Научная статья на тему 'Ингибирование аутофагии потенцирует цитотоксичность темозоломида in vitro на клеточных линиях метастатической меланомы'

Ингибирование аутофагии потенцирует цитотоксичность темозоломида in vitro на клеточных линиях метастатической меланомы Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

CC BY
99
19
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Рябая О. О., Малышева А. А., Егорова А. В., Хоченкова Ю. А., Степанова Е. В.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.

Текст научной работы на тему «Ингибирование аутофагии потенцирует цитотоксичность темозоломида in vitro на клеточных линиях метастатической меланомы»

96

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

1,1—124,1) и было эффективнее раствора ЦП 5,5 мг/кг (ОР 1,10 (0,37—3,27), р = 0,861). Использование гидрогеля ЦП 8,0 мг/кг характеризовалось тенденцией влияния на риск наступления летального исхода от прогрессирования опухолевого процесса (ОР 4,88 (95 % ДИ 0,86-27,61), p = 0,07331), в то время как использование раствора ЦП 8,0 мг/кг не влияло на данный показатель (ОР 0,71 (0,25-2,05), р = 0,532).

Заключение. Полученные экспериментальные данные свидетельствуют об ингибирующем эффекте исследованных гидрогелевых форм ЦП при их интраперитонеальном применении на рост и прогрессирование асцитной гепатомы Зайде-ла, что является основанием для продолжения исследований.

О.Ю. Рыбалкина12, Е.П. Зуева1, Л.Н. Зибарева2, А.А. Бадулина2, Т. Г. Разина1, Е.Н. Амосова1, К.А. Лопатина1,2, Е.А. Сафонова1, Е.П. Федорова1 ЭКДИСТЕРОИДЫ В ДОПОЛНИТЕЛЬНОЙ ТЕРАПИИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ОПУХОЛЕЙ ФГБНУ«НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга», Томск; 2НИ ТГУ, Томск

Введение. Применение цитостатиков сопровождается высокой токсичностью в отношении активно пролифери-рующих клеточных популяций организма, в частности системы гемопоэза, поэтому актуальным является поиск препаратов, снижающих токсические проявления специфического лечения и/или повышающих его эффективность. Перспективными в качестве средств дополнительной терапии опухолевых заболеваний могут быть экдистероидсодержащие лекарственные растения, ярким предствителем которых является род Silene, обладающие широким спектром фармакологической активности и отсутствием токсичности.

Цель исследования — изучение влияния экстрактов S. colpophylla и S. viridiflora на развитие карциномы легких Льюис (Lewis lung carcinoma, LLC) у мышей и эффективность лечения циклофосфаном (ЦФ), оценка их действия на периферическую кровь на фоне цитостатической терапии.

Материалы и методы. LLC перевивали внутримышечно по 5 х 106 клеток. ЦФ вводили мышам однократно вну-трибрюшинно в дозе 125 мг/кг на 10-е сутки развития опухоли. Экстракты S. colpophylla и S. viridiflora, предоставленные лабораторией фитохимии Сибирского ботанического сада НИ ТГУ, вводили per os в дозах 50 и 100 мг/кг в течение 12 сут. В конце эксперимента (21-е сутки) определяли массу опухоли, вычисляли процент торможения ее роста, частоту метастазирования, подсчитывали количество и площадь метастазов в легких. Показатели периферической крови на 3-и сутки после введения ЦФ определяли с помощью гематологического анализатора «Muchic 18vet» (Cormay, Франция). При обработке результатов использовали непараметрические критерии Вилкоксона, Манна — Уитни и углового преобразования Фишера.

Результаты. Обнаружено, что введение ЦФ оказало достоверное ингибирующее влияние на развитие метастазов. Добавление в схему лечения ЦФ экстракта S. colpophylla в дозах 50 и 100 мг/кг вызвало повышение противоопухолевого эффекта терапии, при этом торможение роста опухоли составило 49 и 46 % соответственно. Аналогичные эффекты наблюдались при сочетанном назначении мышам экстракта S. viridiflora в дозах 50 и 100 мг/кг с ЦФ. При оценке действия

экстрактов на периферическую кровь обнаружено, что цито-статик оказал ингибирующее действие на клетки периферической крови мышей с LLC. Включение экстрактов в схему химиотерапии не изменило ингибирующего влияния ЦФ на клетки миелоидного и эритроидного ростков кроветворения, однако повысило содержание тромбоцитов в 2 раза в периферической крови животных с LLC (p < 0,05).

Заключение. Включение экстрактов S. colpophylla и S. viridiflora в схему химиотерапии приводит к повышению противоопухолевого действия ЦФ, а также препятствует развитию тромбоцитопении в периферической крови животных с LLC.

О. О. Рябая1-2, А.А. Малышева1, А. В. Егорова2, Ю.А. Хоченкова1, Е.В. Степанова1, Д.А. Хоченков1 ИНГИБИРОВАНИЕ АУТОФАГИИ ПОТЕНЦИРУЕТ ЦИТОТОКСИЧНОСТЬ ТЕМОЗОЛОМИДА IN VITRO НА КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЯХ МЕТАСТАТИЧЕСКОЙ МЕЛАНОМЫ

ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; 2ГБОУ ВПО «РНИМУим. Н.И. Пирогова» Минздрава России, Москва

Введение. В последние десятилетия большое внимание уделяется лечению метастатической меланомы (ММ) кожи, но несмотря на достигнутые успехи, прогноз течения болезни остается неблагоприятным (средняя выживаемость пациентов с ММ кожи в мире составляет 8—10 мес). Активно изучаются новые комбинации и пути лечения. Ингибирование процесса аутофагии, позволяющего опухолевым клеткам преодолевать неблагоприятные условия, во многих доклинических исследованиях показало положительный эффект на регрессию опухолей и увеличение продолжительности жизни пациентов.

Цель исследования — изучить влияние ингибиторов аутофагии (хлорокина (CQ) и LY-294002) на цитотоксич-ность темозоломида (TMZ) на клеточных линиях ММ кожи in vitro.

Материалы и методы. Были использованы клеточные линии ММ кожи, полученные от пациентов РОНЦ им. Н.Н. Блохина. Цитотоксичность оценивали МТТ-тестом, иммуноцитохимически, уровень апоптоза определяли методом двойного окрашивания аннексином V/пропидий йодидом с помощью проточной цитометрии. Исследование аутофагии проводили посредством вестерн-блоттинга и трансфекцией микро-рибонуклеиновой кислоты (миРНК) к белку Beclin 1 клеточных линий либо при использовании ингибиторов аутофагии CQ и LY-294002.

Результаты. Для исследования влияния CQ на цито-токсичность TMZ последний был взят в нетоксических концентрациях (100—200 мкМ). МТТ-тестом показано, что CQ усиливает действие TMZ, приводя к увеличению гибели клеток ММ в среднем на 20 %, клетки с мутацией в кодоне v600 гена B-RAF были более чувствительны к комбинации CQ и TMZ. Анализ запуска апоптоза после 24-часовой инкубации с препаратами показал, что уровень апо-птоза не зависел от статуса гена B-RAF: TMZ (500 мкМ) в монорежиме вызывал гибель 3—8 % клеток. Однако под действием CQ возрастало количество апоптотических клеток до 17,5 ± 2,9 % у B-RAFv600 клеток, а у B-RAF"1 их уро-

№1 / том 15 / 2016

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 97

вень практически не менялся (5,2 ± 3,0 %). Также комби- следовательностей с последовательностями: митохондри-нация CQ и TMZ увеличивала количество белка LC3B альных транскриптов; транскрибируемых повторов чело-(маркера уровня аутофагосом) по сравнению с контролем века; РНК человека из базы данных human RefSeq; генома и препаратами в монорежиме. Ингибирование аутофагии человека версии hg19. Различия в представленности транс-за счет миРНК снижало токсическое действие на клетки криптов в составе циркулирующих комплексов плазмы ММ самого CQ. Аналогичные данные были получены при крови оценивали с помощью пакета программ Cuffdiff. добавлении ингибитора образования аутофагосом LY-294002. Результаты. Для каждой комплементарной ДНК би-Стоит отметить, что при коинкубации клеток с 2 ингиби- блиотеки было получено ~ 14 млн экспериментальных по-торами одновременно отмечали увеличение цитотоксич- следовательностей. Показано, что для мембранных частиц, ности TMZ: выживаемость клеток ММ уменьшалась с 80 осаждаемых при 160000 g, в сравнении с остальными суб-до 30 %. Таким образом, можно предположить, что ауто- фракциями плазмы крови и клетками крови характерно фагия предохраняет клетки от темозоломидиндуцирован- обогащение фрагментами мРНК (такими как KRTAP10—5, ной цитотоксичности. TSHB, IK, PMP22, HOXB8, OR9Q2, UCHL3) и некодиру-Заключение. Полученные результаты демонстрируют, ющих РНК (RNU11, микроРНК). Для частиц, осаждаемых что CQ и LY-294002 ингибируют аутофагию в клетках ММ при 16000 g, показано повышенное содержание определен-и способствуют увеличению их химиочувствительности ного набора форм микроРНК, малых ядрышковых РНК к TMZ. Данные комбинации можно считать перспектив- и vault РНК. ными, требующими дальнейшего изучения, в том числе Заключение. В совокупности с данными литературы в опытах in vivo. полученные результаты указывают на то, что исследован-Работа поддержана грантом РНФ № 14-35-00107от 17.09.2014. ные типы циркулирующих комплексов плазмы крови человека отличаются не только определенным набором A.В. Савельева1, Е.В. Кулигина1, Е.Д. Чикова2, микроРНК, но и других классов РНК, представленных B. В. Козлов3, В.А. Рихтер1, Д. В. Семенов1 в клетке, что может быть использовано для разработки ТРАНСКРИПТОМ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ новых подходов к ранней диагностике и терапии заболе-КОМПЛЕКСОВ ПЛАЗМЫ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА ваний человека. ФГБУН ИХБФМ СО РАН, Новосибирск; Работа поддержана грантом РФФИ № 16-04-01457. 2ЦНМТ, Новосибирск; 3ГБУЗНСОНОКОД, Новосибирск Н.С. Сапрыкина1, М.А. Барышникова1, В.П. Краснов2, Введение. Большинство клеток организма человека вы- В.М. Бухман1, А.Ю. Барышников1 деляют 3 основных типа внеклеточных циркулирующих ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ ОРМУСТИНА комплексов: микровезикулы, экзосомы и свободные рибо- НА РАЗВИВШИХСЯ ПЕРЕВИВАЕМЫХ ОПУХОЛЯХ нуклеопротеиновые комплексы, каждый из которых несет МЫШЕЙ характерный набор РНК, отличный от продуцирующих 1ФГБУ«РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; их клеток. РНК циркулирующих комплексов, высвободив- 2 ФГБУН «ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН», шиеся после интернализации, способны оказывать регуля- Екатеринобург торное воздействие на клетки-реципиенты, что указывает Введение. Значительная доля онкологических пациен-на их участие в процессах дистантного межклеточного тов — больные с распространенными формами опухолевого взаимодействия и может быть использовано для оценки процесса, поэтому актуально расширение арсенала эффек-физиологического состояния организма. Б0льшая часть тивных при таких стадиях заболевания средств химиотера-исследований транскриптома циркулирующих комплексов пии. В ИОС им. И.Я. Постовского (УрО РАН, Екатеринбург) посвящены изучению микроРНК в составе экзосом и про- синтезировано новое соединение алкилнитрозокарбамоил, ведены для секретома культивируемых клеток человека. производное аминокислоты L-орнитина — Ормустин. В ла-Цель исследования — описание всего многообразия боратории разработки лекарственных форм НИИ ЭДиТО форм РНК в составе микровезикул, экзосом и рибонуклео- РОНЦ им. Н. Н. Блохина создана лекарственная форма «Ор-протеиновых комплексов плазмы крови человека методом мустин, лиофилизат для приготовления раствора для инъ-высокопроизводительного секвенирования. екций 125 мг». Материалы и методы. Экзосомы, микровезикулы и сво- Цель исследования — оценить влияние нового потен-бодные рибонуклеопротеиновые комплексы были получе- циального противоопухолевого препарата из класса нитроны путем последовательного центрифугирования образцов зомочевин Ормустина на рост развившихся перевиваемых плазмы крови здоровых доноров и пациентов с раком лег- опухолей мышей. кого (плоскоклеточный рак легкого и аденокарцинома) Материалы и методы. Противоопухолевое действие Ор-при 16000 и 160000 g. Суммарная РНК полученных суб- мустина изучали на мышах гибридах BDF1 (C57Bl/6*DBA/2) фракций плазмы крови (осадков мембранных частиц и фи- с подкожно привитыми опухолями различного гистогене-нального супернатанта) и форменных элементов крови за: меланомой B16, меланомой B16 сублинии F10 (B16-была выделена с помощью реагента Trizol и проанализиро- F10), меланомой Клаудмана (М3), эпидермоидной карци-вана методом массового параллельного секвенирования номой легкого Льюис (LLC), раком легкого РЛ-67. При на платформе SOLiD 5500xl. Данные обрабатывали с ис- достижении среднего объема подкожного опухолевого узла пользованием программного обеспечения Bowtie/Cufflinks (V,) ® 1000—2000 мм3 (7-12-е сутки опыта) мышам вводи-путем последовательного выравнивания полученных по- ли однократно внутривенно Ормустин в дозах 100-150 мг/кг.

№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

i Надоели баннеры? Вы всегда можете отключить рекламу.