CC BY
54
Gulyaev Sergei Mironovich, candidate of medical sciences, senior researcher, Institute of General and Experimental Biology SB RAS, 670047, Ulan-Ude, Sakhyanova str.,6, tel.: (3012)-43-37-13, e-mail: [email protected]
Malanov Kim Zhapovich, doctor of medical sciences, professor, head of the department of public health and health service, medical faculty, Buryat State University. Ulan-Ude, Oktyabrskaya str., 36a.
Urbanova Ekaterina Zoriktuevna, postgraduate student, Institute of General and Experimental Biology SB RAS, Ulan-Ude.
Zhalsanov Yuri Veniaminovich, postgraduate student, Institute of General and Experimental Biology SB RAS, Ulan-Ude.
УДК 615.017:615.322 © Ж.Б. Дашинамжилов, К.Ж. Маланов, П.Б. Лубсандоржиева
ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЕ ДЕЙСТВИЕ ЭКСТРАКТА СУХОГО ИЗ СЕМИКОМПОНЕНТНОГО СБОРА «НАРКОФИТ»
В данной работе показано, что экстракт сухой из семикомпонентного сбора «Наркофит» обладает противовоспалительным свойством, проявляющимся в угнетении экссудации, уменьшении проницаемости сосудов и снижении дегрануляции тучных клеток.
Ключевые слова; «Наркофит», противовоспалительное действие.
Zh.B. Dashinamzhilov, K.Zh. Malanov, P.B. Lubsandorzhieva
THE ANTI-FLAMMATORY EFFECT OF DRY EXTRACT OF SEVEN COMPONENT COLLECTION «NARKOFIT»
In this article it is proved that dry extract of seven component collection «Narkophit» has anti-inflammatory property. It is manifested in the inhibition of exudation, reducing the blood vessels permeability and decreasing the fat cells degranulation.
Keywords: «Narkophyt», anti-inflammatory effect.
Фармакологическая регуляция процессов воспаления является одной из важнейших проблем медицины. К сожалению, в настоящее время недостаточно применяются противовоспалительные средства из лекарственных растений, отличающиеся лучшей переносимостью, меньшей токсичностью. Поэтому поиск новых растительных средств, обладающих противовоспалительным действием, является актуальной задачей.
Цель работы - определение противовоспалительной активности экстракта сухого из семикомпонентного сбора, условно названного «наркофит», состоящего из плодов шиповника иглистого (Rosa) - 200 г, плодов боярышника кроваво-красного (Crataegus) - 200 г, корневищ с корнями девясила высокого (Inula helenium L.) - 250 г, листьев мяты перечной (Mentha piperita L.) -100 г, травы сушеницы топяной (Gnaphalium uliginosum L.) - 50 г, листьев брусники обыкновенной (Vaccinium vitis - ideae L.) - 100 г, корневищ с корнями элеутерококка колючего (Eleutherococcus senticosus L.) - 100 г
[5].
Материалы и методы исследования
Исследования проведены в летне-осенний период на 238 белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 160-170 г, которых содержали в условиях естественного светового режима и на стандартной диете при свободном доступе к воде и пище. Из эксперимента животных выводили в соответствии с «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей».
При определении противовоспалительной активности данного средства использовали классические модели асептического воспаления, позволяющие оценить влияние экстракта сухого (ЭС) «Наркофит» на основные стадии этого процесса, а также выявить некоторые аспекты механизма его противовоспалительного действия.
О характере влияния испытуемого средства на альтерацию тканей и интенсивность процессов регенерации судили по динамике заживления кожно-мышечного дефекта у крыс, индуцированного подкожным введением 0,5 мл 9 %-ной уксусной кислоты с одновременным введением раствора дек-страна в дозе 300 мг/кг массы животного [6]. Первое введение водного раствора экстракта сухого
«Наркофит» в дозе 200 мг/кг осуществляли внутрижелудочно за 1 час до введения флогогенных агентов, а затем ежедневно 1 раз в сутки на протяжении всего эксперимента (29 дней). Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме.
В качестве препарата сравнения другой группе крыс вводили калефлон в изоэффективной дозе 100 мг/кг массы животного. Площадь некротизированной ткани оценивали планиметрическим методом на 9-е и 29-е сутки эксперимента.
Оценку влияния ЭС «Наркофит» на экссудативную фазу воспалительной реакции проводили на моделях острого асептического воспаления у животных с использованием флогогенных агентов с различными механизмами противовоспалительного действия (формалин, декстран, гистамин). Асептическое воспаление у крыс в соответствующих группах вызывали путем однократного субплантар-ного введения в заднюю конечность 0,1 мл 3 %-ного раствора формалина [9], 6 %-ного водного раствора декстрана в объеме 0,1 мл [1] и 0,1 %-ного раствора гистамина гидрохлорида в объеме 0,1 мл [9]. ЭС «Наркофит» и калефлон в соответствующих группах животных вводили внутрижелудочно за
1 час до инъекции, а затем через 5 и 18 часов. Оценку антиэкссудативного действия вычисляли, рассчитывая процент угнетения отека по отношению к контролю. Влияние «Наркофита» на образование фиброзно-грануляционной ткани осуществляли по методу Ф. Тринус и соавт. [8]: стерильные ватные шарики массой 15 мг имплантировали белым крысам под кожу в области спины в асептических условиях. Испытуемое средство и препарат сравнения вводили крысам внутрижелудочно с 1-го дня опыта в указанном объеме и дозах 1 раз в сутки в течение 7 дней. После этого образовавшиеся гранулемы взвешивали на аналитических весах в сыром виде (сразу после извлечения) и после высушивания (при 70 0С в течение 24 часов до постоянного веса).
Острый перитонит воспроизводили по методу П.Н. Александрова с соавт. [1], путем внутрибрю-шинного введения лабораторным животным 1 мл 0,2 %-ного раствора серебра нитрата. ЭС «Наркофит» и калефлон вводили животным опытных групп за 30 мин и через 1 час после инъекции серебра нитрата. Критерием выраженности острого воспалительного процесса являлись объем экссудата в брюшной полости и процент дегранулированных тучных клеток в брыжейке.
Оценку влияния испытуемого средства на сосудистую проницаемость у крыс проводили на модели 24-часового иммобилизационного стресса с использованием метода «меченых» сосудов [2]. Животным опытной группы внутрижелудочно вводили ЭС «Наркофит» в дозе 200 мг/кг веса животного в виде водного раствора, однократно за 1 час до исследования. По аналогичной схеме в изоэффектив-ной дозе использовали препарат сравнения калефлон в отдельной группе животных. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. Нарушение сосудистой проницаемости оценивали по числу «меченых» сосудов в каждом из 10 просмотренных окон брыжейки, а также по интенсивности метки. Для оценки достоверности различий использовали 1- критерий Стьюдента [4].
Результаты исследований и их обсуждение
Как следует из данных, приведенных в таблице 1, ЭС «Наркофит» в указанном объеме оказывает противовоспалительное действие, о чем свидетельствуют уменьшение степени альтерации тканей и повышение интенсивности регенераторных процессов в очаге воспаления. Введение белым крысам ЭС «Наркофит» оказывает антиальтеративное действие, снижая степень деструкции ткани при воздействии флогогенного агента. Так, на 9 и 29-е сутки эксперимента площадь повреждения тканей снижается на 34 и 47 % соответственно по сравнению с контролем (табл. 1).
Таблица 1
Влияние экстракта сухого «Наркофит» на альтерацию и регенерацию при остром асептическом воспалении у белых крыс
Группы животных Площадь альтерации, см2
9 сутки 29 сутки
Контрольная (СН3СООН+дист. Вода) (п=18) 5,25±0,30 2,72±0,10
СН3СООН +ЭС «Наркофит» (п=20) 3,45±0,26* 1,45±0,10*
СН3СООН+калефлон (п=20) ж 4,00±0,24 ж 1,95±0,14
* и Примечание: - здесь и далее значения, отличающиеся от данных животных контрольной группы при
Р<0,05
ЭС «Наркофит» оказывает существенное антиэкссудативное действие, о чем свидетельствует уменьшение выраженности отека конечности животных при асептическом воспалении, индуцированном формалином - на 30,5%, декстраном - на 21,8% и гистамином - на 20% по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы (табл. 2).
Таблица 2
Влияние экстракта сухого «Наркофит» на экссудативную фазу воспаления у белых крыс
Группы животных Разность между объемами воспаленной и невоспаленной лапок, мл % угнетения отека
Формалиновый отек
Контрольная (формалин+дист. вода) (п=12) 1,15±0,05 -
формалин+ ЭС «Наркофит» (п=10) 0,80±0,05* 30,5
формалин+калефлон (п=10) ж 0,82±0,05 28,7
Декстрановый отек
Контрольная (декстран+дист. Вода) (п=10) 1,15±0,1 -
декстран +ЭС «Наркофит» (п=10) 0,90±0,1* 21,8
Декстран +калефлон(п=10) ж 1,10±0,1 4,4
Гистаминовый отек
Контрольная (гистамин+дист. вода) (п=10) 0,50±0,01 -
Гстамин + ЭС «Наркофит» (п=10) 0,40±0,01* 20
Гистамин +калефлон (п=10) ж 0,45±0,01 10
При этом антиэкссудативная активность ЭС «Наркофит» превосходит таковую у препарата сравнения - калефлона.
При определении влияния исследуемого средства на пролиферативную стадию воспаления установлено, что масса соединительнотканной капсулы в очаге воспаления возрастает на 12,7% по сравнению с показателями у животных контрольной группы (табл. 3), т.е. обладает умеренным пролиферативным действием.
Таблица 3
Влияние сухого экстракта «Наркофит» на образование грануляционно-фиброзной ткани в очаге
воспаления у белых крыс
Группы животных Масса влажной гранулемы, мг Масса сухой гранулемы, мг Разница от исходной массы, мг
Контрольная (дист. вода) (п=8) 178,0±2,42 28,8±1,12 13,8±1,20
ЭС «Наркофит» (п=8) 144,2±0,62* 30,8±0,70* 15,8±0,80
Калефлон(п=8) 147,4±36,0* 21,4±1,45* 6,40±0,60*
Инъекция крысам раствора серебра нитрата сопровождается развитием острого асептического воспаления, о чем свидетельствует выраженная экссудация в брюшную полость животных контрольной группы большого количества жидкости красновато-бурого цвета, обусловленного присутствием в ней значительного количества эритроцитов (табл. 4).
Введение на этом фоне другой группе крыс ЭС «Наркофит» в вышеуказанной дозе оказывало противовоспалительное действие, на что указывало более чем 2-кратное уменьшение объема перитонеальной жидкости по сравнению с данными у животных контрольной группы. При этом внутри-брюшинная жидкость у животных, получавших испытуемое средство, имела светло-серый цвет с опалесцирующим оттенком, свидетельствующим о практически полном отсутствии в ней эритроцитов. Наряду с этим в брыжейке крыс опытной группы, получавших ЭС «Наркофит», наблюдали снижение количества дегранулированных тучных клеток - в среднем на 35% по сравнению с данными у крыс контрольной группы (табл. 4). Препарат сравнения оказывал однонаправленный менее выраженный эффект.
Таблица 4
Влияние экстракта сухого «Наркофит» на объем внутрибрюшинной жидкости и дегрануляцию тучных клеток в брыжейке при остром перитоните у белых крыс
Группы животных Объем внутрибрюшинной жидкости, мл Дегрануляция тучных клеток, %
Интактная (п=10) - 3,0±0,2
Контрольная (Л^МОз+дист. вода) (п=8) 0,7±0,1 82,5±5,2
А^Оз +ЭС «Наркофит» (п=8) 0,3±0.1* 54,1±4,5*
Л£ЫО3+калефлон (п=8) 0,5±0.1* 70,5±5,1*
При исследовании влияния ЭС «Наркофит» на проницаемость сосудов установлено наличие у испытуемого сбора сосудоукрепляющего действия. Так, у животных, получивших ЭС «Наркофит», количество брыжеечных окон без метки увеличивалось почти в 2 раза по сравнению с контролем, также наблюдали существенное уменьшение количества окон с более 10 «мечеными» сосудами и некоторое увеличение количества брыжеечных окон от 1 до 10 «меченых» сосудов (табл. 5). При исследовании проницаемости сосудов по интенсивности метки количество животных с самыми интенсивными метками, соответствующими III и IV степеням проницаемости, у группы крыс, получавшей ЭС «Наркофит», уменьшалось соответственно на 20 и 100% по сравнению с контролем. При этом препарат сравнения калефлон несколько уступал по эффективности ЭС «Наркофит».
Таблица 5
Влияние экстракта сухого «Наркофит» на проницаемость сосудов
Группы животных Количество брыжеечных окон в % ко всем просмотренным Число крыс с различными степенями метки ( % от всего числа крыс в опыте)
Без метки 1-10 меченых сосудов Более 10 меченых сосудов 0 I II III IV
Контрольная (иммобилизация+ дист. вода ) (п=10) 29 15 58 0 100 100 100 40
иммобилизация+ ЭС «Наркофит» (п=10) 53 21 28 0 100 100 80 0
иммобилизация+ калефлон (п=10) 49 17 32 0 100 100 90 0
Таким образом, внутрижелудочное введение ЭС «Наркофит» в дозе 200 мг/кг массы крысам при остром асептическом воспалении оказывает антиальтеративное и антиэкссудативное действие, а также способствует ускорению регенерации, в результате чего наблюдается заживление ткани на более ранних сроках патологического процесса. Кроме того, на фоне введения ЭС «Наркофит» отмечается уменьшение проницаемости сосудов, а также снижение дегрануляции тучных клеток с блокированием высвобождения из них гистамина. Указанные эффекты также подтверждают наличие у испытуемого средства выраженной противовоспалительной активности.
Очевидно, что реализация указанного действия ЭС «Наркофит» обеспечивается высоким содержанием в нем биологически активных веществ, таких как флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, дубильные вещества, органические кислоты, тритерпеноиды, антоцианы, полисахариды и другие водорастворимые вещества. Известно, что указанные биологически активные вещества оказывают ан-тиоксидантное, мембраностабилизирующее, противовоспалительное действие. Этим можно объяснить указанное выраженное противовоспалительное действие ЭС «Наркофит».
Выводы
1. Внутрижелудочное введение крысам линии *^81аг ЭС «Наркофит» в дозе 200 мг/кг массы при остром асептическом воспалении сопровождается антиальтеративным и антиэкссудативным действием, а также ускорением регенерации.
2. На фоне введения животным ЭС «Наркофит» наблюдается уменьшение проницаемости сосудов, а также снижение дегрануляции тучных клеток с блокированием высвобождения из них гистамина.
Литература
1. Александров П.Н. Фармакология и токсикология. 1986. №1. С. 84-86
2. Горизонтова М.П., Алексеев О.В., Чернух А.М. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1975. №2. С. 22-25
3. Лещинский А.Ф. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1976. №4. С. 436-438
4.Монцевичюте-Эрингене Е.В. Упрощенные математическо-статистические методы в медицинской исследовательской работе // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1964. №4. С. 71-78 .
5. Николаев С.М., Найданов С.С., Дашинамжилов Ж.Б., Лубсандоржиева П.Б., Пинаева Е.В., Асеева Т.А., Намсараева Г.Т. Лекарственный сбор для профилактики и лечения алкогольного абстинентного синдрома и алкогольного гепатита /Патент на изобретение № 217806 от 27. 01. 2002.
6. Ойвин И.А., Шетель С.Л. Методика изучения местных нарушений капиллярной проницаемости // Материалы по патогенезу воспаления и патологии белков крови. Душанбе, 1961. Т.49, №.5. С. 167-173 .
8. Тринус Ф.П., Мохорт Н.А., Клебанов Б.М. Нестероидные противовоспалительные средства.-Киев, 1975. 240 с.
9. Стрельников Ю.С. Сравнительная характеристика противовоспалительного действия некоторых пиримидиновых производных // Фармакология и токсикология. 1960. №6. С. 526-531.
Дашинамжилов Жаргал Балдуевич, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник Лаборатории безопасности биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, Улан-Удэ, Сахьяновой, 6. Тел.: 8(3012)433463. e-mail: [email protected]
Маланов Ким Жапович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой общественного здоровья и здравоохранения медицинского факультета БГУ. Улан-Удэ, Октябрьская, 36 а.
Лубсандоржиева Пунцик Базыровна, кандидат фармацевтических наук, старший научный сотрудник Лаборатории медико-биологических исследований Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, Сахьяновой, 6. Тел.: 8(3012)433463. e-mail: [email protected]
Dashinamzhilov Zhargal Balduevich, candidate of medical sciences, senior researcher, laboratory of safety of biological active substances, Institute of General and Experimental Biology SB RAS. 670047, Ulan-Ude, Sakhyanova str., 6, tel. 8(3012)433463. e-mail: [email protected]
Malanov Kim Zhapovich, doctor of medical sciences, professor, head of the department of public health and health service, medical faculty, Buryat State University. Ulan-Ude, Oktybrskaya str., 36a.
Lubsandorzhieva Puntsik Bazyrovna, candidate of pharmaceutical sciences, senior researcher, laboratory of medical and biological research, Institute of General and Experimental Biology SB RAS. 670047, Ulan-Ude, Sakhyanova str., 6, tel. 8(3012)433463. e-mail: [email protected]
