CC BY
21
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 97
вень практически не менялся (5,2 ± 3,0 %). Также комби- следовательностей с последовательностями: митохондри-нация CQ и TMZ увеличивала количество белка LC3B альных транскриптов; транскрибируемых повторов чело-(маркера уровня аутофагосом) по сравнению с контролем века; РНК человека из базы данных human RefSeq; генома и препаратами в монорежиме. Ингибирование аутофагии человека версии hg19. Различия в представленности транс-за счет миРНК снижало токсическое действие на клетки криптов в составе циркулирующих комплексов плазмы ММ самого CQ. Аналогичные данные были получены при крови оценивали с помощью пакета программ Cuffdiff. добавлении ингибитора образования аутофагосом LY-294002. Результаты. Для каждой комплементарной ДНК би-Стоит отметить, что при коинкубации клеток с 2 ингиби- блиотеки было получено ~ 14 млн экспериментальных по-торами одновременно отмечали увеличение цитотоксич- следовательностей. Показано, что для мембранных частиц, ности TMZ: выживаемость клеток ММ уменьшалась с 80 осаждаемых при 160000 g, в сравнении с остальными суб-до 30 %. Таким образом, можно предположить, что ауто- фракциями плазмы крови и клетками крови характерно фагия предохраняет клетки от темозоломидиндуцирован- обогащение фрагментами мРНК (такими как KRTAP10—5, ной цитотоксичности. TSHB, IK, PMP22, HOXB8, OR9Q2, UCHL3) и некодиру-Заключение. Полученные результаты демонстрируют, ющих РНК (RNU11, микроРНК). Для частиц, осаждаемых что CQ и LY-294002 ингибируют аутофагию в клетках ММ при 16000 g, показано повышенное содержание определен-и способствуют увеличению их химиочувствительности ного набора форм микроРНК, малых ядрышковых РНК к TMZ. Данные комбинации можно считать перспектив- и vault РНК. ными, требующими дальнейшего изучения, в том числе Заключение. В совокупности с данными литературы в опытах in vivo. полученные результаты указывают на то, что исследован-Работа поддержана грантом РНФ № 14-35-00107от 17.09.2014. ные типы циркулирующих комплексов плазмы крови человека отличаются не только определенным набором A.В. Савельева1, Е.В. Кулигина1, Е.Д. Чикова2, микроРНК, но и других классов РНК, представленных B. В. Козлов3, В.А. Рихтер1, Д. В. Семенов1 в клетке, что может быть использовано для разработки ТРАНСКРИПТОМ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ новых подходов к ранней диагностике и терапии заболе-КОМПЛЕКСОВ ПЛАЗМЫ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА ваний человека. ФГБУН ИХБФМ СО РАН, Новосибирск; Работа поддержана грантом РФФИ № 16-04-01457. 2ЦНМТ, Новосибирск; 3ГБУЗНСОНОКОД, Новосибирск Н.С. Сапрыкина1, М.А. Барышникова1, В.П. Краснов2, Введение. Большинство клеток организма человека вы- В.М. Бухман1, А.Ю. Барышников1 деляют 3 основных типа внеклеточных циркулирующих ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ ОРМУСТИНА комплексов: микровезикулы, экзосомы и свободные рибо- НА РАЗВИВШИХСЯ ПЕРЕВИВАЕМЫХ ОПУХОЛЯХ нуклеопротеиновые комплексы, каждый из которых несет МЫШЕЙ характерный набор РНК, отличный от продуцирующих 1ФГБУ«РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; их клеток. РНК циркулирующих комплексов, высвободив- 2 ФГБУН «ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН», шиеся после интернализации, способны оказывать регуля- Екатеринобург торное воздействие на клетки-реципиенты, что указывает Введение. Значительная доля онкологических пациен-на их участие в процессах дистантного межклеточного тов — больные с распространенными формами опухолевого взаимодействия и может быть использовано для оценки процесса, поэтому актуально расширение арсенала эффек-физиологического состояния организма. Б0льшая часть тивных при таких стадиях заболевания средств химиотера-исследований транскриптома циркулирующих комплексов пии. В ИОС им. И.Я. Постовского (УрО РАН, Екатеринбург) посвящены изучению микроРНК в составе экзосом и про- синтезировано новое соединение алкилнитрозокарбамоил, ведены для секретома культивируемых клеток человека. производное аминокислоты L-орнитина — Ормустин. В ла-Цель исследования — описание всего многообразия боратории разработки лекарственных форм НИИ ЭДиТО форм РНК в составе микровезикул, экзосом и рибонуклео- РОНЦ им. Н. Н. Блохина создана лекарственная форма «Ор-протеиновых комплексов плазмы крови человека методом мустин, лиофилизат для приготовления раствора для инъ-высокопроизводительного секвенирования. екций 125 мг». Материалы и методы. Экзосомы, микровезикулы и сво- Цель исследования — оценить влияние нового потен-бодные рибонуклеопротеиновые комплексы были получе- циального противоопухолевого препарата из класса нитроны путем последовательного центрифугирования образцов зомочевин Ормустина на рост развившихся перевиваемых плазмы крови здоровых доноров и пациентов с раком лег- опухолей мышей. кого (плоскоклеточный рак легкого и аденокарцинома) Материалы и методы. Противоопухолевое действие Ор-при 16000 и 160000 g. Суммарная РНК полученных суб- мустина изучали на мышах гибридах BDF1 (C57Bl/6*DBA/2) фракций плазмы крови (осадков мембранных частиц и фи- с подкожно привитыми опухолями различного гистогене-нального супернатанта) и форменных элементов крови за: меланомой B16, меланомой B16 сублинии F10 (B16-была выделена с помощью реагента Trizol и проанализиро- F10), меланомой Клаудмана (М3), эпидермоидной карци-вана методом массового параллельного секвенирования номой легкого Льюис (LLC), раком легкого РЛ-67. При на платформе SOLiD 5500xl. Данные обрабатывали с ис- достижении среднего объема подкожного опухолевого узла пользованием программного обеспечения Bowtie/Cufflinks (V,) ® 1000—2000 мм3 (7-12-е сутки опыта) мышам вводи-путем последовательного выравнивания полученных по- ли однократно внутривенно Ормустин в дозах 100-150 мг/кг.
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
9B МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
Терапевтический эффект оценивали по стандартным кри- 300, 350, 400, 450 и 500 мкг/мл (конечные дозы в лунках териям экспериментальной химиотерапии. на порядок ниже соответственно) определяли с помощью Результаты. Ормустин значительно и продолжительно МТТ-теста. После инкубации клеток с цисплатином (72 ч) ингибировал рост перевиваемых в далеко зашедшей стадии в каждую лунку добавляли 10 мкл МТТ (бромида 3-(4,5-ди-развития опухолей мышей. Наиболее чувствительными метилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия) (5 мг/мл) к действию препарата были меланомы. У мышей с мела- и планшеты дополнительно инкубировали в течение 4 ч. номой B16 (V, на начало лечения (8-е сутки) ® 1000 мм3) Далее из планшетов удаляли среду и в каждую лунку добав-Ормустин значительно и продолжительно (при оценке ляли по 150 мкл диметилсульфоксида для растворения по V, — на 52—88 %; при оценке по средней массе опухоли образовавшихся кристаллов формазана. С помощью риде-(на 21-е сутки) — на 48—58 %) ингибировал рост опухоли. ра для иммуноферментного анализа (ChemWell) определя-Наиболее сильное и длительное дозозависимое ингибиру- ли оптическую плотность при 505 нм. ющее действие Ормустин проявил при лечении мышей Результаты. Сравнительный анализ выживаемости опус меланомой B16-F10 (V, при начале лечения на 7-е сутки холевых клеток и клоногенных клеток эпендимомы показал, = 1000 мм3). Препарат дозозависимо вызвал значительную что при воздействии цисплатина в дозе 50 мкг/мл наблюда-регрессию опухоли (до полного исчезновения видимого ется высокая доля жизнеспособных клеток (63—64 %). подкожного узла у всех мышей в группе), однако затем рост По мере увеличения дозы цисплатина выживаемость клеток опухолей возобновился. У мышей с меланомой M3 (V на на- снижается в 2—3 раза. Эффективной дозой цисплатина для чало лечения (12-е сутки) = 1600 мм3) Ормустин также вы- опухолевых клеток эпендимомы является доза 100 мкг/мл, зывал замедление роста опухоли (на 52—61 %). При лече- а для клоногенных клеток — 100, 200 и 500 мкг/мл. нии животных с LLC (V, на 11-е сутки = 2000 мм3) Заключение. В клинической практике для оценки чув-Ормустин дозозависимо и длительно ингибировал рост ствительности клоногенных клеток эпендимомы целесо-карциномы (на 64—84 %). Наиболее устойчив к действию пре- образно использовать МТТ-тест с целью назначения парата был РЛ-67 (V при начале лечения (9-е сутки) = 900 мм3). химиотерапии больным после хирургического удаления Ормустин кратковременно ингибировал (на 50—72 %) рост опухоли головного мозга. РЛ-67. Заключение. Ормустин обладает высоким противоопухо- Е.А. Сафонова1, К.А. Лопатина1,2, А. М. Гурьев3, левым эффектом в отношении перевиваемых в далеко зашед- Е. П. Федорова1, Т. Г. Разина1 Е. П. Зуева1 шей стадии развития опухолей различного гистогенеза. ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ И СНИЖЕНИЕ Работа выполнена в рамках государственного контракта ТОКСИЧНОСТИ КОМБИНАЦИИ ЦИСПЛАТИНА № 13411.1008799.13.163 от 12.07.2013 «Доклинические исследования И ЭТОПОЗИДА С ПОМОЩЬЮ ПОЛИСАХАРИДОВ противоопухолевого лекарственного средства класса нитрозомочевин». TUSSILAGO FARFARA L. 1ФГБНУ«НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга», Томск; К.Н. Саунина, Л.Н. Николаевич 2НИ ТГУ, Томск; ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МТТ-ТЕСТА 3ГБОУ ВПО СибГМУ Минздрава России, Томск В ПРОГНОЗИРОВАНИИ Введение. Комбинация противоопухолевых препаратов ХИМИОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ КЛОНОГЕННЫХ «цисплатин + этопозид» является стандартным режимом ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ЭПЕНДИМОМЫ ЧЕЛОВЕКА химиотерапии для пациентов с мелкоклеточным раком лег-ГНУ «Институт физиологии НАНБеларуси», Минск, кого. Полисахариды Tussilago farfara L. (мать-и-мачехи Республика Беларусь обыкновенной) повышают эффективность и снижают ток-Введение. Роль гетерогенности опухоли в прогрессии сичность цитостатиков различного механизма действия при и лекарственной устойчивости злокачественных новоо- монотерапии (экспериментальные данные) и могут стать бразований практически не учитывается в клинической перспективными составляющими схем комбинированно-практике как прогностический (связанный с исходом за- го лечения опухолей. болевания) или предиктивный (предсказывающий непо- Цель исследования — изучение возможности снижения средственную эффективность химиотерапии) маркер. Хотя гематологической токсичности и повышения эффектив-вопрос о терапии гетерогенных новообразований остается ности комбинации цисплатина и этопозида с помощью открытым, одним из подходов, позволяющих преодолеть полисахаридов Tussilago farfara L. проблему внутриопухолевой неоднородности и оценки Материалы и методы. Использованы мыши-самки ли-индивидуальной чувствительности, является диагностика нии С57Bl/6 с перевитой внутримышечно карциномой чувствительности клоногенных клеток к лекарственным легких Льюис. Цисплатин и этопозид в дозах 2,5 и 5 мг/кг средствам. соответственно вводили внутрибрюшинно, 3-кратно Цель исследования — изучить чувствительность клоно- на 10, 12 и 14-е сутки после перевивки, последовательно генных клеток эпендимомы человека к цисплатину. через 10—20 мин. Полисахариды Tussilago farfara L. мыши Материалы и методы. Методом культивирования in vitro получали внутрибрюшинно, с 7-х суток после перевивки опу-были выделены опухолевые клетки из фрагмента ткани холи в дозе 20 мг/кг. Забор крови произведен на 1-е сутки эпендимомы (послеоперационный материал) в первичную после второго и третьего введения цитостатиков. Эффек-культуру, а затем методом клонирования in vitro была вы- тивность лечения оценивали, определяя массу опухоли, делена популяция опухолевых клоногенных клеток эпен- процент торможения ее роста, частоту метастазирования, димомы. Цитотоксичность цисплатина в дозах 50, 100, 200, количество и площадь метастазов в легких. Возможность
№1 I том 15 I 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
