Транскриптом циркулирующих комплексов плазмы крови человека Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»



МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 97

вень практически не менялся (5,2 ± 3,0 %). Также комби- следовательностей с последовательностями: митохондри-нация CQ и TMZ увеличивала количество белка LC3B альных транскриптов; транскрибируемых повторов чело-(маркера уровня аутофагосом) по сравнению с контролем века; РНК человека из базы данных human RefSeq; генома и препаратами в монорежиме. Ингибирование аутофагии человека версии hg19. Различия в представленности транс-за счет миРНК снижало токсическое действие на клетки криптов в составе циркулирующих комплексов плазмы ММ самого CQ. Аналогичные данные были получены при крови оценивали с помощью пакета программ Cuffdiff. добавлении ингибитора образования аутофагосом LY-294002. Результаты. Для каждой комплементарной ДНК би-Стоит отметить, что при коинкубации клеток с 2 ингиби- блиотеки было получено ~ 14 млн экспериментальных по-торами одновременно отмечали увеличение цитотоксич- следовательностей. Показано, что для мембранных частиц, ности TMZ: выживаемость клеток ММ уменьшалась с 80 осаждаемых при 160000 g, в сравнении с остальными суб-до 30 %. Таким образом, можно предположить, что ауто- фракциями плазмы крови и клетками крови характерно фагия предохраняет клетки от темозоломидиндуцирован- обогащение фрагментами мРНК (такими как KRTAP10—5, ной цитотоксичности. TSHB, IK, PMP22, HOXB8, OR9Q2, UCHL3) и некодиру-Заключение. Полученные результаты демонстрируют, ющих РНК (RNU11, микроРНК). Для частиц, осаждаемых что CQ и LY-294002 ингибируют аутофагию в клетках ММ при 16000 g, показано повышенное содержание определен-и способствуют увеличению их химиочувствительности ного набора форм микроРНК, малых ядрышковых РНК к TMZ. Данные комбинации можно считать перспектив- и vault РНК. ными, требующими дальнейшего изучения, в том числе Заключение. В совокупности с данными литературы в опытах in vivo. полученные результаты указывают на то, что исследован-Работа поддержана грантом РНФ № 14-35-00107от 17.09.2014. ные типы циркулирующих комплексов плазмы крови человека отличаются не только определенным набором A.В. Савельева1, Е.В. Кулигина1, Е.Д. Чикова2, микроРНК, но и других классов РНК, представленных B. В. Козлов3, В.А. Рихтер1, Д. В. Семенов1 в клетке, что может быть использовано для разработки ТРАНСКРИПТОМ ЦИРКУЛИРУЮЩИХ новых подходов к ранней диагностике и терапии заболе-КОМПЛЕКСОВ ПЛАЗМЫ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА ваний человека. ФГБУН ИХБФМ СО РАН, Новосибирск; Работа поддержана грантом РФФИ № 16-04-01457. 2ЦНМТ, Новосибирск; 3ГБУЗНСОНОКОД, Новосибирск Н.С. Сапрыкина1, М.А. Барышникова1, В.П. Краснов2, Введение. Большинство клеток организма человека вы- В.М. Бухман1, А.Ю. Барышников1 деляют 3 основных типа внеклеточных циркулирующих ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ ОРМУСТИНА комплексов: микровезикулы, экзосомы и свободные рибо- НА РАЗВИВШИХСЯ ПЕРЕВИВАЕМЫХ ОПУХОЛЯХ нуклеопротеиновые комплексы, каждый из которых несет МЫШЕЙ характерный набор РНК, отличный от продуцирующих 1ФГБУ«РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; их клеток. РНК циркулирующих комплексов, высвободив- 2 ФГБУН «ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН», шиеся после интернализации, способны оказывать регуля- Екатеринобург торное воздействие на клетки-реципиенты, что указывает Введение. Значительная доля онкологических пациен-на их участие в процессах дистантного межклеточного тов — больные с распространенными формами опухолевого взаимодействия и может быть использовано для оценки процесса, поэтому актуально расширение арсенала эффек-физиологического состояния организма. Б0льшая часть тивных при таких стадиях заболевания средств химиотера-исследований транскриптома циркулирующих комплексов пии. В ИОС им. И.Я. Постовского (УрО РАН, Екатеринбург) посвящены изучению микроРНК в составе экзосом и про- синтезировано новое соединение алкилнитрозокарбамоил, ведены для секретома культивируемых клеток человека. производное аминокислоты L-орнитина — Ормустин. В ла-Цель исследования — описание всего многообразия боратории разработки лекарственных форм НИИ ЭДиТО форм РНК в составе микровезикул, экзосом и рибонуклео- РОНЦ им. Н. Н. Блохина создана лекарственная форма «Ор-протеиновых комплексов плазмы крови человека методом мустин, лиофилизат для приготовления раствора для инъ-высокопроизводительного секвенирования. екций 125 мг». Материалы и методы. Экзосомы, микровезикулы и сво- Цель исследования — оценить влияние нового потен-бодные рибонуклеопротеиновые комплексы были получе- циального противоопухолевого препарата из класса нитроны путем последовательного центрифугирования образцов зомочевин Ормустина на рост развившихся перевиваемых плазмы крови здоровых доноров и пациентов с раком лег- опухолей мышей. кого (плоскоклеточный рак легкого и аденокарцинома) Материалы и методы. Противоопухолевое действие Ор-при 16000 и 160000 g. Суммарная РНК полученных суб- мустина изучали на мышах гибридах BDF1 (C57Bl/6*DBA/2) фракций плазмы крови (осадков мембранных частиц и фи- с подкожно привитыми опухолями различного гистогене-нального супернатанта) и форменных элементов крови за: меланомой B16, меланомой B16 сублинии F10 (B16-была выделена с помощью реагента Trizol и проанализиро- F10), меланомой Клаудмана (М3), эпидермоидной карци-вана методом массового параллельного секвенирования номой легкого Льюис (LLC), раком легкого РЛ-67. При на платформе SOLiD 5500xl. Данные обрабатывали с ис- достижении среднего объема подкожного опухолевого узла пользованием программного обеспечения Bowtie/Cufflinks (V,) ® 1000—2000 мм3 (7-12-е сутки опыта) мышам вводи-путем последовательного выравнивания полученных по- ли однократно внутривенно Ормустин в дозах 100-150 мг/кг.

№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ