CC BY
20
96
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
1,1—124,1) и было эффективнее раствора ЦП 5,5 мг/кг (ОР 1,10 (0,37—3,27), р = 0,861). Использование гидрогеля ЦП 8,0 мг/кг характеризовалось тенденцией влияния на риск наступления летального исхода от прогрессирования опухолевого процесса (ОР 4,88 (95 % ДИ 0,86-27,61), p = 0,07331), в то время как использование раствора ЦП 8,0 мг/кг не влияло на данный показатель (ОР 0,71 (0,25-2,05), р = 0,532).
Заключение. Полученные экспериментальные данные свидетельствуют об ингибирующем эффекте исследованных гидрогелевых форм ЦП при их интраперитонеальном применении на рост и прогрессирование асцитной гепатомы Зайде-ла, что является основанием для продолжения исследований.
О.Ю. Рыбалкина12, Е.П. Зуева1, Л.Н. Зибарева2, А.А. Бадулина2, Т. Г. Разина1, Е.Н. Амосова1, К.А. Лопатина1,2, Е.А. Сафонова1, Е.П. Федорова1 ЭКДИСТЕРОИДЫ В ДОПОЛНИТЕЛЬНОЙ ТЕРАПИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ОПУХОЛЕЙ ФГБНУ«НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга», Томск; 2НИ ТГУ, Томск
Введение. Применение цитостатиков сопровождается высокой токсичностью в отношении активно пролифери-рующих клеточных популяций организма, в частности системы гемопоэза, поэтому актуальным является поиск препаратов, снижающих токсические проявления специфического лечения и/или повышающих его эффективность. Перспективными в качестве средств дополнительной терапии опухолевых заболеваний могут быть экдистероидсодержащие лекарственные растения, ярким предствителем которых является род Silene, обладающие широким спектром фармакологической активности и отсутствием токсичности.
Цель исследования — изучение влияния экстрактов S. colpophylla и S. viridiflora на развитие карциномы легких Льюис (Lewis lung carcinoma, LLC) у мышей и эффективность лечения циклофосфаном (ЦФ), оценка их действия на периферическую кровь на фоне цитостатической терапии.
Материалы и методы. LLC перевивали внутримышечно по 5 х 106 клеток. ЦФ вводили мышам однократно вну-трибрюшинно в дозе 125 мг/кг на 10-е сутки развития опухоли. Экстракты S. colpophylla и S. viridiflora, предоставленные лабораторией фитохимии Сибирского ботанического сада НИ ТГУ, вводили per os в дозах 50 и 100 мг/кг в течение 12 сут. В конце эксперимента (21-е сутки) определяли массу опухоли, вычисляли процент торможения ее роста, частоту метастазирования, подсчитывали количество и площадь метастазов в легких. Показатели периферической крови на 3-и сутки после введения ЦФ определяли с помощью гематологического анализатора «Muchic 18vet» (Cormay, Франция). При обработке результатов использовали непараметрические критерии Вилкоксона, Манна — Уитни и углового преобразования Фишера.
Результаты. Обнаружено, что введение ЦФ оказало достоверное ингибирующее влияние на развитие метастазов. Добавление в схему лечения ЦФ экстракта S. colpophylla в дозах 50 и 100 мг/кг вызвало повышение противоопухолевого эффекта терапии, при этом торможение роста опухоли составило 49 и 46 % соответственно. Аналогичные эффекты наблюдались при сочетанном назначении мышам экстракта S. viridiflora в дозах 50 и 100 мг/кг с ЦФ. При оценке действия
экстрактов на периферическую кровь обнаружено, что цито-статик оказал ингибирующее действие на клетки периферической крови мышей с LLC. Включение экстрактов в схему химиотерапии не изменило ингибирующего влияния ЦФ на клетки миелоидного и эритроидного ростков кроветворения, однако повысило содержание тромбоцитов в 2 раза в периферической крови животных с LLC (p < 0,05).
Заключение. Включение экстрактов S. colpophylla и S. viridiflora в схему химиотерапии приводит к повышению противоопухолевого действия ЦФ, а также препятствует развитию тромбоцитопении в периферической крови животных с LLC.
О. О. Рябая1-2, А.А. Малышева1, А. В. Егорова2, Ю.А. Хоченкова1, Е.В. Степанова1, Д.А. Хоченков1 ИНГИБИРОВАНИЕ АУТОФАГИИ ПОТЕНЦИРУЕТ ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ ТЕМОЗОЛОМИДА IN VITRO НА КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЯХ МЕТАСТАТИЧЕСКОЙ МЕЛАНОМЫ
ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 2ГБОУ ВПО «РНИМУим. Н.И. Пирогова» Минздрава России, Москва
Введение. В последние десятилетия большое внимание уделяется лечению метастатической меланомы (ММ) кожи, но несмотря на достигнутые успехи, прогноз течения болезни остается неблагоприятным (средняя выживаемость пациентов с ММ кожи в мире составляет 8—10 мес). Активно изучаются новые комбинации и пути лечения. Ингибирование процесса аутофагии, позволяющего опухолевым клеткам преодолевать неблагоприятные условия, во многих доклинических исследованиях показало положительный эффект на регрессию опухолей и увеличение продолжительности жизни пациентов.
Цель исследования — изучить влияние ингибиторов аутофагии (хлорокина (CQ) и LY-294002) на цитотоксич-ность темозоломида (TMZ) на клеточных линиях ММ кожи in vitro.
Материалы и методы. Были использованы клеточные линии ММ кожи, полученные от пациентов РОНЦ им. Н.Н. Блохина. Цитотоксичность оценивали МТТ-тестом, иммуноцитохимически, уровень апоптоза определяли методом двойного окрашивания аннексином V/пропидий йодидом с помощью проточной цитометрии. Исследование аутофагии проводили посредством вестерн-блоттинга и трансфекцией микро-рибонуклеиновой кислоты (миРНК) к белку Beclin 1 клеточных линий либо при использовании ингибиторов аутофагии CQ и LY-294002.
Результаты. Для исследования влияния CQ на цито-токсичность TMZ последний был взят в нетоксических концентрациях (100—200 мкМ). МТТ-тестом показано, что CQ усиливает действие TMZ, приводя к увеличению гибели клеток ММ в среднем на 20 %, клетки с мутацией в кодоне v600 гена B-RAF были более чувствительны к комбинации CQ и TMZ. Анализ запуска апоптоза после 24-часовой инкубации с препаратами показал, что уровень апо-птоза не зависел от статуса гена B-RAF: TMZ (500 мкМ) в монорежиме вызывал гибель 3—8 % клеток. Однако под действием CQ возрастало количество апоптотических клеток до 17,5 ± 2,9 % у B-RAFv600 клеток, а у B-RAF"1 их уро-
№1 / том 15 / 2016
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 97
вень практически не менялся (5,2 ± 3,0 %). Также комби- следовательностей с последовательностями: митохондри-нация CQ и TMZ увеличивала количество белка LC3B альных транскриптов; транскрибируемых повторов чело-(маркера уровня аутофагосом) по сравнению с контролем века; РНК человека из базы данных human RefSeq; генома и препаратами в монорежиме. Ингибирование аутофагии человека версии hg19. Различия в представленности транс-за счет миРНК снижало токсическое действие на клетки криптов в составе циркулирующих комплексов плазмы ММ самого CQ. Аналогичные данные были получены при крови оценивали с помощью пакета программ Cuffdiff. добавлении ингибитора образования аутофагосом LY-294002. Результаты. Для каждой комплементарной ДНК би-Стоит отметить, что при коинкубации клеток с 2 ингиби- блиотеки было получено ~ 14 млн экспериментальных по-торами одновременно отмечали увеличение цитотоксич- следовательностей. Показано, что для мембранных частиц, ности TMZ: выживаемость клеток ММ уменьшалась с 80 осаждаемых при 160000 g, в сравнении с остальными суб-до 30 %. Таким образом, можно предположить, что ауто- фракциями плазмы крови и клетками крови характерно фагия предохраняет клетки от темозоломидиндуцирован- обогащение фрагментами мРНК (такими как KRTAP10—5, ной цитотоксичности. TSHB, IK, PMP22, HOXB8, OR9Q2, UCHL3) и некодиру-Заключение. Полученные результаты демонстрируют, ющих РНК (RNU11, микроРНК). Для частиц, осаждаемых что CQ и LY-294002 ингибируют аутофагию в клетках ММ при 16000 g, показано повышенное содержание определен-и способствуют увеличению их химиочувствительности ного набора форм микроРНК, малых ядрышковых РНК к TMZ. Данные комбинации можно считать перспектив- и vault РНК. ными, требующими дальнейшего изучения, в том числе Заключение. В совокупности с данными литературы в опытах in vivo. полученные результаты указывают на то, что исследован-Работа поддержана грантом РНФ № 14-35-00107от 17.09.2014. ные типы циркулирующих комплексов плазмы крови человека отличаются не только определенным набором A.В. Савельева1, Е.В. Кулигина1, Е.Д. Чикова2, микроРНК, но и других классов РНК, представленных B. В. Козлов3, В.А. Рихтер1, Д. В. Семенов1 в клетке, что может быть использовано для разработки ТРАНСКРИПТОМ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ новых подходов к ранней диагностике и терапии заболе-КОМПЛЕКСОВ ПЛАЗМЫ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА ваний человека. ФГБУН ИХБФМ СО РАН, Новосибирск; Работа поддержана грантом РФФИ № 16-04-01457. 2ЦНМТ, Новосибирск; 3ГБУЗНСОНОКОД, Новосибирск Н.С. Сапрыкина1, М.А. Барышникова1, В.П. Краснов2, Введение. Большинство клеток организма человека вы- В.М. Бухман1, А.Ю. Барышников1 деляют 3 основных типа внеклеточных циркулирующих ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ ОРМУСТИНА комплексов: микровезикулы, экзосомы и свободные рибо- НА РАЗВИВШИХСЯ ПЕРЕВИВАЕМЫХ ОПУХОЛЯХ нуклеопротеиновые комплексы, каждый из которых несет МЫШЕЙ характерный набор РНК, отличный от продуцирующих 1ФГБУ«РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; их клеток. РНК циркулирующих комплексов, высвободив- 2 ФГБУН «ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН», шиеся после интернализации, способны оказывать регуля- Екатеринобург торное воздействие на клетки-реципиенты, что указывает Введение. Значительная доля онкологических пациен-на их участие в процессах дистантного межклеточного тов — больные с распространенными формами опухолевого взаимодействия и может быть использовано для оценки процесса, поэтому актуально расширение арсенала эффек-физиологического состояния организма. Б0льшая часть тивных при таких стадиях заболевания средств химиотера-исследований транскриптома циркулирующих комплексов пии. В ИОС им. И.Я. Постовского (УрО РАН, Екатеринбург) посвящены изучению микроРНК в составе экзосом и про- синтезировано новое соединение алкилнитрозокарбамоил, ведены для секретома культивируемых клеток человека. производное аминокислоты L-орнитина — Ормустин. В ла-Цель исследования — описание всего многообразия боратории разработки лекарственных форм НИИ ЭДиТО форм РНК в составе микровезикул, экзосом и рибонуклео- РОНЦ им. Н. Н. Блохина создана лекарственная форма «Ор-протеиновых комплексов плазмы крови человека методом мустин, лиофилизат для приготовления раствора для инъ-высокопроизводительного секвенирования. екций 125 мг». Материалы и методы. Экзосомы, микровезикулы и сво- Цель исследования — оценить влияние нового потен-бодные рибонуклеопротеиновые комплексы были получе- циального противоопухолевого препарата из класса нитроны путем последовательного центрифугирования образцов зомочевин Ормустина на рост развившихся перевиваемых плазмы крови здоровых доноров и пациентов с раком лег- опухолей мышей. кого (плоскоклеточный рак легкого и аденокарцинома) Материалы и методы. Противоопухолевое действие Ор-при 16000 и 160000 g. Суммарная РНК полученных суб- мустина изучали на мышах гибридах BDF1 (C57Bl/6*DBA/2) фракций плазмы крови (осадков мембранных частиц и фи- с подкожно привитыми опухолями различного гистогене-нального супернатанта) и форменных элементов крови за: меланомой B16, меланомой B16 сублинии F10 (B16-была выделена с помощью реагента Trizol и проанализиро- F10), меланомой Клаудмана (М3), эпидермоидной карци-вана методом массового параллельного секвенирования номой легкого Льюис (LLC), раком легкого РЛ-67. При на платформе SOLiD 5500xl. Данные обрабатывали с ис- достижении среднего объема подкожного опухолевого узла пользованием программного обеспечения Bowtie/Cufflinks (V,) ® 1000—2000 мм3 (7-12-е сутки опыта) мышам вводи-путем последовательного выравнивания полученных по- ли однократно внутривенно Ормустин в дозах 100-150 мг/кг.
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
