CC BY
5
жидкой среды может привести к ошибкам за счет развития в довольно высоком проценте сарцин и споровых аэробов, которые без последующего подтверждения на плотных средах могут симулировать рост энтерококков.
ЛИТЕРАТУРА
Калина Г. П. Ж- микробиол., 1965, № 10, с. 95. — Калина Г. П. Гиг. и сан., 1965, № 10, с. 68. — К а л и н а Г. П. Там же, 1966, № 3, с. 59. — Н е i n г i с h Н.^ Knaack J., Kunert К. et al. Z. ges. Hyg., 1966, Bd 12, S. 393.—Kenner В., Clark H.„ Kabler W., Am. J. publ. Hlth, 1960, v. 50, p. 1533. — К e n n e г В., С 1 a r k H., К a b-ler W., Appl. Microbiol., 1961, v. 9, p. 15.
Поступила 25/11 1967 r.
УДК 614.31 :[637.1 + 615.779.91-078:576.858-
ПРИМЕНЕНИЕ НЕКОТОРЫХ АНТИБИОТИКОВ ПРИ ВИРУСОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ МОЛОКА И МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТОВ
Кандидаты мед. наук Л. И. Лозбин и М. С. Марова Киевский научно-исследовательский институт гигиены питания
Вирусологические исследования молока и молочных продуктов позволили нам установить, что при их обработке антибиотиками (пенициллин, стрептомицин, нистатин) не всегда удается достигнуть бактерицидного эффекта. Это наблюдалось главным образом при обработке скисшего молока (сырого и пастеризованного) и творога летом и осенью. В зимний же период, по-видимому, вследствие более низкой микробной обсеменности продуктов и изменения характера микробного пейзажа названная выше комбинация антибиотиков, как правило, оказывала губительное действие на бактериальную флору.
Мы изучали чувствительность микрофлоры (выделявшейся из продуктов, обработанных указанными антибиотиками) к иным антибиотикам широкого спектра действия (левомицетину, мицерину, тетрациклину и др.). В теплое время года из молока-самокваса и творога после обработки их пенициллином, стрептомицином и нистатином чаще всего выделялись грам-отрицательные микроорганизмы, относящиеся к группе кишечной палочки, как правило, чувствительные к действию мицерина, левомицетина и реже тетрациклина. Дополнительная обработка продукта одним из указанных антибиотиков обеспечивала освобождение его от этих бактерий.
В предварительных опытах мы обрабатывали молочные продукты пенициллином, стрептомицином, нистатином, а также тем антибиотиком, к которому остаточная микрофлора сохраняла чувствительность. Однако при нанесении на клеточный слой материалов, обработанных антибиотиками, взятыми в такой комбинации, нередко наблюдался резкий токсический эффект вплоть до полного отслоения клеточного пласта. Учитывая это, мы решили подобрать такую комбинацию антибиотиков или такую методику их применения, которая позволила бы получить продукт, свободный от бактерий, но не обладающий цитотоксическим действием.
Бактерицидная эффективность действия различных комбинаций пенициллина, стрептомицина, левомицетина, мицерина и тетрациклина (каждого в дозах от 200 до 2000 ЕД/мл) с нистатином (в дозе 100—200 ЕД/мл) была испытана нами при обработке молока, хранящегося 2—4 дня в условиях холодильника и комнатной температуры. Эти исследования позволили определить минимальные дозы антибиотиков, обеспечивающие бактерицидный эффект, и установить их наиболее целесообразные комбинации.
Показано также, что удается получить продукт, практически свободный от бактерий, применяя для обработки лишь мицерин (500—1000 ЕД/мл) или левомицетин (1000 мкг/мл) в комбинации с нистатином (100—200 ЕД/мл)1. Худшие результаты достигнуты при применении тетрациклина: солянокислый тетрациклин в дозах 200—2000 ЕД/мл в комбинации с нистатином чаще всего обеспечивал лишь бактериостатический эффект.
Проведена сравнительная обработка пастеризованного и сырого молока (свежего и скисшего), ряженки, кефира, ацидофильного молока, сливок, творога (чайного, столового, любительского), масла сливочного и других продуктов комбинациями антибиотиков: 1) пенициллин (1000—2000 ЕД/мл) + стрептомицин (500—1000 ЕД/мл) + нистатин (100/200 ЕД/мл)-, 2) мицерин в дозах 500—1000 ЕД/мл; 3) левомицетин в дозе 1000 мкг/мл,
каждый отдельно с нистатином, взятым в указанной выше дозе. Полученные данные представлены в таблице.
Далее изучено влияние указанных комбинаций антибиотиков, действие каждого антибиотика отдельно, а также влияние молока и молочных продуктов, обработанных различными комбинациями антибиотиков, на первичные (трипсинизи-рованная культура тканей эмбрионов человека) и перевиваемые однослойные тканевые культуры (КВ, ам-ниотическая ткань человека и др.).
Испытано влияние антибиотиков в дозах, обычно действующих на тканевые культуры при их заражении материалом (начальная концентрация ле-вомицетина или мицерина 500—1000 ЕД/мл, нистатина 100—200 ЕД/мл-, конечная, после прибавления поддерживающей среды, соответственно 50—200 и 10—40 ЕД/мл). Влияние указанных веществ на тканевые культуры изучалось нами и при различных способах нанесения материала на культуры клеток: непосредственно на клеточный слой (после удаления среды для размножения и промывания раствором Хенкса), в поддерживающую среду, с удалением испытуемого материала после 1 —— 12-часового контакта с клетками и пр.
Установлено, что левомицетин, мицерин и нистатин в отдельности в изучавшихся нами дозах не оказывают токсического влияния на клетки тканевых культур при любом испытанном нами способе их заражения. Комбинации же нистатина с левомицетином или особенно мицерином в тех же дозах иногда вызывали цитотоксическое действие.
При внесении в пробирку с тканевой культурой молока или молочнокислого продукта, обработанного антибиотиками в различных комбинациях,
1 1 г левомицетина предварительно растворяли в 10 мл спирта. Дальнейшие разведения готовили на стерильной дистиллированной воде.
Определение бактериальной стерильности молока и молочных продуктов после обработки их антибиотиками
Продукт
Комбинации и дозы антибиотиков (в ЕД/мл)
1 +
Молоко пастеризованное » скисшее . . .
» сырое.....
» » скисшее
Ряженка .......
Кефир ........
Сливки ........
Молоко ацидофильное
Творог чайный.....
» столовый . . . » любительский Масло ........
+
+ +
+
Примечание. В таблице приведены результаты обработки проб, отобранных в январе.
Обозначения: — отсутствие роста на обычных питательных средах; ± результаты непостоянны; + пробы нестерильны.
и инкубировании их в термостате в течение 1—И/г часов в ряде случаев, как и при обработке пенициллином, стрептомицином и нистатином, наблюдался резкий токсический эффект. Удаление испытуемого материала после контакта его с тканевой культурой заметно не уменьшало токсического действия, поскольку отрицательное влияние на клетки тканевой культуры отмечалось в первые минуты после нанесения материала на клеточный слой.
Результаты исследования позволяют рекомендовать следующую методику обработки продуктов. Жидкий продукт разводят в 5—10 раз стерильным буферным раствором (рН 7,2), при необходимости нейтрализуют 7,5% раствором двууглекислого натрия (с учетом того, что в кислой среде активность некоторых антибиотиков снижается, а также того, что десорбция кишечных вирусов лучше происходит в щелочной среде); плотные продукты предварительно растирают в стерильной ступке и разводят в 10—50 раз. Прибавляют антибиотики в одной из указанных выше комбинаций (ориентируясь при этом на вид продукта и время года — см. таблицу), встряхивают не менее 10 мин., после чего оставляют сначала при комнатной температуре на 1—2 часа, а затем в холодильнике при 4—6° до следующего дня. Проверенные на бактериальную стериальность пробы до вирусологических исследований хранят при температуре —20°.
Посевы проб на питальные среды для проверки на бактериальную стерильность, за редким исключением, обеспечивают совпадающие результаты как после 1—2-часового контакта с антибиотиками, так и после дополнительного инкубирования их в холодильнике в течение 18—20 часов.
Следовательно, в экстренных случаях пробы могут быть использованы для заражения тканевых культур после обработки антибиотиками в день их взятия.
Методика обработки длительно хранившегося молочного или молочнокислого продукта несколько отличается от изложенной. Так, после разведения и нейтрализации продукта пробы встряхивают 5—10 мин. и сохраняют в течение 1 часа при комнатной температуре (для десорбции вируса), затем центрифугируют (при 3000 об/мин в течение 30 мин.), к надосадочной жидкости прибавляют антибиотики. Дальнейшую обработку производят так, как описано выше.
Учитывая, что материал, обработанный антибиотиками, перед нанесением на клеточный слой требуется дополнительно разводить в 5—10 раз (для уменьшения цитотоксического действия), мы остановились на следующей методике заражения тканевой культуры. Накануне заражения среду роста заменяли поддерживающей средой с 2% сыворотки или без нее. На следующий день исследуемые пробы вносили в дозах 0,2—0,3 мл непосредственно в поддерживающую среду. Каждым материалом заражали не менее 4 пробирок, содержащих культуру клеток. После 1*/г—2-часового контакта при 37° среду с материалом удаляли и заменяли свежей поддерживающей средой (П. Ф. Здродовский и М. И. Соколова, 1965).
Поступила 21/У1П 1967 г.
УДК 614.73-074
ОПРЕДЕЛЕНИЕ Со60 В ВОДЕ, БИОМАТЕРИАЛЕ И ПОЧВЕ
О. И. Юрасова
Филиал Всесоюзного научно-исследовательского института консервной и овощесушильней промышленности
Использование препаратов кобальта-60 (Со60) с высокой удельной активностью в мощных радиационно-химических у-установках, а также в пищевой промышленности создает опасность распространения радиоак-
