CC BY
16
растворов и стелени окрашенности фильтра: при 0,1%> концентрации растворов для этого требуется от 40 минут до 5 часов, при 0,5% концентрации— от 7 минут до 3 часов.
3'. Обработать фильтр смесью хлорной 1 извести и кислого сернокислого натрия, тоже в равном процентном их содержании, в течение от 30 минут (1%) до 3—4 часов (0,5—0,1%).
Обработку фильтров не следует удлинять без нужды.
Обесцвеченные фильтры (следы от колоний бактерий коли не исчезают полностью) надо вынуть, промыть в нескольких водах или же под краном в струе воды в течение дня и кипятить 5—10 минут. Сохранять обесцвеченные фильтры можно сухими. Одну и ту же азотную кислоту можно употреблять много раз. Растворы с хлорной известью следует приготовлять перед употреблением. \
При таком способе обработки фильтров после каждого их употребления ими можно пользоваться до 9—10 раз.
Ф и л ьт ра п п ара т проф. Разумюва состоит из 3 частей: 1) «воронки»—любой стеклянной баночки с отрезанным дном; 2) каучуковой пробки с отверстием сбоку, куда вставляется Г-образная трубка для отсасывания воздуха, и с другим отверстием в середине пробки для сетки и1 фильтра; 3) любой баночки, в которую вставляется эта пробка. Воронка удерживается на пробирке при помощи двух крючков; одним концом крючки забрасываются на воронку, а другим закрепляются вокруг горлышка на нижней баночке.
Е. В. ДИАНОВА и А. А. ВОРОШИЛОВА * »
Жидкие и полужидкие среды с наполнителем (замена агар-агара) для бактериологических работ
Из Центрального санитарного института им. Эрисмана (Москва)
Применение агар-агара для изготовления твердых питательных сред при бактериологических работах связано в большинстве случаев не с питательными свойствами его, а обусловлено лишь его способностью образовывать студень и тем- придавать плотность субстрату. В связи с недостатком' в настоящее время агар-агара делаются попытки заменить его. В Академии коммунального хозяйства разработан метод приготовления твердых питательных сред с кремнекислым гелем, но применение этого метода в широком масштабе затруднено, так как изготовление кремнекислого геля требует соляной кислоты.
Для получения твердых питательных сред без агар-агара или с малым его содержанием мы предлагаем употреблять комбинированные среды: жидкую или полужидкую среду (с 0,3—0,7% агар-агара) в сочетании с каким-нибудь наполнителем!. Наполнитель должен быть нейтральным веществом, обладать в достаточной - степени капиллярными свойствами и сообщать среде твердость. Из наиболее легко доступных и не требующих сложной обработки материалов мы исследовали применение кварцевого песка, измельченного стекла, мелкопористой стеклянной пластинки (как в фильтре Гуга), пористого кирпича, оберточной бумаги, древесных опилок, марли и асбеста. Наиболее подходящими наполнителями оказались кварцевый песок, измельченное стекло, мелкопористая стеклянная пластинка, марля и бумага.
Среды, приготовленные по этому методу, могут быть различным«: наполнитель пропитывается какой-нибудь одной средой, жидкой или полужидкой, или наполнитель пропитывается жидкой или полужидкой (0,1°/о агара) средой, а сверху наносится очень тонкий слой с большим или меньшим содержанием агара, в зависимости от необходимости создания поверхности любой плотности.
Метод выращивания бактерий на жидких, полужидких комбинированных средах можно рекомендовать для различны* бактериологических работ: для всех работ с мембранными ультрафильтрами (при учете общего количества бактерий, бактерий кишечной группы и др.), для определения общего количества бактерий методом разливок, для получения отдельных колоний, для отвивки чистых культур вместо косого агара, Для массового получения бактерий при производстве вакцин, нитрагина, азотогена и др.
Помимо большой экономии агар-агара, этот метод может иметь и принципиальные преимущества по сравнению с методом! применения обычных твердых сред. В жидких и полужидких средах явления диффузии протекают быстрее, чем в средах 'плотных, благодаря чему обеспечивается более быстрая подача питательных веществ к растущей колонии и более легкий отток продуктов жизнедеятельности размножающихся бактерий. Следовательно, на этих средах устраняется два основных фактора, ограничивающих скорость развития всякого организма. Колонии бактерий 'на данных средах появляются в таком же количестве, как и на твердых, но быстрее, и по размеру они в 3—4 раза превосходят колонии на обычных твердых средах.
Приводим небольшую таблицу, показывающую сравнительные размеры в миллиметрах колоний кишечной палочки, выросших через 16 часов на мембранных фильтрах на твердой среде и на средах жидких и полужидких с различными наполнителями. •
Обычная среда Эндо с. 3°,'0 агара Жидкая среда Эндо Среда Эндо с 0,77о агара Бумага, пропитанная жидкой средой Эндо: сверху — тонкий слой с деды Эндо с 0,7°/э агара
! + песок 4- нзмель- ченное стекло -1-бумага + марля 4-песок + . измельченное стекло
0,5—1^0 2,0—3,0—4,0 2,0—3,0 2,0—3,0 2,0 а. 2,0-3,0 2,0-3,0 3,0
Предлагаемой метод выращивания бактерий на «твердых комбинированных средах» может оказать услуги при изучении физиологии бактерий, так как он позволяет очень легко и быстро, совершенно не нарушая колонии, производить смену питательной среды, т. е. вести выращивание колонии как бы в проточной культуре. Это дает возможность учитывать продукты обмена бактерий в колонии, регулировать и видоизменять питательный режим культуры на различных стадиях ее роста.
Предварительная обработка наполнителей
Песок, впервые поступающий в работу, просеивают для отделения камушков и посторонних примесей, прокаливают на сковородке на горелке для сжигания органических примесей, промывают водопроводной водой (взбалтыванием или в струе) и просушивают на воздухе, в сушильном шкафу или на сковородке, подогреваемой горелкой. При по-
вторном использовании песка можно ограничиться только одним промыванием его в проточной воде, без прокаливания. Чистый сухой песок насыпают в чашки Петри по 20—30 г (в зависимости от диаметра чашки и необходимой толщины слоя питательной среды). Для жидких сред лучше брать больше песка, для агаровых же достаточна шведка в 20—25 г. Чтобы избежать взвешивания, можно пользоваться объем>-ной мерой (стаканчик, мерный цилиндр).
Измельченное стекло можно получить из любых осколков лабораторной посуды. Осколки измельчают в фарфоровой ступке приблизительно до 1 —1,5 мм. Стеклянную пыль отмывают, а остальную массу промывают кипячением в воде. В остальном со стеклом поступают так же, как с .песком*.
Пористые стеклянные пластинки осторожно прокаливают и промывают кипячением! в нескольких водах, подсушивают и помещают в чашки Петри.
Бумагу и марлю нарезают кругами по размеру чашек и складывают в пачки по 6—10 штук. Верхний листок делается большего размера, чтобы у него загнулись края при помещении его в чашку Петри '<и образовался бортик. Пачки сшивают по краю (впрочем, можно обойтись и без этого), килятят в слабом растворе соды, промывают водой и кипячением в воде, отжимают от избытка ее, а затеки плотно укладывают в чашки Петри.
Приготовление питательной среды- ,
Чашки Петри с помещенными в них наполнителями стерилизуют в печи Пастера, после чего наполнители пропитывают стерильной жидкой или полужидкой средой. Во избежание запотевания крышек у чашек Петри можно на внутреннюю сторону крышки поместить кусочек фильтровальной бумаги или в дальнейшем!, уже при вынимании чашек из термостата, протирать запотевшие крышки стерильной ваткой.
Перед пропитыванием песка и измельченного стекла питательной средой их следует рассыпать ровным слоем по дну чашки. Для получения лучшей поверхности можно песок и стекло утрамбовать каким-либо плоским' стеклянным! или металлическим стерильным предметом.
Питательные среды готовят по общепринятой прописи, только вовсе не добавляют агар-агара или же берут слабую концентрацию его (0,1— 0,5—0.7%).
Питательную среду надо вносить осторожно, чтобы не нарушить гладкую поверхность песчаной или стеклянной подстилки (можно вносить среду слабой струйкой из пипетки, прислоненной к стенке чашки).
Жидкую питательную среду вносят в таком количестве, чтобы весь наполнитель был насыщен, но чтобы избытка влати на его поверх-, ности не было. Для песка и измельченного стекла достаточно вылить 30—35% жидкой питательной среды от навески стекла и песка, для бумаги — приблизительно 1 см3 на каждый листок, для ма[рли — около 2 см" в каждый слой.
Полужидкая среда с 0,5—0,7% содержанием^ агар-агара вносится с таким расчетом, чтобы не только был пропитан весь наполнитель, но и сверху находился слой в 1,5 мм среды по всей поверхности чашки (в чашках Петри — приблизительно 50—55% среды от навески песка и стекла).
Гетерогенные среды можно готовить из сочетания жидкой среды с-твердой (с 2—3% агара) или из полужидкой (с 0,1% агара) с твердой. Наполнитель пропитывают жидкой или полужидкой средой, а сверху наливают 4—5 см*4 очень горячей среды с 2—3% агара. При
работе с бумагой и стеклянными пластинками лучше пользоваться первой комбинацией сред, при работе с песком и дробленым стеклом предпочтительнее применять вторую комбинацию.
Применение метода
Метод жидких, полужидких и гетерогенных культур с наполнителем можно применять, как мы уже указывали, при самых разнообразных бактериологических работах производственного и исследовательского характеру. Укажем на некоторые из таких возможностей.
Определение общего количества бактерий на мембранных фильтрах производится с помощью жидкой или полужидкой среды с любым наполнителем. На поверхность пропитанного питательной средой наполнителя помещают мембранный фильтр с отфильтрованными на нем бактериями. Фильтр доджей соприкасаться всей своей поверхностью со средой, чтобы между ними не было пузырьков воздуха. Чашки помещают в термостат неперевернутыми.
Определение общего количества бактерий методом разливок производится на бумажной подстилке (лучше темного цвета), пропитанной жидкой питательной средой. На .поверхность бумаги (лучше подогретой) выливают 4—5 смз 0,5% мяео-пептоиного агар-агара и испытуемой жидкости и смесь перемешивают, как обычно при посевах.
Учет кишечной палочки и других бактерий кишечной группы на мембранных фильтрах проводится на тех же специфических питательных средах, которые употребляются в обычной практике, но только совсем без агара или с незначительным содержанием его. В качестве наполнителя можно использовать песок, стекло, стеклянную пористую пластинку. На бумажной подстилке не всегда получаются характерные колонии, поэтому для диференциации колонии мы ее не рекомендуем.
Получение отдельных колоний бактерий путем распределения исследуемого материала шпаделем по поверхности среды легко осуществляется на бумажной подстилке, пропитанной жидкой питательной средой. На поверхность бумаги наносится тонкий слой (4—5 см3) твердой питательной среды (с 2—3% агара).
Отвивку бактерий очень целесообразно делать не на косом агаре, а на полосках бумаги, помещешшх в пробирки и смоченных питательной средой. Бумагу складывают в 10 слоев полосками приблизительно в 1 см шириной и 8—9 см длиной, в зависимости от размеров пробирки. Один конец закругляют и опускают полоски этим концом до самого дна пробирки. Питательную среду (жидкую!) вносят в количестве 1,5—2,5 см!3. Смоченную бумагу прижимают стеклянной палочкой к стенке пробирки, чтобы уменьшить испаряющуюся поверхность. Смонтированные таким образом пробирки стерилизуют. Посев делают штрихом по бумаге. Отвитые культуры дают хороший рост и очень хорошо сохраняются в течение длительного срока. Испаряющуюся жидкость и потребленные питательные вещества всегда можно легко пополнить соответствующим количеством воды и необходимых органогенов. Продукты жизнедеятельности бактерий можно вымыть. При повреждении пробирки отвитую культуру можно целиком перенести в другую пробирку.
Приготовление вакцин, нитрагина, азотогена и другие работы, связанные с большим потреблением агар-агара, вполне южно проводить на полужидких средах в сочетании с таким цементирующим веществом, как песок. Для приготовления вакцин наполнитель вносится в таком количестве, чтобы покрыть все дно колбы слоем в 0,5 см.
Питательную среду вносят ив такого расчета: 30% от навески наполнителя (для его пропитывания) плюс объем, который определяется произведением площади опытного сосуда на высоту слоя в 2—2,5 мм. В лиуровые матрацные колбы достаточно внести 150 г песка и 85—90 см3 питательной среды с 0,7% агар-агара (Архангельский).
Песок и питательную среду добавляют порознь в матрацные колбы и стерилизуют вместе. После стерилизации среду скашивают. При легком потряхивании и покачивании колбы наполнитель равномерно распределяется по дну ее. Колбу помещают на горизонтальную поверхность, чтобы среда не стекала в одно место,' а покрывала ровным слоем всю поверхность наполнителя.
Среда получается пробная, рост—очень хороший. При смыве культуры среда не разрушается.
Проф. С. М. ДРАЧЕВ
К методике более быстрого и доступного химического анализа воды в полевых
условиях
Из Центрального санитарного института им. Эрисмана (Москва)
Санитарный химический анализ воды в полевых условиях должен давать возможность ее гигиенической оценки на основе приближенных количественных определений солевого состава, физических свойств и химических показателей загрязнения воды.
Срок выполнения анализа в полевых условиях обычно ограничен, а сам анализ должен производиться путем простых операций, причем весьма желателен возможно меньший расход реактивов. Указанным требованиям в значительной мере удовлетворяют приближенные методы ряда колориметрических определений, разработанные в гидрохимической лаборатории Института им. Эрисмана1 и принятые ныне как стандартные.
Дальнейшая разработка методики ведется в настоящее время в направлении замены объемных методов колориметрическими. В этом отношении в полевых условиях должны найти применение колориметрический метод определения жесткости воды с тропеолином> 002 и метод приближенного колориметрического определения окисляемости3.
В настоящей статье' излагается методика приближенного определения нитратов с сульфофеноловым реактивом, что имеет преимущество по сравнению с ранее описанными 'способами. Определение нитритов производится по таблице для приближенных их определений без нагревания, что более удобно в полевых условиях.
Разработанная методика колориметрического определения активного хлора также пригодна в походной обстановке; она не требует титрования и «¡ри отсутствии ортотолидина может найти применение и в лабораториях.
Для определения в полевых условиях щелочности й хлоридов, при котором' приходится прибегать к титрованию, можно титровать малые объемы воды (1—2 мл) разведенными титрованными растворами, что дает значительную экономию реактивов и позволяет пользоваться ком-
I С. В. Бруеввч, Лабораторная практика, № 3, 1927. .
г С. М. Драче в, Гигиена и здоровье, Л» 1—2, 1942.
II С. М. Драч ев и И. И. С ос у нова, Гигиена и здоровье, № 6, 1941.
