РАЗРАБОТКА БЕСФЕРМЕНТНЫХ МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ ОСТРОВКОВОЙ ТКАНИ ИЗ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ Текст научной статьи по специальности «Биотехнологии в медицине»

МАТЕРИАЛЫ V НАЦИОНАЛЬНОГО КОНГРЕССА ПО РЕГЕНЕРАТИВНОЙ МЕДИЦИНЕ

211

с наличием (colV+) и отсутствием (colV-) N-концевого участка. Мы получили коллаген V типа из плаценты человека методом ферментативной экстракции методом минимизирующим его деградацию. Методом ионообменной жидкостной хроматографии осуществляли очистку и разделение коллагена V типа на фракции colV+ и colV-. Целостность белка оценивали методом имуноблоттинга. Из коллагена I и V типа создавали композитные матрицы colV+ и colV-. Методом сканирующей электронной микроскопии оценивали диаметр фибрилл. С помощью МТТ-теста, световой и флуоресцентной микроскопии, а также обработки изображений при помощи программного обеспечения ImageJ изучили адгезию и пролиферацию клеток и оценили их морфологию на композитных матрицах.

Показано уменьшение диаметра гибридных фибрилл в присутствии коллагена V типа. Для клеток роговицы линии SIRC показано, что матрицы colV+ оказывает отрицательное влияние на адгезию, образцы colV- не оказывают существенного влияния на адгезию. Для матриц colV- показано увеличение пролиферативной активности клеток с максимумом в матрицах с процентным содержанием коллагена V типа 30%. Также показано, что матрицы colV+ способствовали распластанности клеток, напротив colV-отрицательно влияли на распластанность. Коллаген V типа без коллагена I типа оказывает отрицательное влияние на пролиферацию для клеток SIRC и мезенхимных стволовых клеток. Работа выполнена при финансовой поддержке Российского Научного Фонда (Проект № 21-74-20120).

Литература:

1. Adachi E., Hayashi T. Connect Tissue Res. 1986. V.14. № 4. P.

257-266.

РАЗРАБОТКА БЕСФЕРМЕНТНЫХ МЕТОДОВ ВЫДЕЛЕНИЯ ОСТРОВКОВОЙ ТКАНИ ИЗ ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

Г.Н. Скалецкая, Н.Н. Скалецкий, Г.Н. Бубенцова, В.В. Ильницкий, В.И. Севастьянов

ФГБУ НМИЦ трансплантологии и искусственных органов им. академика В.И. Шумакова Минздрава России, Москва, Россия

e-mail: [email protected]

Ключевые слова: кролики, поджелудочная железа, инкубация, культуры, инсулин.

Успешность аллотрансплантации островков поджелудочной железы (ПЖ) больным сахарным диабетом 1 типа зависит, главным образом, от количества и качества островков, изолируемых из ПЖ посмертных доноров с помощью ферментных препаратов, прежде всего коллагеназы [1]. При этом происходит протеолитическое разрушение внеклеточного матрикса, что приводит к морфофункциональной дезорганизации островковых клеток и значительному снижению конечного антидиабетического эффекта трансплантации островков. В связи с этим актуален поиск способов получения островковой ткани, минимизирующих интенсивность ферментной обработки ПЖ. В настоящей работе изучена возможность неприменения ферментных препаратов при выделении островковой ткани из ПЖ кроликов.

В качестве доноров использовали 60 новорожденных (1-2-дневных) и 12 одномесячных кроликов. После очистки ПЖ от видимых соединительно-тканных сосудистых структур и сосудов панкреатическую ткань измельчали глазными ножницами в течение нескольких минут, после

чего полученные микрофрагменты тщательно промывали холодным раствором Хенкса. Образовавшуюся суспензию инкубировали в среде RPMI при 37°С. Наблюдения за культурами проводили с помощью инвертированного микроскопа, и их образцы на разных сроках инкубации подвергали морфологическому исследованию. Определяли инсулинпродуцирующую активность культур (ИФА). Микроскопический контроль выявил спонтанную гибель и элиминацию экзокринной ткани в инкубируемых микрофрагментах ПЖ новорожденных кроликов и формирование шарообразных или овоидных свободно плавающих структур, в которых при иммуногистохимическом анализе были выявлены эпителиальные клетки с инсулин-позитивными гранулами. Эти данные позволили назвать их флотирующими островковоподобными культурами (ФОК). Применение описанной технологии для получения культур из ПЖ одномесячных кроликов не позволило получить островковоподобные культуры из-за невозможности избавиться от экзокринной ткани, доля которой у одномесячных кроликов на порядок превышает таковую в неонатальной ПЖ. В связи с этим впервые нами был применен гипертермический режим инкубации (38°С), который привел к быстрой гибели экзокринной ткани. В результате из ПЖ одномесячных кроликов удалось получить ФОК, аналогичные тем, которые были получены из ПЖ новорожденных кроликов. Анализ проб культуральной жидкости, взятых при инкубации ФОК, подтвердил наличие активной секреции инсулина. Таким образом, показана возможность получения островковой ткани из поджелудочной железы кроликов без применения экзогенных ферментов.

Литература:

1. Barton F.B., Rickels M.R., Alejandro R. et al. Improvement in outcomes of clinical islet transplantation: 1999-2010. Diabetes Care. 2012; 35:1436-1445.

АКТИВНОСТЬ ДЫХАТЕЛЬНОГО КОМПЛЕКСА I МИТОХОНДРИИ НЕОБХОДИМА ДЛЯ РЕПРОГРАММИРОВАНИЯ КЛЕТОК В ПЛЮРИПОТЕНТНОЕ СОСТОЯНИЕ: ФУНКЦИИ МИТОХОНДРИАЛЬНЫХ АФК ПРИ РЕПРОГРАММИРОВАНИИ

Е.В. Скворцова, И.Б. Назаров, Н.Д. Аксенов, А.Н. Томилин, С.А. Синенко

Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург, Россия. e-mail: [email protected]

Ключевые слова: Комплекс I ЭТЦ, NDUFS1, NDUFB10, индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК), активные формы кислорода (АФК), ротенон, антиоксиданты, супероксид-анион.

В процессе репрограммирования соматических клеток в индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК) происходят существенные изменения клеточного метаболизма и сигналинга вызванного изменениями сопутствующих окислительно-восстановительных процессов [1, 2]. Мы исследовали роль комплекса-1 (К1) электрон-транспортной цепи (ЭТЦ) митохондрий в процессе репрограммирования фибробластов мыши в плюрипо-тентное состояние. Инактивация основной субъединицы К-1 — NADH-убихиноноксидоредуктазы S1 (NDUFS1) или вспомогательной субъединицы B10 (NDUFB10) вызывала увеличение продукции АФК в соматических и эмбриональных стволовых клетках мыши. Блокирование функций данных NADH-дегидрогеназ также приводит

Гены & Клетки XVII, №3, 2022