская область, Россия
введение. Известно, что циркулирующие опухолевые клетки (ЦОК) оказывают влияние на течение опухолевого процесса и эффективность лечения. Опухолевые стволовые клетки являются фракцией, резистентной к действию ионизирующего излучения и ряда химиопрепаратов.
Цель исследования. Анализ динамики количества ЦОК после локальной и системной фотодинамической терапии (ФДТ) у пациентов со злокачественными новообразованиями кожи, а также изучение механизмов системной ФДТ
материалы и методы. Обследовано 39 пациентов. Среди них у 11 больных базально-клеточным раком кожи (БКРК) сТ1—2^М0 проведена локальная ФДТ; у 9 пациентов с БКРК сТ1—2^М0 — локальная ФДТ в сочетании с системной; 19 пациентов с меланомой получили сеанс системной ФДТ Методика сеанса системной ФДТ заключается в одновременном внутривенном введении фотосенсибилизатора хлоринового ряда фотолона (1,0—1,2 мг/кг) и проведении лазерного облучения крови пациента на аппарате «Латус 0,4» (X = 662 нм, мощность 20 мВт) при помощи световода, вводимого в кубитальную вену противоположной руки. Продолжительность сеанса — 50 мин. Сеанс локальной ФДТ проводился через 2 ч: световая доза 200—300 Дж/см2, плотность мощности — 300—400 мВт/см2. При помощи проточной цитометрии проводили идентификацию ЦОК по иммунофенотипу Ер-САМ (CD326)+CD45-. Среди ЦОК определяли опухолевые клетки, экспрессиру-ющие маркер СD44, который применяется для выявления стволовых (стволовоподобных) клеток опухолей.
результаты. Через 3 сут после лечения в подгруппе пациентов с БКРК, получавших локальную ФДТ в сочетании с системной, отмечено снижение частоты ЦОК более чем в 2 раза от исходной величины (р <0,05). Наблюдалась тенденция (р = 0,145) к снижению частоты ЦОК в группе больных меланомой, получивших только сеанс системной ФДТ Не было изменений частоты ЦОК в подгруппе пациентов с БКРК, получавших только локальную ФДТ. Подобным образом после лечения изменялось количество стволовых CD44+ клеток. Уменьшение частоты ЦОК сопровождалось повышением уровня их апоптотической гибели.
Заключение. Наши данные указывают на эффективность системной ФДТ у пациентов со злокачественными
новообразованиями кожи, отмечена элиминация ЦОК, включая стволовоподобные опухолевые клетки. Причиной уменьшения частоты ЦОК, предположительно, является гибель этих клеток, в том числе путем апоптоза. Системная ФДТ является эффективным дополнением к традиционным методам лечения опухолевых новообразований кожи.
Д. С. Третьякова, С.В. Хайдуков, Е.Л. Водовозова
влияние липофильного пролекарства метотрексата в мембране липосом на взаимодействия с субпопуляциями лейкоцитов крови человека
ФГБУН ИБХ РАН, Москва, Россия
введение. Ранее нами показано, что липосомы размером 100 нм на основе природных фосфолипидов, несущие в липидном бислое метотрексат в виде липофильного пролекарства — диолеоилглицеридного сложного эфира (MTXDG), менее токсичны и эффективнее ингибируют рост опухоли по сравнению с интактным метотрексатом на модели Т-клеточной лимфомы мышей.
Цель исследования. Изучение влияния введения MTXDG в состав липосом на их взаимодействия с субпопуляциями лейкоцитов крови человека ex vivo с помощью ци-тофлуориметрии, а также установление вклада ганглиозида GM1 в экранирование липосом от захвата клетками моно-цитарно-макрофагальной защитной системы. Известно, что ганглиозид GM1 стабилизирует липосомы в циркуляции.
материалы и методы. Методом экструзии через поры размером 100 нм получали липосомы на основе яичного фос-фатидилхолина (ePC) следующего состава: L1 — чистый ePC, L2 - ePC-MTXDG, 9 : 1 (мол.), L3 - ePC-MTXDG-ганглио-зид GM1, 8 : 1 : 1 (мол.). Все препараты липосом содержали 1 мол. % флуоресцентно-меченного фосфатидилхолина. Свежую кровь здоровых доноров, собранную над гепарином, инкубировали с липосомами (10 : 1, об.) при 37 °С от 30 мин до 3 ч, затем образцы промывали на холоде, высаживали клетки центрифугированием и обрабатывали гипотоническим буфером, содержащим хлорид аммония, для лизиса эритроцитов. Чтобы исключить сигнал флуоресценции непоглощенных липосом, адсорбированных на поверхности клеток, использовали тушитель флуоресценции - кристаллический фиолетовый. Измерения проведены на проточном цитофлуориметре FC500 (Beckman Coulter, США) и проанализированы с помощью программного пакета CXPanalysis (Beckman Coulter, США).
результаты. Гистограммы FACS-анализа свидетельствуют о принципиальной разнице в связывании с лейкоцитами липосом с MTXDG (L2 и L3) и липосом без пролекар-ства (L1). Уже через 30 мин инкубации 85 % нейтрофилов содержали липосомы L1, а через 2 ч - все 100 %. Моноциты более медленно поглощали липосомы L1, но к 2 ч инкубации практически вся популяция их захватывала. Напротив, липосомы L2 и L3 в течение 30 мин ассоциировали лишь с 15 и 11 % нейтрофилов соответственно. Затем пул отреагировавших нейтрофилов постепенно увеличивался - к 3 ч инкубации он достигал 61,5 и 70 % для липосом L2 и L3 соответственно; в ходе всей инкубации степень фагоцитоза этих липосом продолжала
74
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
увеличиваться. Моноциты же интенсивнее и быстрее поглощали липосомы L2 и L3: 20 % от их популяции уже через 30 мин показывали максимальный сигнал флуоресценции нейтрофилов. К концу инкубации пул положительных моноцитов не превышал 70 %. Поглощения липосом всех типов лимфоцитами не наблюдалось.
Заключение. Установлено, что липосомы, несущие в бислое липофильное пролекарство метотрексата, менее интенсивно поглощаются клетками моноцитарно-макро-фагальной защитной системы по сравнению с липосомами из фосфатидилхолина без пролекарства. Введение гангли-озида GM1 в мембрану липосом не оказало значительного влияния на взаимодействия с лейкоцитами. Причиной большей устойчивости липосом с MTXDG может быть отрицательный заряд, обусловленный остатком метотрекса-та молекулы пролекарства на поверхности мембраны.
Работа поддержана грантом РФФИ № 16-04-01585.
И.Д. Трещалин, А.Н. Тевяшова, Э.Р. Переверзева
экспериментальное изучение противоопухолевой активности нового полусинтетического антибиотика оливамида
ФГБНУ НИИНА, Москва, Россия
введение. Несмотря на значительные успехи в разработке методов профилактики, диагностики и лечения, проблема онкологических заболеваний является одной из наиболее важных в современной медицине. По данным мировой статистики, злокачественные опухоли различных локализаций занимают лидирующие позиции среди причин смертности населения в России и мире. Существующие методы хирургического, лучевого и лекарственного лечения онкологических заболеваний не всегда приводят к полному и стойкому излечению пациентов. Поэтому разработка новых противоопухолевых препаратов и методов борьбы со злокачественными образованиями является одной из приоритетных задач. В ФГБНУ НИИНА разработан оригинальный метод химической трансформации оливо-мицина и получен новый полусинтетический противоопухолевый препарат оливамид с улучшенными химиотера-певтическими свойствами.
Цель исследования. Выявление спектра противоопухолевой активности и отработка оптимального режима введения готовой лекарственной формы препарата оли-вамид.
материалы и методы. Для проведения исследования использованы образцы готовой лекарственной формы оливамида. Исследования проведены на мышах BDF1 с перевиваемыми опухолями — лимфоцитарной лейкемией Р-388, меланомой В-16, карциномой легкого Льюис (LLC) и аденокарциномой молочной железы мышей АК-755. Раствор готовой лекарственной формы вводили внутрибрю-шинно ежедневно в течение 5 дней в разовых дозах, равных 0,6 и 0,8 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали доксорубицин (Докс) (адрибластин быстрорастворимый 10 мг производства Pfizer) в том же режиме в разовой дозе 1,5 мг/кг. Лечение начинали через 24 ч после внутри-брюшинной перевивки Р-388 и через 48 ч после подкожной перевивки солидных опухолей (В-16, LLC и АК-755).
Противоопухолевый эффект оценивали по увеличению средней продолжительности жизни по сравнению с нелеченым контролем (увеличение продолжительности жизни (УПЖ), %) в случае Р-388 и по торможению роста опухоли (ТРО, %) для солидных опухолей.
результаты. При применении препарата во всех экспериментах лекарственной гибели мышей не наблюдалось. В отношении лейкоза Р-388 оливамид в обеих изученных дозах проявил достоверную противоопухолевую активность, сопоставимую с активностью Докс, примененного в оптимальном режиме. Максимальное УПЖ составило 62,5 % в группе, получавшей препарат в дозе 0,8 мг/кг. При лечении мышей с меланомой В-16 препарат проявил высокую противоопухолевую активность, значительно превосходящую активность Докс. Так, на 11-е сутки после перевивки опухоли ТРО для оливамида составило 94,1 % (0,6 мг/кг) и 98,8 % (0,8 мг/кг), а для Докс - 51,9 %. Уже на 14-е сутки противоопухолевая активность Докс не регистрировалась, тогда как активность оливамида сохранялась до 18-21 сут. При изучении противоопухолевой активности на мышах с АК-755 и LLC препарат проявил выраженную достоверную противоопухолевую активность, которая сохранялась до 18-21 сут после перевивки опухоли. Более выраженно этот эффект проявился при применении препарата в дозе 0,8 мг/кг в течение 5 дней.
Заключение. Таким образом, при ежедневном введении в течение 5 дней препарат проявляет высокую противоопухолевую активность в отношении лимфолейкоза Р-388, меланомы В-16, аденокарциномы молочной железы АК-755 и карциномы легкого Льюис (LLC), которая превышает противоопухолевую активность Док.
И.Д. Трещалин, А.Е. Щекотихин, М.И. Трещалин, Э.Р. Переверзева
противоопухолевая активность фармацевтических композиций антрафурана на мышах
ФГБНУ НИИНА, Москва, Россия
введение. Низкая биодоступность и нестабильность противоопухолевых средств антрахинонового ряда (доксо-рубицин, рубомицин, митоксантрон) не позволяют вводить их пероральным путем. Поэтому для нового противоопухолевого препарата этого ряда - антрафурана, полученного в ФГБНУ НИИНА, были разработаны фармацевтические композиции для парентерального применения. Позже было показано, что при пероральном способе введения водный раствор субстанции антрафурана обладает противоопухолевой активностью. С целью повышения биодоступности и улучшения противоопухолевых свойств были разработаны фармацевтические композиции для получения пероральных дозированных лекарственных форм.
Цель исследования. Изучение противоопухолевой активности фармацевтических композиций для перорально-го применения и выявление лекарственной формы с наилучшими лечебными свойствами.
материалы и методы. Исследование проведено на 100 мышах BDF1 самках c внутрибрюшинно перевитым лимфолейкозом Р-388 и подкожно трансплантированной карциномой легкого Льюис (LLC). Жидкую и твердую
