CC BY
895
УДК 602.3:579.8
РАСПРОСТРАНЕНИЕ BACILLUS CEREUS И BACILLUS MYCOIDES В ОБЪЕКТАХ САНИТАРНОГО НАДЗОРА
Феоктистова Наталья Александровна, кандидат биологических наук, доцент кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-санитарная экспертиза» Калдыркаев Андрей Иванович, кандидат биологических наук, старший преподаватель кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-санитарная экспертиза»
Васильев Дмитрий Аркадьевич, доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-санитарная экспертиза»
Золотухин Сергей Николаевич, доктор биологических наук, профессор кафедры «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-санитарная экспертиза» ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» 432017, г. Ульяновск, бульвар Новый Венец, 1; тел.: 8(422)559547 e-mail: feokna@yandex.ru
Ключевые слова: Bacillus cereus, Bacillus mycoides, фенотипическая характеристика, биохимические свойства, объекты санитарного надзора, бактериофаги, схема выделения.
В статье описаны результаты исследований по оптимизации процесса идентификации бактерий Bacillus cereus, Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора. Применяя предложенную нами схему выделения и идентификации бактерий Bacillus сereus и Bacillus mycoides, за пятилетний период работы было исследовано 536 пробы. Наибольшее количество штаммов бактерий Bacillus cereus и Bacillus mycoides выделено из проб почвы со слабо протекающими процессами минерализации органических веществ, для которых необходим органический азот.
Введение
Бактерии Bacillus cereus и Bacillus mycoides относятся к грамположительным факультативно-анаэробным, подвижным, спо-рообразующим, палочковидным микроорганизмам, которые широко распространены в объектах санитарного надзора (продуктах животного и растительного происхождения и т.д.) и имеют фенотипические и генетические признаки, сходные с рядом других видов бактерий рода Bacillus [1]. В настоящий момент на основании результатов исследования генома внутри рода Bacillus была сформирована близкородственная ассоциация бацилл, получившая в литературе название «группа «Bacillus cereus» (Bacillus cereus, Bacillus mycoides, Bacillus anthracis, Bacillus thuringiensis, Bacillus pseudomycoi-des, Bacillus cytotoxicus и Bacillus weihenste-phanensis» [2].
Бактерии Bacillus mycoides, открытые Флюгге в 1886 году, почвенные микроорга-
низмы отдела Firmicutes, растущие на агаре как цепочки из клеток, связанных между собой конец в конец, образующие радиальные нити, изогнутые по часовой или против часовой стрелки. И хотя данный вид бацилл современная микробиология относит к са-профитам, его ближайшие «родственники» являются патогенными для человека (Bacillus cereus, Bacillus anthracis), животных (Bacillus anthracis) и насекомых (Bacillus thuri-giensis). В то же время ряд авторов, основываясь на результатах молекулярно-генети-ческих методов исследования, предупреждает о широком распространении локусов патогенности, кодирующих энтеротоксины, среди штаммов, формально относящихся к Bacillus mycoides. Это относится к генам, кодирующим цитотоксин К (cyt K), одному из трех компонентов энтеротоксина HBL (hblA) и двум компонентам NHE (nheA, nheC) вызывающим проявления диарейного синдрома при пищевой токсикоинфекции [3]. Веро-
и
Sä es »1
Si
р Ü ш SS Hi ■ i
00 s!
ятность пищевого отравления, вызываемого Bacillus mycoides, не исключается: вспышки токсикозов, вызванные этим видом бацилл, были зарегистрированы в Канаде и на Тай-вани, сообщается также о случае эндогенного офтальмита, вызванного Bacillus mycoides. Однако чаще всего этот вид контаминирует пищевые продукты, вызывает их порчу [4].
Этиологическая роль Bacillus cereus при пищевых отравлениях была изучена и описана Наugе в 1950 г. Первоначально выделение Bacillus cereus из подозреваемого продукта происходило лишь из образцов, содержащих возбудителя в количестве, превышающем сотни тысяч в 1 г. Попытки выделить данную бактерию из фекалий больных длительное время не имели успеха. Лишь после 1962 года, когда Никодемусом была предложена спиртово-желточная среда для выделения Bacillus cereus, его стали почти постоянно выделять из кишечного содержимого людей в случаях пищевых отравлений [5]. В настоящее время для выделения и идентификации Bacillus cereus действует ГОСТ 10888.4-88 «Продукты пищевые. Методы определения Bacillus cereus», ранее, в 1982 году были разработаны «Методические рекомендации по выделению и идентификации бактерий рода Bacillus из организма человека и животных».
Идентификация Bacillus mycoides в бактериологических лабораториях на территории Российской Федерации основана на выделении чистой культуры микроорганизма и изучении его биохимических свойств. Этот метод трудоемок и слабо эффективен из-за выраженного полиморфизма ферментативных свойств указанного вида бактерий [6]. За последние 5-7 лет в практике стали широко использовать молекулярно-генетические методы идентификации бацилл, в частности различные модификации ПЦР-анализа, но не всегда результативно [7].
Цель исследования - определить степень распространения бактерий Bacillus mycoides и Bacillus cereus в объектах санитарного надзора.
Для достижения указанной цели решались следующие задачи:
- изучить на референс-штаммах существующие схемы выделения и идентификации бактерий Bacillus cereus и Bacillus mycoides, выявив их возможные недостатки;
- оптимизировать схему выделения и идентификации бактерий Bacillus cereus и Bacillus mycoides, вводя дополнительные биохимические тесты;
- с помощь оптимизированной схемы провести анализ распространения Bacillus cereus и Bacillus mycoides в объектах санитарного надзора.
Объекты и методы исследований
Штаммы бактерий: Bacillus mycoides 537, Bacillus cereus 8035, Bacillus anthracis (вакцинный штамм СТИ), Bacillus mesen-tericus (pumilus) 66, Bacillus megaterium 182, Bacillus subtilis 6633, Bacillus thuringiensis var. kurstaki, полученные из музея кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина». Штаммы фагов: 57 изоля-та бактериофагов Bacillus cereus; 8 изолятов бактериофагов Bacillus mycoides, выделенные из проб почвы различного хозяйственного назначения Приволжского федерального округа, Южного федерального округа, Центрального федерального округа.
В качестве материалов для исследований использовали объекты санитарного надзора (табл. 4).
Методики: ГОСТ 10888.4-88 «Продукты пищевые. Методы определения Bacillus cereus» и схема типирования бактерий рода Bacillus [8,9,10,11].
Результаты исследований
ГОСТ 10888.4-88 [12] предлагает следующую схему выделения бактерий рода Bacillus (рис. 1).
При типировании бактерии рода Bacillus по данной схеме возникает ряд трудностей: во-первых, длительность данной работы по причине использования значительного количества биохимических тестов, существующих на момент появления используемого нормативно-технического документа, созданного четверть века назад (рис. 1), а во-вторых, рекомендуемые тесты дают спорный результат, обусловленный таксономическим родством микроорганиз-
и
Sä es »1
s«
р и ш SS ;>i M ■ i
00 s!
Таблица 1
Типирование бацилл по ГОСТ 10444.-88
Признаки Виды бактерий
Bacillus cereus Bacillus megaterium Bacillus mesente ricus Bacillus mycoides Bacillus anthracis Bacillus subtilis Bacillus thuringiensis
Морфология колоний на МПА крупные шероховатые колонии морщинистые крупные шероховатые колонии морщинистые крупные шерохо-ватыеко-лонии
Окраска по Грамму + + + + + + +
Тест Фогес-Проскауера + ± + + + + +
Лецитиназа + - + ± + - +
Спорообразование + + + + + + +
Ферментация маннита ± ± ± ± ± + ±
Редукция нитратов + ± ± + + + +
Примечание - « + » - положительный, « - » - отрицательный, « ± » - вариабельный признак.
Исследуемый образец
серия разведении
1. Селективный агар для выявления и идентификации В. овгвш
2. Желточный агар с ЫаС1 с полимиксином и ТТХ
3. Желточный агар с маннитом, полимиксином и феноловым красным
4. Лецитин-агар для выделения В. овгвш из консервированных продуктов
Пересев на скошенный мясо-пептонный агар
Ферментация глюкозы
Ферментация маннита
Редукция нитратов
>
глюкозо- пептонная
среда
л
Микроскопия мазков,
окраска по Граму, окраска спор, определение
подвижности
Образование ацетилметилкарбинола
>
j
Выделенные штаммы продуируют лецитиназу, растут в присутствии ЫаС1, Гр+, подвижны, споры расположены центрально и субтерминально, маннит не ферментируют, резуцируют нитраты, образуют ацетилметилкарбинол. Данные свойства характерны В.
овгвш, В. туоо1йв&, ВЛ~Ниг1щ1вт1&, B.mвsвntвгiоus (ритйж), В.тевсйепшп
>
Рис. 1 - Схема выделения по ГОСТ 1044.8-88 «Продукты пищевые. Методы определения Bacillus cereus»
мов группы «Bacillus cereus».
Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что при использовании методики ГОСТ 10888.488 дифференциация бактерий Bacillus cereus не достаточно достоверна даже в пределах рода, не говоря уже о таксономической группе «Bacillus cereus». Так, аналогичные свойства характерны как для Bacillus cereus, Bacillus mycoides и Bacillus thuringiensis, так и для Bacillus mesentericus (pumilus), Bacillus megaterium (табл. 1). Анализируя полученные данные, можно утверждать, что применение схемы выделения, согласно данному ГОСТу, позволяет достоверно определить в продукте только бактерии Bacillus subtilis, для которых характерно отсутствие лецитиназной активности и способности ферментировать маннит.
Схема дифференциации бактерий рода Bacillus вклю-
Талица 2
Определения свойств выделенных штаммов бактерий рода Bacillus (Gordon, 1973)
Признаки Виды бактерий
Bacillus cereus Bacillus megate-rium Bacillus mesente ricus Bacillus mycoides Bacillus anthracis Bacillus subtilis Bacillus thuringien-sis
Окраска по Граму + + + + + + +
Наличие глобул + + - + + - +
Споры эллипсовидные + + - + + + -
Раздувание спороганглий - - - - - - -
Образование кристаллов - - - - - - ±
Подвижность ± ± + - - + ±
Каталаза + + + + + + +
Анаэробный рост + - - + + - +
Реакция Фогес-Проскауера + - + + + + +
Лецитиназа + - - + + - +
Устойчивость к лизоциму + - ± + + ± +
Рост при 7% + + + + + + +
Кислота из глюкозы + ± + + + + +
Кислота из арабинозы - ± + - - + -
Кислота из ксилозы - ± + - - + -
Кислота из маннита - + + - - + -
Гидролиз крахмал + + - + + + +
Утилизация цитрата + + + ± ± + +
Редукция нитратов + ± - + + + +
Гидролиз казеина + + + + + + +
Гидролиз тирозина + ± - ± - - +
Примечание - « + » - положительны, « - » - отрицательны, « ± » - вариабельный признак.
чает в исследование большее количество признаков, чем вышеприведенная методика (табл.2).
По результатам исследований можно сделать вывод, что бактерии рода Bacillus (на примере Bacillus cereus, Bacillus mycoides, Bacillus mesentericus (pumilus), Bacillus mega-terium, Bacillus thuringiensis, Bacillus subtilis) имеют сходные биохимические свойства. Провести идентификацию Bacillus cereus, Bacillus mycoides на основании полученных в рамках данных тестов невозможно.
Таким образом, исследования по методике ГОСТ 1044.8-88 «Продукты пищевые. Методы определения Bacillus cereus» зани-
мают до 5 суток, схема дифференциации бацилл первой морфологической группы только усложняет идентификацию, но не приводит к улучшению результатов.
Изучив биологические свойства рефе-ренс-штаммов Bacillus cereus и Bacillus my-coides, мы приступили к разработке оптимальной схемы их выделения из объектов санитарного надзора и идентификации. Мы попытались оптимизировать процесс идентификации за счёт поиска отличительных признаков, исключая тесты, приводимые к сходным результатам, и дополнили методами фагоидентификации с применением выделенных и селекционированных спец-
Таблица 3
Предлагаемая идентификационная таблица по наиболее важным видам Bacillus с обобщенными свойствами
Вид
Bacillus
Признаки Bacillus cereus Bacillus megate-rium mesen-tericus (pumi-lus) Bacillus mycoi-des Bacillus anthra-cis Bacillus subtilis Bacillus thuringi-ensis
Лизис при контакте со
специфическими бакте- + - - + - - -
риофагами
Рост в присутствий лизо-цима + - - + + ± +
Анаэробный рост + - - + + - +
Каталаза + + + + + + +
Фосфатаза + ± ± - - + +
Тест Фогес-Проскауера + - - ± + + +
Внутриклеточные кри- +
сталлы
Подвижность + ± + - - + +
Рост при тем. 45 0С + + + - - + +
Капсулообразование в ат-
мосфере с повышенным ± ± - - ± - ±
содержанием СО2
Гемолиз + - ± + - - +
Лецитиназа + ± - - - - ±
Редукция нитратов до нитритов + ± - + ± + +
Утилизация цитрата + + + ± ± + +
Расщепление тирозина + ± - ± + - ±
Казеина ± - + - + + +
Крахмал + + - + + + +
Мочевина ± - - - - + ±
Сероводород - - + - - + -
Арабиноза - + + + - + ±
Галактоза - + - - ± - -
Мальтоза + + ± + + - +
Манит - + + - - + -
Раффиноза - + - - - - -
Ксилоза - ± + - - + -
Галактоза - + - - ± - -
Эскулин ± - ± - - + ±
Салицин + - - + ± + +
Примечание - «+» - положительный;
«-»- отрицательный; «±» - вариабельный признак.
н
Таблица 4
Источники выделения штаммов бакте
рий Bacillus cereus
№ п/п Источники выделения Количество образцов Количество выделенных штаммов рода Bacillus Количество выделенных штаммов бактерий Bacillus cereus Количество выделенных штаммов бактерий Bacillus mycoides
1 Почва 210 198 45 61
2 Вода рек, озера, сточные воды 67 42 18 7
3 Продукты растительного происхождения 46 24 8 4
4 Пряности и приправы 90 61 17 24
5 Молочная продукция 67 28 8 -
6 Мясная продукция 56 45 6 6
Итого: 536 398 102 100
ифических бактериофагов Bacillus cereus и Bacillus mycoides, входящих в состав биопрепаратов.
Первоначально оригинальную схему тестировали на искусственно контамини-рованных объектах санитарного надзора для выявления оптимальных временных и температурных параметров. Разработанная схема выделения и идентификации бактерий Bacillus cereus и Bacillus mycoides включает несколько этапов (рис. 2).
1 этап. Подготовка проб. Исследуемый материал делится на 2 группы в зависимости от того, в какой форме (споровой или вегетативной) находятся бактерии рода Bacillus:
- первая группа - почва, продукты питания с явными признаками порчи, пищевые продукты с пониженным содержанием влаги (содержат в основном споровую форму бактерий рода Bacillus);
- вторая группа - свежие пищевые продукты, патологический материал, раневой экссудат, экскременты (содержат в основном вегетативную форму бактерий рода Bacillus).
Для этого мы делали ряд последовательных десятикратных разведений: 10-1, 10-2, 10-3, 10-4. Пробы первой группы прогревали на водяной бане для инактивации посторонней вегетативной формы сопутствую-
щей микрофлоры. Исключения составляют пробы второй группы, так как в них бактерии рода Bacillus содержатся в основном в искомой вегетативной форме.
Далее отбирали по 0,2-1,0 см3 содержимого из разведений 10-1 - 10-4 и переносили по 0,2 см3 в чашки Петри с селективной средой (получение изолированных колоний) и по 1 см3 в пробирки со средой обогащения (выявление наличия).
При высеве на чашки Петри определяли количественный показатель бактериальной контаминации. Среду обогащения с продуктом инкубировали 24 часа при 37 °С, после чего петлей делали посевы на селективные среды для получения изолированных колоний.
Для выделения бактерии Bacillus cereus и Bacillus mycoides в качестве селективной среды использовали желточно-со-левой агар с добавлением триметоприма и полимексина (среда Никодемуса), также следующие среды: среда Мозеля (MYP-агар) и аналогичный ей селективный агар PEMBA - отличие лишь в использовании различных красителей: фенолового красного и бромти-молового синего.
2 этап. Подсчет и пересев типичных колоний. Для видовой идентификации выделенных колоний 5-7 типичных колоний пересевали на скошенный МПА и термостати-
ИССЛЕДУЕМЫИ МАТЕРИАЛ
почва, продукты питания с явными признаками порчи,
пищевые продукты с пониженным содержанием влаги
свежие пищевые
продукты, патологический материал, раневой экссудат, экскременты
Фагоидентификация выделенной культуры с
применением специфических фагов Bacillus cereus и Bacillus mycoides
Определение видовой принадлежности
культуры по биохимическим признакам (табл.4; 5)
оо
Рис. 2 - Модифицированная схема выделения бактерий Bacillus cereus и Bacillus mycoides
ровали 18-24 ч при (37±0,5)°С. Выделенные культуры типировались по биохимическим и культуральным свойствам (табл. 3-4).
3 этап. Идентификация. В результате анализа литературных данных, а также собственных исследований, нами была сформирована схема с идентификационными тестами, позволяющими с наибольшей до-
стоверностью идентифицировать бактерии до вида.
Для более полной видовой принадлежности все типичные колонии бактерий, выросшие на дифференциально-диагностических средах, пересевали на МПА и МПБ для дальнейшего дифференцирования по всем отобранным нами в ходе исследова-
ний признакам (табл. 3).
Методика фаговой идентификации: на поверхность МПА в первой и второй чашках Петри пастеровской пипеткой наносили 18-24 часовую бульонную культуру исследуемых микроорганизмов. Чашки термоста-тировали в течение 15-20 минут для подсушивания, а затем, предварительно поделив на 7 секторов первую чашку Петри, на поверхность засеянной среды пастеровской пипеткой в размеченные сектора вносили специфические фаги Вс УГСХА в виде капли. На вторую чашку наносили капельно бактериофаги Bm УГСХА [13, 14, 15].
Применяя предложенную нами схему выделения и идентификации бактерий Bacillus cereus и Bacillus mycoides, включающую 30 биохимических тестов и метод фагоиден-тификации, характеристику по культураль-ным свойствам, мы за пятилетний период работы исследовали 536 проб объектов санитарного надзора, полученных в Приволжском и Южном федеральном округах Российской Федерации.
В результате нами было выделено 398 штаммов бактерий рода Bacillus: 210 штаммов из почвы; 67 - из воды рек, озер, сточных вод; 46 - из сена и остатков растительного происхождения; 90 - из пряностей и приправ; 67 - из молочной продукции; 56 - из мясной. Из них 102 идентифицировано как Bacillus cereus и 100 - Bacillus mycoides.
Выводы
Анализируя полученные данные, необходимо отметить, что наибольшее количество штаммов бактерий Bacillus cereus и Bacillus mycoides выделено из проб почвы со слабо протекающими процессами минерализации органических веществ, для которых необходим органический азот. В этом проявляется коррелирующая связь физиологии микроорганизмов со свойствами среды их обитания.
Используя систему биохимических тестов, предложенных для типирования в ГОСТ 1044.8-88 и схеме дифференциации бактерий рода Bacillus, мы столкнулись с рядом недостатков: во-первых, с проблемой вариабельности биохимических признаков бактерий Bacillus cereus и Bacillus mycoides и, соответственно, с высокой вероятностью
недостоверного результата; во-вторых, с незначительным количеством тестов в идентификационном алгоритме, максимально раскрывающем биологические свойства выделенных штаммов (результаты по предложенным тестам не дают равнозначного результата, так как схожие свойства имеют близкородственные виды). Нами была разработана оригинальная схема выделения и идентификации бактерий Bacillus cereus и Bacillus mycoides, делящая объекты исследования на 2 группы в зависимости от формы, в которой находится возбудитель (вегетативной или споровой). В данную методику дополнительно были включены среда накопления и ряд тестов на определение биохимических свойств (табл. 3, рис. 2) в соответствии с результатами, полученными в ходе собственных экспериментов.
Чрезвычайное фенотипическое и генетическое сходство бацилл из группы «Bacillus cereus» все еще предполагает поиск надежного метода индикации и идентификации названных микроорганизмов [15, 16]. В этой связи вызывает интерес практическое применение бактериофагов в процедуре санитарного биологического контроля продуктов питания. Это подразумевает использование бактериофагов не только в качестве средства профилактики инфекционного процесса животных и сельскохозяйственных культур или деконтаминационной обработке пищевого сырья и оборудования пищевых производств, но и для целей мониторинга бактерий, вызывающих порчу пищевого сырья и токсикоинфекций [17, 18]. Создание отсутствующих на сегодняшний день в Российской Федерации диагности-кумов, Bacillus mycoides и Bacillus cereus, на базе специфических бактериофагов, позволит в сжатые сроки проводить надежную идентификацию и индикацию данного вида бактерий в объектах санитарно-эпидемиологического надзора [19].
Библиографический список
1. Auger, S. Biofilm formation and cell surface properties among pathogenic and nonpathogenic strains of the Bacillus cereus group / S. Auger, N. Ramarao, C. Faille [et al.] // Appl.
SI
SES es »1
Si
p и Ш Sä ;ii H ■ i
ca s!
Environ. Microbiol. - 2009. - V. 10. - Р. 1128.
2. Han, C. S. Pathogenomic sequence Analysis of Bacillus cereus and Bacillus thuring-iensis Isolates Closely Related to Bacillus an-thracis / C. S. Han, G. Xie, J. F. Challacombe [et al.] // Journal of Bacteriology. - 2006. -V. 188 (900). - Р. 3382-3390.
3. Rasko, D.A. Genomics of the Bacillus cereus group of organisms / D.A. Rasko, M.R. Altherr, C.S. Han [et al.] // FEMS Microbiol Rev.
- 2005. - V. 29. - Р. 303-329.
4. Edward, J. B. Bacillus cereus, a Volatile Human Pathogen / J. B. Edward // Clinical Microbiology. - 2010. -V. 23. - Р. 382-398.
5. Смирнов, В.В. Спорообразующие аэробные бактерии - продуценты биологически активных веществ /В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.А. Василевская. - Киев: Hayкова Думка, 1982. - 279с.
6. Васильев, Д.А. Идентификация бактерий Bacillus cereus на основе их фенотипи-ческой характеристики / Д.А. Васильев, Н.А. Феоктистова, А.В. Алешкин [и др.]. - Ульяновск: ООО «Колор-Принт», 2013. - 98с.
7. Tallent, S. M. Efficient Isolation and Identification of Bacillus cereus /S. M. Tallent, K. M. Kotewicz, E. A. Strain [et al.] //Group Journal of AOAC International. - 2012. - Vol. 95. - №. 2. - Р. 446-451.
8. Gordon, R. The genus Bacillus/R. Gordon // In: Handb. Microbiol. Cleveland (Ohio).
- 1973. - V. l. - P. 71-88.
9. Смирнов, В.В. Методические рекомендации по выделению и идентификации бактерий рода Bacillus из организма человека и животных / В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.Б. Сорокулова. - Киев: Наукова думка, 1983. - 51с.
10. Полховский, В.А. Биохимические типы Bacillus cereus, выделенных из различных природных источников / В.А. Полховский // Журнал микробиология. - 1970. - № 2. - С.82-86.
11. Сидоров, М.А. Определитель зоо-патогенных микроорганизмов: справочник / М.А. Сидоров, Д. И. Скородумов, В. Б. Федотов - М.: Колос, 1995. - 318с.
12. ГОСТ 10888.4-88 «Продукты пищевые. Методы определения Bacillus cereus»
- 8с.
13. Выделение фагов бактерий Aeromonas hydrophila и изучение их биологических свойств / Д.А. Викторов, И.Р. На-сибуллин, Д.А. Васильев, А.А. Нафеев, И.Г. Швиденко // Вестник ветеринарии. - 2013.
- № 3. - С. 8-10.
14. Каврук, Л.С. Роль Morganella mor-ganii в этиологии кишечной инфекции телят и поросят / Л.С. Каврук, С.Н. Золотухин, В.Я. Ганюшкин, Д.А. Васильев. - Ульяновск: УГ-СХА, 1998. - 37с.
15. Soufiane, B. Bacillus weihenstepha-nensis characteristics are present in Bacillus cereus and Bacillus mycoides strains / В. Soufiane, J-C. Côté // FEMS Microbiol. Lett. - 2013.
- V. 341. - P. 127-137.
16. Yakoubou, S. Phylogeny of the Order Bacillales inferred from comparisons of 3' end 16S rRNA gene and 5' end 16S-23S ITS nucleotide sequences / S. Yakoubou, D. Xu, J.-C. Côté // Natural Science. - 2010. - V. 2(9). - P. 990997.
17. Бактериофаги пробиотические средства регуляции микробиоценозов и деконтаминации микроорганизмами продуктов питания, животных и растений / А.В. Алешкин, А.В. Караулов, Э.А. Светоч [и др.] // Иммунопатология, аллергология, инфек-тология. - 2013. - №3. - С. 80-89.
18. Выделение бактериофагов Listeria monocytogenes методом индукции / Е.Н. Ковалева, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Е.В. Сульдина, М.А. Имамов, И.Г. Швиденко // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - № 1.
- С.76-80.
19. Васильев, Д.А. Биосенсорная детекция бактерий рода Bacillus в молоке и молочных продуктах для предупреждения их порчи / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.А. Феоктистова, А.В. Алешкин // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2013. - №4 (24). -С. 36-44.
