Противовоспалительное, анальгезирующее действие растительного средства «Фитокол» Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Сибирский медицинский журнал, 2007, № 5

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ

© АЖУНОВА Т.А., ЛУБСАНДОРЖИЕВА П.Б., ЦЫБАНОВ К.Ц. - 2007

ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЕ, АНАЛЬГЕЗИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА «ФИТОКОЛ»

Т.А. Ажунова, П.Б. Лубсандоржиева, К.Ц. Цыбанов (Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, директор — д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов)

Резюме. Установлена противовоспалительная и анальгезирующая активность многокомпонентного растительного средства «фитокол». Указанные свойства позволяют рекомендовать его для профилактики и лечения хронического язвенного колита без риска развития осложнений при его длительном применении. Ключевые слова: «фитокол», противовоспалительное и анальгезирующее действие._

Проблеме хронического колита в связи с его широкой распространенностью, трудностями диагностики и лечения современная медицина постоянно уделяет пристальное внимание. Хроническим колитом страдают люди всех возрастов. Чаще всего им заболевают в возрасте 20-40 лет. В последние годы заболеваемость хроническим колитом имеет отчетливую тенденцию к росту [2,3,4]. Отсутствие точных знаний об этиологии и патогенезе хронического колита затрудняет лечение этого заболевания. Применяют препараты, обладающие антибактериальным, противовоспалительным и имму-нодепрессивным действием.

В этой связи разработан многокомпонентный растительный экстракт с условным названием «фитокол», в который входят экстракты черных листьев бадана толстолистного, цветков ромашки аптечной, травы тысячелистника обыкновенного и листьев мяты перечной.

Материалы и методы

Изучение острой токсичности водного раствора «фитокола» при однократном внутрибрюшинном и внутрижелудочном способе введения проводили на крысах обоего пола линии Wistar массой 140150 г с использованием пробит анализа по Литчфильду и Уилкок-сону [1]. Наблюдение за общим состоянием животных и их поведением осуществляли в течение 14 дней.

В результате проведенных исследований установлено, что при однократном внутрибрюшинном введении фитокола DL составляла 2500 мг/кг (2440,1-2670 мг/кг).

При однократном внутрижелудочном введении фитокола во всех исследованных дозах (от 500 мг/кг до 8000 мг/ кг) гибели животных в течение всего периода наблюдения (14 суток) не отмечали. Максимальная доза фитокола составила 8000 мг/кг (максимальное количество испытуемого фитосредства, растворение которого возможно в объеме вода, исходя из расчета 10 мл/кг). При введении высоких доз фитокола (7500 мг/кг-8000 мг/кг) в течение первых двух суток у животных наблюдали признаки общей интоксикации в виде гиподинамии, потери аппетита, незначительного учащения дыхания. В последующие дни наблюдения признаки интоксикации животных не регистрировались и DLустановить не удавалось.

Таким образом, при внутрижелудочном введении фи-токол характеризуется хорошей переносимостью и относится к малотоксичным веществам — IV классу токсичности по классификации токсичности химических веществ, принятой в России и ВОЗ [8]. В дальнейшем исследовали противовоспалительную активность фитокола с использованием моделей асептического воспаления, позволяющих оценить его влияние на основные стадии воспалительного процесса: экссудацию, альтерацию и регенерацию. Так-

же исследовали анальгезирующее действие фитокола. Полученные данные обработаны статистически с использованием Ц-критерия Манна-Уитни [7]. Различия считали достоверными при р < 0,05.

Антиэкссудативное действие фитокола определяли на модели острого асептического воспаления задней конечности крыс с применением флогогенного агента формалина. Исследование проведено на крысах обоего пола линии Wistar массой 160-170 г. Воспроизведение острого асептического воспаления конечности осуществляли по методу Ю.В. Стрельникова [6]. Фитокол вводили внутрижелу-дочно в дозах 250, 200 и 150 мг/кг в объеме 10 мл/кг за 3 часа до субплантарного введения крысам в правую заднюю лапку 0,1 мл 3% раствора формалина, а затем через 5 и 18 часов после этого. Животным контрольной группы по аналогичной схеме в равном объеме вводили воду очищенную. В качестве препарата сравнения использовали сбор, состо-

ящий из травы зверобоя продырявленного, листьев мяты перечной, цветков ромашки аптечной, плодов укропа огородного, корней и корневищ валерианы обыкновенной [5]. Указанный сбор назначали форме отвара в объеме 10 мл/ кг по аналогичной схеме. Через 24 часа после введения формалина проводили оценку антиэкссудативного эффекта фитокола онкометрическим методом с использованием формулы: % угнетения отека = Рк — Р/Рк, где: Рк — разность объема лапок с отеком и без отека у животных контрольной группы; Р — разность объема лапок с отеком и без отека у животных опытной группы, получавших фитокол.

Из приведенных в таблице 1 данных следует, что «фитокол» в дозах от 150 до 250 мг/кг оказывает анти-экссудативное действие, снижая выраженность отека лапок крыс на 20,0-34,0% по сравнению с показателями у крыс контрольной группы, причем наиболее выраженный антиэкссудативный эффект фитокола проявлялся в дозе 250 мг/кг. В связи с этим, в дальнейших исследованиях использовали указанную дозу «фитоко-ла». Препарат сравнения также оказывал антиэкссуда-тивное действие, но в менее выраженной степени.

Таблица 1

Влияние «фитокола» на экссудативную фазу воспаления при формалиновом отеке

лапок у крыс

Группы животных Доза, Разность объема лапок с % угнетения

мг/кг отеком и без отека, мл отека

Контрольная (форма-лин+вода очищенная) - 0,75+0,04 -

Опытная 1 (форма- 250 0,50+0,01* 34,0

лин+фитокол)

Опытная 2 (форма- 200 0,58+0,02* 23,0

лин+фитокол)

Опытная 3 (форма- 150 0,60+0,01* 20,0

лин+фитокол)

Опытная 4 (формалин+ 100 0,61+0,02* 19,0

препарат сравнения)

Примечание: * - здесь и далее разность достоверна по сравнению с контролем при р<0,05.

Изучено влияние «фитокола» на фазу альтерации воспалительного процесса. Опыты проведены на крысах обоего пола линии Wistar массой 150-170 г. Моделирование воспалительного процесса осуществляли по методу Мен-кина [6] путем подкожного введения 0,5 мл 9% раствора уксусной кислоты (СН3СООН) в область спины с предварительно выстриженной шерстью. Одновременно

с этим, крысам внутрибрюшинно вводили раствор дек-страна в дозе 300 мг/кг. Первое внутрижелудочное введение фитокола в дозе 250 мг/кг в объеме 10 мл/кг осуществляли за 1 час до введения уксусной кислоты, а затем ежедневно 1 раз в сутки в течение 25 дней. Животные контрольной группы получали воду, очищенную по аналогичной схеме, в эквиобъемных количествах. На 2, 9 и 25 сутки эксперимента оценивали площадь некро-тизированной ткани планиметрическим методом.

Таблица 2

Влияние «фитокола» на процессы альтерации и регенерации при остром асептическом воспалении у крыс

Таблица 3

Влияние «фитокола» на течение хронической пролиферативной фазы воспаления

у крыс

Группы животных Разница между массой сухой Разница между массой

гранулемы и исходной влажной и сухой

массой ватного шарика, мг гранулем, мг

Контрольная 40,20+1,61 235,22±6,31

Опытная 1 38,23+1,64 264,00±8,27

Опытная 2 38,64+2,04 223,23±10,21

Группы животных Площадь альтерации, см2

2 сутки 9 сутки 25 сутки

Контрольная (СН3СООН+ вода очищенная) 3,35±0,03 2,99±0,05 1,41±0,01

Опытная 1 (СН3СООН+ фитокол) 2,68±0,05* 1,72±0,04* 1,05±0,03*

Опытная 2 (СН3СООН+ препарат сравнения) 2,99±0,04 2,68±0,04 1,48±0,02

оценивали по разнице между массой сухой гранулемы и исходной массой ватного шарика (15 мг), а антиэкс-судативную активность — по разнице между массой влажной и сухой гранулем.

В результате исследований установлено, что «фито-кол» в дозе 250 мг/кг практически не влияет на образование фиброзно-грануляционной ткани на фоне хронического пролиферативного воспаления у крыс (табл. 3).

Изучали влияние «фитокола» на порог болевой чувствительности с использованием модели патологической боли — «корчи» [6]. В экспериментах использовали крыс обоего пола линии 'ЭДМаг массой 160170 г. Модель воспроизводили однократным внутрибрюшинным введением 0,75% раствора уксусной кислоты. Фитокол вводили крысам внутрь в дозе 250 мг/кг в объеме 10 мл/кг за 45-60 минут до введения уксусной кислоты. Контрольной группе крыс вводили воду, очищенную в аналогичных условиях, в эквиобъемных количествах. Через 10 минут после введения уксусной

Как следует из данных, приведенных в таблице 2, введение «фитокола» в указанной дозе крысам оказывает антиальтеративное действие, снижая степень деструкции ткани при воздействии флогогенного агента уже на ранних сроках наблюдения. Так, через 2 и 9 суток после введения уксусной кислоты площадь альтерации уменьшалась на 20 и 43% соответственно по сравнению с показателями у крыс контрольной группы. Препарат сравнения оказывал менее выраженное антиальтеративное действие.

Изучено влияние «фитокола» на пролиферативные процессы при воспалении. Эксперименты проведены на крысах линии 'ЭДМаг обоего пола массой 170-180 г. Воспалительную реакцию вызывали по методу Тринус и соавт. [6]: стерильные ватные шарики массой 15 мг имплантировали под кожу крыс в области спины в асептических условиях. «Фитокол» вводили внутрижелудочно в дозе 250 мг/кг в объеме 10 мл/кг 1 раз в сутки в течение 7 дней (опытная группа 1). Животным контрольной группы вводили в эквиобъемных количествах по аналогичной схеме воду очищенную. В качестве препарата сравнения использовали сбор в форме отвара в объеме 10 мл/кг (опытная группа 2). Через 7 суток извлекали гранулемы и проводили взвешивание на аналитических весах в сыром виде (сразу после извлечения) и после высушивания при температуре 700С в течение 24 часов (до постоянной массы). Пролиферативную реакцию

кислоты регистрировали количество специфических ноцицептивных ответов типа «корчи» у контрольных и опытных животных. Выраженность анальгезии оценивали по формуле: А= (Р — Ро) Рк х 100%, где А — коэффициент анальгезии; Рк — колкичество ответов типа

Таблица 4

Влияние «фитокола» на развитие уксусных «корчей» у крыс

Группы животных Латентный период, мин. Количество «корчей», у.е. Анальгетический эффект, %

Контрольная 6,22±0,11 51,60±0,96 -

Опытная 11,22±0,93* 20,42±0,39* 61

«корчи» за 10 минут у животных в контроле; Ро — количество ответов типа «корчи» у животных опытной группы после введения исследуемого фитосредства.

Результаты исследований показали (табл. 4), что «фитокол» в дозе 250 мг/кг проявляет анальгезирующую активность. После введения «фитокола» на 80% увеличивался латентный период появления «корчей», а количество специфических ноцицептивных ответов на химический раздражитель снижался на 61%.

Таким образом, данные проведенных исследований показывают, что испытуемый экстракт «фитокол» в дозе 250 мг/кг оказывает выраженное противовоспалительное и анальгезирующее действие, оптимизируя течение воспалительной реакции, что, очевидно, обусловлено наличием в нем широкого спектра биологически активных веществ.

ANTI-INFLAMMATORY, ANALGESIC EFFECTS OF THE VEGETATIVE DRUG "PHYTOCOL"

T.A. Azhunova, P.B. Lubsandorzhieva, K.TS. Sibanov (Institute of General and Experimental Biology, Ulan-Ude)

It is proved anti-inflammatory and analgesic activities of vegetative drug "phytocol". These properties allow to recommende "Phytocol" for the prophylaxis and treatment of the chronic ulcer colitis without risk of complications during long-term use.

ЛИТЕРАТУРА

1. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. — Л., 1963. — С.81-107.

2. Гончарик И.И. Болезни желудка и кишечника. — Минск, 1994. - 160 с.

3. Гребенев А.Л., Мягкова Л.П. Болезни кишечника. — М., 1994. — 400 с.

4. Григорьев П.Я, Яковенко Э.П. Диагностика и лечение хронических болезней органов пищеварения. — М., 1990. — 364 с.

5. Лебедев В.П. Клиническая фитотерапия. — Новосибирск, 2003. — 368 с.

6. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2005. — 832 с.

7. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. — М., 2000. — 263 с.

8. Сидоров К.К. О классификации токсичности ядов при парентеральных способах введения // Токсикология новых промышленных химических веществ. — М., 1973. — Вып. 13. — С.47-51.

© КОРНОПОЛЬЦЕВА Т.В., ТАНХАЕВА Л.М., АСЕЕВА Т.А. - 2007

МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУММЫ ФЛАВОНОИДОВ В НАДЗЕМНОЙ ЧАСТИ GENTIANA ALGIDA

Т.В. Корнопольцева, Л.М. Танхаева, Т.А. Асеева

(Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, директор — д.б.н., проф. Л.Л. Убугунов, отдел биологически активных веществ, зав. — д.м.н., проф. С.М. Николаев)

Резюме. Горечавка холодная — лекарственное растение, используемое в традиционной медицине при заболеваниях горла и при интоксикациях. Для стандартизации данного сырья разработана методика количественного определения суммы флавоноидов спектрофотометрическим методом в пересчете на лютеолин-стандарт, которая может быть использована при определении подлинности лекарственного сырья.

Ключевые слова: ОеиНаиа algida, методика определения суммы флавоноидов, антимикробный эффект.

Gentiana algida Pall. горечавка холодная (spang rgyan) — лекарственное растение, известное в тибетской медицине как лучшее средство для лечения болезней горла, легких и при интоксикациях [1,4]. По данным Ц. Хайдава с соавт. [7] и Самтэна [6] цветки горечавки холодной входят в состав сложных прописей, назначавшихся при крупозной пневмонии, хронических гнойных заболеваниях, связанных с увеличением общего объема легких и возникновением различных опухолей в них, остром и хроническом бронхите, отеках и язвах в горле, заболеваниях полости рта.

Надземная часть растения содержит иридоиды, ксантоны, алкалоиды, флавоноиды [5].

При фармакологических исследованиях различных фракций горечавки холодной (хлороформной, этила-цетатной и бутанольной), проведенных в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН, высокую противовоспалительную активность показала эти-лацетатная фракция. Данное обстоятельство позволяет предложить в качестве критерия подлинности сырья содержание в нем веществ фенольного характера (фла-воноидов).

Материалы и методы

Для количественного определения флавоноидов — соединений, имеющих собственное поглощение в УФ- и частично в видимой области спектра, использовали спект-рофотометрический метод анализа. Зависимость оптической плотности от длины волны измеряли на спектрофотометре Alient-8453E с частотой шага в 1 нм.

Для количественного определения экстрактивных веществ использовался фармакопейный метод [3].

Результаты и обсуждение

Дифференциальный метод спектрофотометричес-кого анализа основан на использовании реакции ком-плексообразования с раствором алюминия хлорида. Полученные комплексы имеют максимумы поглощения, которые позволяют более избирательно определить количество флавоноидов, поскольку эта область спектра достаточно удалена от максимумов поглощения сопутствующих фенольных и других органических веществ, содержащихся в экстрактах сырья [2].

При исследовании УФ-спектров спиртового извлечения из данного сырья было обнаружено, что максимумы УФ-спектров спиртовых извлечений горечавки холодной близки к максимумам УФ-спектров поглощения ГСО лютеолина. Далее при добавлении к спиртовому извлечению горечавки холодной раствора алюминия хлорида II-ой максимум поглощения УФ-спектра

смещался к 400 нм и совпадал с максимумами поглощения стандартного образца лютеолина, снятого в аналогичных условиях.

Подобраны оптимальные условия экстракции, при которых достигается максимальный выход флавоноидов, так концентрация экстрагента — 70% этанол, температура экстракции 60°С, время экстракции 60 минут, соотношение сырье — экстрагент 1:16, размер частиц сырья 0,5-1мм, для максимального извлечения флаво-ноидов достаточно 3-х кратной экстракции.

Методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-стандарт в надземной части горечавки холодной.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 0,5 мм.

Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл 50% этанола. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 75 мин., периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Горячее извлечение фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 200 мл. Экстракцию повторяют дважды по 50 мл и извлечения фильтруют в ту же мерную колбу. После охлаждения объем объединенных извлечений доводят 50% этанолом до метки и перемешивают (раствор А).

В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1 мл раствора А и 1 мл раствора алюминия хлорида в 95% этаноле, 1 мл разведенной уксусной кислоты и доводят объем раствора 95% этанолом до метки. Через 40 минут измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 400 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл извлечения, 1 капли разведенной уксусной кислоты и доведенный 95% этанолом до метки в мерной колбе на 25 мл.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Государственного стандартного образца (ГСО) лютеолина, приготовленного аналогично испытуемому раствору.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин на абсолютно сухое сырье в процентах (Х) вычисляют по формуле:

Х _Рх х Мо х 200 х 25 х100 х100 Do х М х 100 х 25 х(100