CC BY
24
(Wundt, 1950)]. Исходя из этого, были предложены такие концентрации ТТХ, которые в отношении некоторых видов бактерий не обладали токсичностью. Это позволило Варди (Vardi, 1955) получить удачные результаты при определении общего числа бактерий на пищевых продуктах; однако приемлемой методики он не предложил.
Данные литературы навели нас на мысль использовать ТТХ для окрашивания колоний, выращенных на мембранных ультрафильтрах, для определения общего числа бактерий в воде. Результаты исследований оказались очень хорошими; это позволило нам рекомендовать применение ТТХ для подсчета общего числа бактерий в воде по следующей методике.
После выращивания колоний на мембранных ультрафильтрах (в качестве питательной среды применяли стандартный мясо-пептонный агар) их осторожно снимают пинцетом с поверхности агара и перекладывают на чашки Петри с вложенной на их дно по размеру чашки фильтровальной бумагой, смоченной 1% водным раствором ТТХ. Необходимо следить, чтобы ультрафильтры плотно прилегали к фильтровальной бумаге. Это обеспечивает равномерное окрашивание колоний по всей площади мембранного ультрафильтра. Окрашивание колоний начинается через несколько секунд и постепенно нарастает. На время окрашивания чашки ставят в термостат на 90 минут при такой же температуре, при которой происходило выращивание колоний. После этого обычным способом с помощью лупы производят подсчет колоний. Колонии имеют ярко-красный цвет на белом фоне мембранного ультрафильтра, причем легко видны ярко-красные точки даже мельчайших колоний, которые при других методах могли быть не замечены. Окрашиваются только колонии, что облегчает их учет и повышает достоверность результатов подсчета.
После подсчета ультрафильтры могут быть высушены и сохранены. Окраска колоний прочна и сохраняется долго, что имеет особенно большое значение в научных исследованиях, когда результат работы необходимо сохранить как документ. Удобство метода может быть оценено и в экспедиционных условиях.
Серии опытов с ТТХ были поставлены при 37° (24 часа) и 20° (48 часов). Результаты получились одинаково хорошими. Описываемый метод можно применить для определения общего числа бактерий не только в водопроводной воде, но и в воде открытых водоемов; нужны только соответствующие разведения ТТХ.
Наши исследования были поставлены с 0,5 и 1% раствором ТТХ. Лучшие результаты — интенсивность и быстрота окрашивания — получены с 1% раствором.
ЛИТЕРАТУРА
Vardi Р., Elelmez. Ip., 1955, т. 9, стр. 380. — W u n d t W., Dtsch. med. Wschr., J950, Bd. 75, S. 1471.
Поступила 23/1 II 1962 r.
ft # -fr
0
ПРИМЕНЕНИЕ СРЕДЫ РДА ПРИ ИССЛЕДОВАНИИ ОБЪЕКТОВ
МЕТОДОМ СМЫВОВ
I •
Врач-бактериолог В. В. Воробьев (Саратов)
В системе профилактических мероприятий при кишечных инфекциях одним из важных звеньев следует считать систематический лабораторный контроль за санитарным состоянием объектов питания и проведение дезинфекционных мероприятий.
4 Гигиена и санитария, Хг И 49
о £
< et
а. s
о> x z о X
2
о
s
X
о а 2
S
о
О
О Н 4>
S
2
с*
CL
0
•Я
<U
1
со о
н *
г>
«а
о о
•X
S г
я со о
Ei
4 о о
5
X
S *
sj
о у
о ^
0 —
а.
а>
н *
СЗ VO
1
о
X CL
вв н
X X св о
2
н ее н
J9 >>
со о а.
ю
о
MOtfOXj • ВН ХГСНЯ1ГЭ1 - ИЖ01Г ОН %
HWBXBiqirXead ИК1ЧНЧ1ГЭХИЖ01Г -OU Э ХИН €И
aoe
-итгвне олээя
moV
•ОХВН Х1ЯНЯ1ГЭХ -ИЖ01Г011 %
HWBXBiqirÄead ИИ1ЧНЯ1ГЭ±ИЖ01Г
-ои э хин ей
eoemr внв олээа
MOtf
ОХВН Х1ЯНЯ1ГЭ1 -ИЖСИГОЦ %
о ю о
ИИЕ1В1
•qirXead им1ян
-Я1Г31ИЖ01Г
-oirou э хин ей
Я08И1Г -ВНВ 0J909
§
Ol
HOtf
-ОХВН Х1ЧНЧ1ГЭ1 -ИЖ01Г0Ц %
HWBJLBxsirXead ИМ1ЯНЧ1ГЭ1ИЖ
-oirou э хин ей
aoEHir -внв ojaoa
MOtfOX -ВН Х1ЯНЯ1ГЭХ
-нжoirou %
HWBJ.BJ.
Ч1гЛеэс1 hwrh
-Ч1ГЭ1НЖ01Г
•ои э хин ей
ЯОСИ1Г
внв сиээа
н X
л О
О
LO Ю
СО CO
СМ СМ CM
ОО m CO
.—> .—i CO
г- Tf
CO ^
СО CD a>
CD h- CO
ОО О 00
1С СМ OO
rr
CM ^ CM
CM CM CM
Ю о Ю
CO — •rr
rx. —< 00
о —
—
CM rr
CO co
CM CM
LC lO Ю
CD О Ю
CD О CD
CD
00 — <J5
CD CD CM
CO CD О
Tf Ю
— CD LC
ОО ТГ t^
CM CM CM
О rf CO
CM о CO
CD CO
v—Л —'
<T> rf CO
(Ji CO CO
r^ CM о
ю —
-t Tf
CP
00 — CM
CM CO
00 CM о
00 о о
CD CM ОС
CD О CD
CM TT CD
rr CD О
CM CO
• О
<V
и
• • CD
• cc •
• сz
cz х SS
>> c_
8 ё
С
tr °
сz с
— —»
О 5
^ 2 о к 0
t- а
v x
x *
>
CL U
cz VC
fc О
»—• <L> X
£ ^
Sa
Обычная трехэтапная методика, разработанная Институтом питания АМН СССР и утвержденная 21/1V 1956 г. заместителем главного санитарного инспектора СССР, осложняет работу практических бактериологических лабораторий своей громоздкостью, а выдача окончательного отчета через трое суток снижает оперативность работы санитарно-эпидемиологической службы.
В своей повседневной работе (1957— i960) по санитарно-бактериологическому исследованию объектов внешней среды методом смывов мы применили двухэтап-ную методику с применением розоловой дифференциальной среды (РДА), предложенной М. Г. Киченко и принятой ГОСТ 5216-50 1959 г. для определения коли-тит ра воды.
Перед широким внедрением двул-этапной методики для производства смывов мы проводили сравнительную оценку этих двух методик с 32 штаммами бактерий кишечной палочки (Вас. coli cammu-nae—12; Вас. coli citrovorum—13; Вас. coli aerogenes — 7).
Сущность работы заключалась в следующем: из 18—20-часовой культуры по оптическому стандарту приготовляли взвесь 1 млрд. микробных клеток в стерильной водопроводной воде. Из исходной пробирки приготавливали разведения от 1 : 10 до 10~10, затем из каждого разведения производили посев по 0,1 мл культуры в пробирки с 5 мл разведенной среды Эйкмана 1 : 10 (pH 7,4—7,6).
Через 24 часа после термостатной выдержки при 43° из среды Эйкмана делали высев на чашки со средой Эндо и пробирки с РДА, которые помещали в термостат при 37°. После 20-часового культивирования учитывали результаты роста на средах Эндо и РДА. Из 320 посевов во всех разведениях мы получили рост и на среде Эндо, и на РДА.
На чашках Петри со средой Эндо только в 225 случаях (70,3%) получен рост колоний кишечной палочки с типичным металлическим блеском. В 95 случаях (29,7%) колонии не имели типичного роста. Следовательно, в 29,7% случаев мы не могли дать окончательного ответа без вторичной бродильной пробы. На среде РДА рост бактерий группы кишечной палочки был типичным во всех случаях.
Полученные данные позволили нам применить при санитарно-бактериоло-
гическом исследовании объектов внешней среды следующую двух-этапную методику. В малых чашках Петри стерилизовали ватные или марлевые шарики. Перед производством смыва в чашку Петри со стерильными шариками заливали из флакона стерильный физиологический раствор. Если смыв производился с обработанной хлорными дезинфицирующими препаратами поверхности, вместо физиологического раствора мы применяли для смачивания шариков 1—5% стерильный раствор гипосульфита натрия.
Профломбированным пинцетом из чашки Петри брали увлажненный ватный шарик и производили смыв, после чего шарик опускали в пробирку с 5 мл разведенной среды Эйкмана; пробирки помещали в термостат при 43°. Через 18—20 часов из всех пробирок большой петлей производили пересев на среду РДА в пробирках. После 18—20 часов термостатной выдержки при 37° учитывали результаты посевов на среде РДА.
Положительным мы считали исследование, при котором на поверхности РДА вырастали изолированные желтые колонии или в виде желтого штриха. Косячок и столбик РДА окрашивали в желтый цвет с разрывами среды. При выделении паракишечной палочки на скошенной поверхности РДА вырастали серые колонии, а цвет среды в скошенной части не изменялся или приобретал малиновый оттенок. В столбике РДА — среда желтого цвета с разрывами, в конденсационной воде отмечались пузырьки газа. Для подтверждения положительного ответа производили бактериоскопию с окраской препаратов по Граму.
Результаты санитарно-бактериологических исследований объектов внешней среды методом смывов с применением РДА по годам представлены в таблице.
Выводы
1. Двухэтапная методика санитарно-бактериологического исследования объектов внешней среды дает не менее точные результаты, чем трехэтапная, но она более проста и удобна.
2. При санитарно-бактериологическом исследовании объектов внешней среды методом смывов с применением РДА производство анализа сокращается на сутки, экономятся среды и посуда.
3. С применением РДА, подавляющего рост грамположительной сапрофитной флоры, среду Кесслера можно заменить разведенной в соотношении 1:10 средой Эйкмана.
4. Двухэтапная методика с применением РДА может быть рекомендована для работы практических бактериологических лабораторий при санитарно-бактериологических обследованиях объектов внешней среды.
Поступила 5/1II 1962 г
Ъ iz Ъ
ь
СТАТИСТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ОЦЕНКИ РЕЗУЛЬТАТОВ САНИТАРНО ГИГИЕНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Кандидат медицинских наук Г. Н. Красовский, врач Л. Я. Гусева
Из кафедры коммунальной гигиены I Московского ордена Ленина медицинского
института имени И. М. Сеченова
В любом санитарно-гигиеническом исследовании возникает необходимость оценки действия какого-либо фактора внешней среды на организм. Объективно дать эту оценку позволяют методы математической статистики.
4*
51
