CC BY
5
только в характере, но и наличии сдвига. Необъективность изучаемого на протяжении суток параметра может усугубляться еще и тем, что взятие крови у подопытных и контрольных животных производится часто непараллельно, а с 1—3-часовой разницей, сопровождающейся констатацией несуществующей патологии.,Во избежание регистрации связанных с биоритмом естественных отклонений даже внутри одной группы сравниваемые пробы следует брать одновременно в самые кратчайшие сроки (желательно на протяжении получаса). На наш взгляд, при изучении биоритмов как показателей токсических эффектов (в случаях известных особенностей цикла) число анализов может быть сокращено и ограничено исследованиями в обоснованные сроки с учетом фазы периода (по-видимому, обязательными являются часы максимальных подъемов и спадов, а также соседние промежутки времени).
Выводы
1. Спонтанные вариации числа эритроцитов в крови белых беспородных крыс на протяжении суток подчинены физиологически константной временной координации, проявляющейся цикличной повторяемостью двух подъемов и спадов с максимумом (летне-осенний период) в ранние утренние часы и минимумом около полудня.
2. Установленный- суточный биологический ритм является высокоинформативным критерием токсичности ксенобиотика, позволяющим в отличие от изучаемого в необоснованно выбранные часы изолированного показателя не только установить наличие ранних сдвигов, но и избежать их ошибочной интерпретации, что диктует необходимость включения биохронометрии в арсенал санитарно-токсикологических исследований.
ЛИТЕРАТУРА. Комаров Ф. И., Захаров Л. В., Лисовский В. А. Суточный ритм физиологических функций у здорового и больного человека. Л., 1966. — С а р к и с о в Д. С., П а л ь ц ы н А. А., В т ю р и н Б. В. Приспособительные перестройки биоритмов. М., 1975.—Серая В. М., Дружинин Ю. П., Родина Г. П. — В кн.: Суточные ритмы физиологических процессов организма. М., 1972, с. 124—126. — Толоконцев Н. А. (ред.) Основы общей промышленной токсикологии (Руководство). Л., 1976, с. 198—213. — Frohberg Н. — Arch. Toxikol., 1976, Bd 36, S. 181 — 184. - Steinbach G., Hilfenhaus M., М а у е г b а с h Н. et al. — Ibid., Bd 36, S. 317—325. — Штюпель Г. Синтетические моющие и очищающие средства. М., I960.,
Поступила 3/1V 1978 г.
УДК 614.777-078
В. М. Лавровская, Р. Ш. Альтман, Р. П. Воронова, Л. А. Г недина
РАЦИОНАЛИЗАЦИЯ САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ПИТЬЕВОЙ И РЕЧНОЙ ВОДЫ С ПОМОЩЬЮ СТАБИЛЬНЫХ БУМАЖНЫХ ИНДИКАТОРНЫХ СИСТЕМ
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии, Областная санэпидстанция, Центральная лаборатория Слудинской фильтростанции, г. Горький
В настоящее время проведение санитарно-бактериологического анализа питьевой воды регламентировано ГОСТом 18963-73. 1 Как известно, показателем степени фекального загрязнения служит количество бактерий группы кишечных, определяемое в 1 л воды (коли-индекс). Обычно используют методы бродильной или мембранных фильтров, после чего выращивают микроорганизмы на дифференциально-диагностических лактозо-Содержащнх средах типа среды Эндо. Для дальнейшего исследования отби-
1 ГОСТ 18963-73. Методы санитарно-бактериологического анализа питьевой воды.
рают лактозоположительные колонии, которые идентифицируют по ограниченному числу ключевых тестов: к кишечным палочкам относят грам-отрицательные бактерии, которые не образуют споры, сбраживают глюкозу с образованием кислоты и газа и не обладают оксидазной активностью.
Важная роль в этом анализе отводится оксидазному тесту, предназначенному. для дифференциации бактерий семейства Еп1егоЬас1епасеае от других грамотрицательных водных сапрофитов, обладающих активной оксидазой. Таким образом, этот тест исключает ошибку в сторону увеличения коли-индекса. Оксидазная проба проста по выполнению, но для нее требуются реактивы, которые не зсегда имеются в практических лабораториях: диметил-н-фенилендиамин и а-нафтол. Одним из условий достоверности получаемых результатов является частая смена реактивов, поскольку действующий ГОСТ допускает их использование лишь в день приготовления. За рубежом для определения оксидазной активности используются индикаторные бумажные полоски «РаШо Тес Со», способ изготовления которых не описан (патент США). В работах В1агеук, Н. А. Хоменко они получили высокую оценку.
Принадлежность оксидазоотрицательных колоний к бактериям группы кишечных палочек подтверждают по ферментации глюкозы. Таким образом, при санитарно-бактериологическом исследовании воды широко используются два биохимических теста — определение оксидазной активности и характера ферментации глюкозы.
В настоящей работе приведены данные изучения возможности использования бумажных индикаторных систем (БИС), изготовленных в Горь-ковском научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии, для выявления оксидазной активности бактерий и характера ферментации глюкозы микроорганизмами, выделяемыми в ходе санитарно-бактерио-логического анализа воды. Бумажные индикаторные системы представляют собой полоски или диски хроматографической бумаги, пропитанные соответствующими субстратами и индикатором и покрытые для стабилизации пленкообразующим полимером — водным раствором поливинилового спирта.
Бумажная индикаторная система с глюкозой была приготовлена по прописи В. М. Никитина и соавт., БИС для определения оксидазы с длительным сроком хранения (срок наблюдения 2 года) впервые разработана в Горьковском научно-исследовательском институте (Р. Ш. Альтман и соавт.) и успешно апробирована рядом научно-практических учреждений страны; совпадение результатов с полученными общепринятыми методами 100%.
При проведении анализа бродильным методом изучаемую культуру растирают на полоске сухой индикаторной бумажки (на одной полоске можно выполнить до 20 определений). При применении метода мембранных фильтров используют бумажный диск размером 3,5—4 см (по наиболее принятому размеру фильтра), который предварительно рекомендуется смочить дистиллированной водой. Фермент оксидаза обусловливает реакцию между метил-н-фенилендиамином иа-нафтолом, в ходе которой образуется индофенол синий. При положительном результате на месте соприкосновения культуры с бумажкой появляется ярко-синее окрашивание в течение 1—3 мин, при отрицательном оно отсутствует.
Характер ферментации глюкозы с помощью БИС определяли чашечным методом: подозрительные на кишечную палочку колонии наносили петлей на сектор чашки с 2% питательным агаром рН 7,4—7,8. На место посева (около 0,5 см2) накладывали диск с глюкозой. Для улавливания газообразования и фиксации диска последний заливали несколькими каплями расплавленного и остуженного до 40—45°С полужидкого агара (0,6—0,8%). При разложении глюкозы до образования кислоты цвет диска меняется с красного на желтый. При наличии газообразования пузырьки газа скапливаются по краям диска и между ним и агаром. Результаты учитывают
в течение 3—5 ч. Скорость реакции зависит от посевной дозы и ферментативной активности культуры. При определении индекса кишечных палочек выявление ферментации глюкозы является решающим, поэтому получение ответа через 4—5 ч вместо 18—24 ч имеет несомненное практическое значение.
Изучение возможности использования БИС с оксидазой и глюкозой при санитарно-бактериологическом анализе воды проведено в 440 опытах с применением бродильного метода, и 150 с использованием мембранных фильтров.
Результаты, полученные при определении активности оксидазы и ферментации глюкозы, полностью совпали. При регистрации газообразования отмечены несущественные колебания, газ в глюкозе в несколько большем числе случаев был выявлен при использовании БИС. Ферментация глюкозы с образованием кислоты и газа с помощью БИС регистрировалась в течение 3—5 ч, в то время как при постановке реакции по ГОСТу результаты, как правило, могли быть учтены через 18—24 ч.
Предлагаемый метод апробирован и одобрен в Научно-исследовательском институте общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР и в Научно-исследовательском институте коммунального водоснабжения и очистки воды Академии коммунального хозяйства им. И. Д. Панфилова.
ЛИТЕРАТУРА. Альтман Р. Ш., Лавровская В. М., Ха-х а р е в а Т. П. и др. — В кн.: Физиология и биохимия микроорганизмов. Горький, 1975, вып. 3, с. 7—9. — Калина Г. П. — Лабор. дело, 1976, № 9, с. 574—576. — Никитин В. М., П л у г а р у С. В., Каланча А. П. — Лабор. дело, 1974, № 7, с. 443—444. — Хоменко Н. А. — Ж- микробиол., 1977, № 4, с. 42— 45. —Blazevic D. J., Schreskenberger Р. С., Matsen J. M. — Appl. Microbiol., 1973, v. 26, p. 886—889. — Rosner R. — Ibid., p. 890—893.
Поступила 26/VI 1978 г.
УДК 612.744:612.2621-087.4:643.253
Г. Т. Писько, Jl. Д. Спитковская, Г. В.Толстопятова, Т. В. Камнецкая,
3. И. Ждлдакова (Киев)
ПОЛЯРОГРАФИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАПРЯЖЕНИЯ КИСЛОРОДА В СКЕЛЕТНЫХ МЫШЦАХ КРЫС
Кислород является одним из важнейших компонентов, обеспечивающих окислительно-восстановительные процессы в живых структурах. Прямое определение напряжения кислорода в тканях без их существенного повреждения было введено в физиологическую практику Davies и Brink, применившими полярографический метод. Этот метод регистрации кислорода в тканях целостного организма с каждым годом находит все более широкое применение в различных областях биологии и медицины.
Изменение р02 в тканях организма, сочетающееся с изучением ряда биохимических, гистохимических, физиологических и других показателей, позволяет в основном решить два кардинальных вопроса экспериментальной токсикологии: выяснить механизм развития острого отравления и установить патогенез формирования хронической интоксикации (Ю. С. Ротен-берг).
При экспериментальном изучении 2-окси-3,6-дихлорбензойной кислоты (2-0-3,б-ДХБК) мы использовали модификацию полярографического метода определения р02 в скелетных мышцах животных, предложенного В. А. Березовским. Исследования проводили на полярографе Lp-7 с использованием платинового рабочего электрода и вспомогательного хлор-серебряного электрода типа ЭВЛ-1М2. Материалом для рабочего электрода
