CC BY
8
в течение 3—5 ч. Скорость реакции зависит от посевной дозы и ферментативной активности культуры. При определении индекса кишечных палочек выявление ферментации глюкозы является решающим, поэтому получение ответа через 4—5 ч вместо 18—24 ч имеет несомненное практическое значение.
Изучение возможности использования БИС с оксидазой и глюкозой при санитарно-бактериологическом анализе воды проведено в 440 опытах с применением бродильного метода, и 150 с использованием мембранных фильтров.
Результаты, полученные при определении активности оксидазы и ферментации глюкозы, полностью совпали. При регистрации газообразования отмечены несущественные колебания, газ в глюкозе в несколько большем числе случаев был выявлен при использовании БИС. Ферментация глюкозы с образованием кислоты и газа с помощью БИС регистрировалась в течение 3—5 ч, в то время как при постановке реакции по ГОСТу результаты, как правило, могли быть учтены через 18—24 ч.
Предлагаемый метод апробирован и одобрен в Научно-исследовательском институте общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР и в Научно-исследовательском институте коммунального водоснабжения и очистки воды Академии коммунального хозяйства им. И. Д. Панфилова.
ЛИТЕРАТУРА. Альтман Р. Ш., Лавровская В. М., Ха-х а р е в а Т. П. и др. — В кн.: Физиология и биохимия микроорганизмов. Горький, 1975, вып. 3, с. 7—9. — Калина Г. П. — Лабор. дело, 1976, № 9, с. 574—576. — Никитин В. М., П л у г а р у С. В., Каланча А. П. — Лабор. дело, 1974, № 7, с. 443—444. — Хоменко Н. А. — Ж- микробиол., 1977, № 4, с. 42— 45. —Blazevic D. J., Schreskenberger Р. С., Matsen J. M. — Appl. Microbiol., 1973, v. 26, p. 886—889. — Rosner R. — Ibid., p. 890—893.
Поступила 26/VI 1978 г.
УДК 812.744:в12.2в2]-0в7.4:543.253
Г. Т. Писько, JI. Д. Спитковская, Г. В.Толстопятова, Т. В. Камнецкая,
3. И. Ждлдакова (Киев)
ПОЛЯРОГРАФИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАПРЯЖЕНИЯ КИСЛОРОДА В СКЕЛЕТНЫХ МЫШЦАХ КРЫС
Кислород является одним из важнейших компонентов, обеспечивающих окислительно-восстановительные процессы в живых структурах. Прямое определение напряжения кислорода в тканях без их существенного повреждения было введено в физиологическую практику Davies и Brink, применившими полярографический метод. Этот метод регистрации кислорода в тканях целостного организма с каждым годом находит все более широкое применение в различных областях биологии и медицины.
Изменение р02 в тканях организма, сочетающееся с изучением ряда биохимических, гистохимических, физиологических и других показателей, позволяет в основном решить два кардинальных вопроса экспериментальной токсикологии: выяснить механизм развития острого отравления и установить патогенез формирования хронической интоксикации (Ю. С. Ротен-берг).
При экспериментальном изучении 2-окси-3,6-дихлорбензойной кислоты (2-0-3,б-ДХБК) мы использовали модификацию полярографического метода определения р02 в скелетных мышцах животных, предложенного В. А. Березовским. Исследования проводили на полярографе Lp-7 с использованием платинового рабочего электрода и вспомогательного хлор-серебряного электрода типа ЭВЛ-1М2. Материалом для рабочего электрода
служила химически чистая платина (99,99%, ГОСТ 85888-64) в проволоке диаметром 0,2 мм. Крысу помещали в станок-фиксатор из пластмассы, на задней дверце которого было выпилено отверстие для отведения задней лапы. Лапу фиксировали на деревянной подставке. К этому способу фиксации мы прибегали в связи с невозможностью использовать в хроническом опыте метод, описанный в литературе, поскольку применение жгута, сильное растяжение животного, наркоз приводят к нарушению кровообращения и физиологическим сдвигам в организме.
Рабочий электрод вводили на 20 мин в икроножную мышцу после прокола стерильной'инъекционной иглой. Вспомогательный электрод приводился в электрический контакт с животным через солевой мостик. На электроды подавалось постоянное напряжение, соответствующее рабочей точке данного электрода. До и после каждого исследования электроды калибровали для измерения их чувствительности к кислороду, используя два раствора: уравновешенный с воздухом изотонический раствор натрия хлорида и такой же раствор, но лишенный кислорода, с добавлением сульфита Ыа.
Целесообразность проведения подобных исследований определялась тем, что аналоги 2-0-3,6-ДХБК (2, 3, б-трихлорбензойная кислота, дианат и салицилаты), имеющие в основе бензойную кислоту, оказывают выраженное влияние на ряд окислительно-восстановительных ферментов и тканевое дыхание. Учитывая эти данные, мы высказали предположение о возможном влиянии 2-0-3,6-ДХБК на интенсивность окислительных процессов.
Предварительно в остром опыте на 17 белых крысах (6 подопытных и 11 контрольных) определяли напряжение кислорода в икроножных мышцах. После снятия фоновых показателей животным в желудок вводили 1/2 Ь050(750 мг/кг) 2-0-3,6-ДХБК в масляном растворе. Показания снимали в 1-й день затравки и на 4-й и 13-й дни опыта. На 4-й день после затравки у животных опытной группы отмечалось нарастание р02 в скелетной мышце, что свидетельствует об угнетении обменных процессов.
В хроническом опыте в течение 6 мес белым крысам 3 групп (по 8 животных в каждой) вводили 2-0-3,6-ДХБК в масляных растворах в дозах 3, 0,3 и 0,03 мг/кг, контрольным — подсолнечное масло. После регистрации исходного р02 в икроножных мышцах показатели у подопытных животных снимали через неделю и на протяжении всего периода затравки. Поскольку фон опытной группы (3 мг/кг) существенно отличался от фона контрольной, во избежание ошибочных выводов мы использовали метод нивелирования фоновых различий при статистической обработке полученных данных (Г. Н. Красовский и Л. Я. Гусева).
Результаты хронического опыта показали, что 2-0-3,6-ДХБК в дозах 0,03 и 0,3 мг/кг не оказывала существенного влияния на напряжение кислорода в мышцах крыс, в то время как доза 3 мг/кг на протяжении всех 6 мес затравки значительно снижала р02 в мышцах по сравнению как с контролем, так и с фоном. Полученные нами показатели р02 в икроножной мышце крыс значительно выше, чем приводимые в литературе (В. А. Березовский), что мы связываем с использованием другого метода фиксации животного в нашем эксперименте. Необходимо отметить, что на протяжении всего опыта мы не наблюдали у животных побочных явлений (отека, нагноения и др.) от введения электрода в икроножную мышцу.
Параллельно с измерением р02 мы определяли активность окислительно-восстановительных ферментов — каталазы и пероксидазы. Полученные результаты свидетельствуют о том, что доза 0,03 мг/кг не влияет на . изменение, активности каталазы, в то время как дозы 0,3 и 3 мг/кг вызывают существенное увеличение активности, что согласуется с литературными данными (Д. И. Головань). При анализе другого окислительно-восстановительного фермента — пероксидазы мы выявили снижение ее активности при введении препарата в дозах 0,3 и 3 мг/кг через неделю и на 1, 3, 5 и 6-м месяцах после начала затравки.
3 Гигиена и санитария № I
65
Интерпретация полученных данных требует уточнения физиологической сущности напряжения кислорода в ткани. Уровень рОг зависит от отношения доставки и потребления кислорода. Преобладание доставки повышает рОг, тогда как преобладание потребления снижает его. Однако при уменьшении потребления уровень р02 при неизменной доставке кислорода возрастает. Представленные экспериментальные материалы позволяют полагать, что снижение р02 при хроническом пероральном введении 2-0-3,6--ДХБК в дозах 0,3 и 3 мг/кг происходит из-за возрастания потребления кислорода вследствие усиления обменных окислительных процессов.
Повышенное потребление кислорода в организме подопытных животных должно было отразиться и на состоянии углеводного обмена. Изучение содержания гликогена в печени крыс антроновым методом (по Morris) показало выраженное истощение запасов гликогена у животных, которые получали 2-0-3,6-ДХБК из расчета 3 мг/кг. При гистохимическом определении гликогена в печени крыс после 6-месячного воздействия 2-0-3,6-ДХБК выявлена четкая зависимость содержания гликогена от дозы вводимого вещества.
Особенно резкое снижение количества гликогена наблюдалось в печени животных, получавших вещество в дозе 3 мг/кг. Центры всех печеночных клеток свободны от гликогена, который определялся только по их периферии. Таким образом, при действии 2-0-3,6-ДХБК в дозе 3 мг/кг синтез гликогена значительно отставал от его потребления (расхода).
Полученные экспериментальные данные позволяют считать, что метод определения напряжения кислорода в скелетных мышцах животных в условиях хронического эксперимента наряду с использованием различных биохимических и гистохимических методов позволяет расширить представление о влиянии и механизме действия изучаемых химических веществ на окислительно-восстановительные процессы в организме. Применение более физиологичных условий фиксации животного в предложенной нами модификации метода определения р02 позволяет использовать его для хронического токсикологического эксперимента на мелких лабораторных животных.
ЛИТЕРАТУРА. Березовский В. А. — В кн.: Полярографическое определение кислорода в биологических объектах. Киев, 1974, с. 109—119. - Го-л о в а н ь Д. И. Гигиеническая оценка влияния новых гербицидов — производных хлорбензойной кислоты на санитарные условия водопользования. Автореф. дис. канд. Днепропетровск, 1970. — Красовский Г. Н., Гусева Л. Я. — Гиг. и сан., 1965, № 1, с. 86—90. —Ротенберг Ю. С. — В кн.: Полярографическое определение кислорода в биологических объектах. Киев, 1968, с. 241—246. — D a v i -es P. W., Brink F. — Rev. Sel. Instr., 1942, v. 13, p. 524.
Поступила 20/X11 1977 r.
УДК 614.72:546.175-3231-074:543.432
К. П. Панин
ФОТОКОЛОРИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ АЗОТНОЙ КИСЛОТЫ В ПРИСУТСТВИИ ДРУГИХ СИЛЬНЫХ МИНЕРАЛЬНЫХ КИСЛОТ И ЕДКИХ ЩЕЛОЧЕЙ В АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ
Городская санэпидстанция, Москва
Мы разработали два метода определения азотной кислоты по аннону с применением реактива дихлорхромотроповой кислоты (1,8-диокси--2,7-дихлорнафталин-3,6-дисульфоновой кислоты) динатриевой соли и хро-мотроповой кислоты (1,8-диоксинафталин-3,6-дисульфоновой кислоты) динатриевой соли. Дихлорхромотроповая или хромотр.оповая кислота в среде крепкой серной кислоты образует с азотной кислотой устойчивое соединение от желтого до оранжевого цвета, интенсивность которого пропорциональна
