CC BY
5
Дискуссии и отклики читателей
УДК 614.777-078:57«.851.48.07
Г. П. Калина, Л. А. Виноградова, М. С. Жарикова,
Т. М. Федорова
О КРИТЕРИЯХ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИЙ ГРУППЫ КИШЕЧНЫХ ПАЛОЧЕК (ПО ГОСТ 2874-73 И ГОСТ 18963-73)
Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф. Ф. Эрисмана; Московские областная и городская санэпидстанции
Пересмотр ГОСТ 18963-73 «Методы санитарно-бактериологического анализа воды питьевой», введенного в действие в 1975 г., намечается на 1980 г. Однако материалы и обоснования к изменению отдельных положений и методических деталей ГОСТ должны быть собраны заранее, не менее чем за 2 года до введения нового стандарта. Поэтому своевременно уже сейчас начать дискуссию по некоторым представляющимся спорными определениям и методическим приемам этого ГОСТ, как и основного ГОСТ 2874-73 «Вода питьевая».
Наиболее спорной в том и другом ГОСТ представляется необычная для стандартов формулировка «или...или» при определении критериев са-нитарно-показательных бактерий группы кишечных палочек: «К бактериям группы кишечных палочек относятся грамотрицательные, не образующие спор палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при 37±0,5°С в течение 24—48 часов или сбраживающие глюкозу при 37± ±0,5°С в течение 24 часов и не обладающие оксидазной активностью». Это двойственное определение ставит в тупик работников практических лабораторий, может внести разночтения при исследовании одних и тех же объектов разными лабораториями и затруднить арбитраж, возникающий при подобных расхождениях. В то же время последующее изложение в ГОСТ процесса анализа сводится по существу к определению по глюкоз-ному признаку в сочетании с оксидазным тестом на каждом этапе, что противоречит приведенному выше определению ГОСТ 2874-73 и 18963-73.
Поводом для включения в Стандарт глюкозного признака в сочетании с оксидазным тестом явилось мнение о том, что кишечные палочки, особенно подвергнутые суббактерицидному действию хлора, могут замедлить ферментацию лактозы (отсюда и сроки 24—48 ч для этого определения), что увеличивает продолжительность исследования. Однако применение ускоренного метода определения газа при сбраживании углеводов, в том числе лактозы (погружение раскаленной, но не остуженной петли в лак-тозный бульон в первые часы инкубации позволяет выявить скрытое газообразование в виде образования обилия пузырьков газа, скопляющихся на поверхности бульона), способствует сокращению инкубации посевов в лактозный бульон по 5—6 ч, а при замедленной ферментации — до 16— 18 ч. Кроме того, опыт показывает, что замедленная ферментация лактозы — явление крайне редкое и, как правило, при обнаружении кишечных палочек в воде, в результате погрешностей хлорирования, они ферментируют лактозу в течение первых 24 ч.
Введение оксидазного теста при определении кишечных палочек по второму критерию — сбраживанию глюкозы при 37°С — основано на данных о появлении в водопроводной воде водных сапрофитов, обладающих оксидазной активностью, сбраживающих глюкозу с продукцией газа и, следовательно, симулирующих кишечные палочки. Из оксидазоположи-тельных микробов в~ питьевой воде могут быть обнаружены аэромонады, также сбраживающие глюкозу с продукцией газа. Другие грамотрицатель-
\
ные оксидазаположительные микробы — псевдомонады и вибрионы — не продуцируют газ при разложении глюкозы и, следовательно, при существующих критериях оценки результата не определяются в исследуемой воде, хотя их патогенность для человека делает небезразличным их присутствие в питьевой воде. Аэромонады, сбраживающие глюкозу с образованием газа, не разлагают лактозу, хотя и обладают скрытой способностью ферментации этого углевода, определяемой по бета-галактозидазному тесту. Следовательно, при использовании в качестве ведущего и единственного признака ферментации лактозы отпадает необходимость в применении оксидазного теста, что значительно упрощает процесс исследования и позволяет ограничиться первичным титрованием с последующим высевом из всех забродивших пробирок с лактозной средой на среду Эндо для определения наличия красных с металлическим блеском или красных без блеска колоний, состоящих из грамотрицательных палочек. Необходимо напомнить, что именно этот критерий индикаторного значения бактерий группы кишечных палочек — лактозный признак — является общепринятым во всех странах мира, вошел в национальные стандарты и унифицированные методы исследования качества вод, в Международный и Европейский стандарты ВОЗ.
Ограничение определения кишечных палочек лактозным признаком и исключение оксидазного теста приведет к значительному упрощению всего исследования без ущерба для качества исследования. Будут исключены многие разделы, связанные с глюкозным признаком и оксидазным тестом. Упрощается и методика исследования мембранным методом, при котором все исследование выполняется в течение 1 сут: фильтры помещают после ^ фильтрации на среду Эндо и инкубируют при 37°С в течение 14—16 ч, затем выросшие красные с металлическим блеском колонии окрашивают выборочно по Граму. Можно рекомендовать также выборочный высев в микропробирки с малым объемом лактозной среды (увеличение содержания лактозы до 5% ускоряет процесс ферментации) и определение после 4—5 ч инкубации при 37°С продукции газа (если он не обнаруживается в бродильных микропробирках) описанным выше ускоренным методом выявления скрытого образования газа.
Нуждается в пересмотре также определение фекальных кишечных палочек — показателей свежего фекального загрязнения. Проверка показала, что наиболее надежный из предложенных в ГОСТ методов — использование лактоза-буферной среды с борной кислотой — часто дает замедленную реакцию и продукция газа в этой среде в условиях инкубации при 43°С констатируется нередко лишь через 48 ч. В данном случае даже экспресс-метод выявления скрытого газообразования не всегда может помочь обнаружить газообразование в более ранние сроки. Вероятно, требуется разработка новых более надежных и простых методов констатации наличия фекальных кишечных палочек, для чего до 1980 г. остается достаточно времени.
Изменения существующего ГОСТ 18963-73, рекомендуемые нами при пересмотре к 1980 г., позволят значительно упростить исследования; их целесообразность подтверждается практикой. Они исключат необходимость снабжения лабораторий дефицитным и небезразличным для здоровья реактивом для оксидазного теста, позволят сократить время исследования и установить единый критерий определения индикаторных кишечных палочек — лактозный признак. Желательно, чтобы практические работники ^санитарно-эпидемиологических станций высказали свое мнение по нашему предложению. Предварительный опрос показал почти полное единодушие в этом вопросе.
Поступила 13/1У 1977 г.
