CC BY
9
и инкубировании их в термостате в течение 1—И/г часов в ряде случаев, как и при обработке пенициллином, стрептомицином и нистатином, наблюдался резкий токсический эффект. Удаление испытуемого материала после контакта его с тканевой культурой заметно не уменьшало токсического действия, поскольку отрицательное влияние на клетки тканевой культуры отмечалось в первые минуты после нанесения материала на клеточный слой.
Результаты исследования позволяют рекомендовать следующую методику обработки продуктов. Жидкий продукт разводят в 5—10 раз стерильным буферным раствором (рН 7,2), при необходимости нейтрализуют 7,5% раствором двууглекислого натрия (с учетом того, что в кислой среде активность некоторых антибиотиков снижается, а также того, что десорбция кишечных вирусов лучше происходит в щелочной среде); плотные продукты предварительно растирают в стерильной ступке и разводят в 10—50 раз. Прибавляют антибиотики в одной из указанных выше комбинаций (ориентируясь при этом на вид продукта и время года — см. таблицу), встряхивают не менее 10 мин., после чего оставляют сначала при комнатной температуре на 1—2 часа, а затем в холодильнике при 4—6° до следующего дня. Проверенные на бактериальную стериальность пробы до вирусологических исследований хранят при температуре —20°.
Посевы проб на питальные среды для проверки на бактериальную стерильность, за редким исключением, обеспечивают совпадающие результаты как после 1—2-часового контакта с антибиотиками, так и после дополнительного инкубирования их в холодильнике в течение 18—20 часов.
Следовательно, в экстренных случаях пробы могут быть использованы для заражения тканевых культур после обработки антибиотиками в день их взятия.
Методика обработки длительно хранившегося молочного или молочнокислого продукта несколько отличается от изложенной. Так, после разведения и нейтрализации продукта пробы встряхивают 5—10 мин. и сохраняют в течение 1 часа при комнатной температуре (для десорбции вируса), затем центрифугируют (при 3000 об/мин в течение 30 мин.), к надосадочной жидкости прибавляют антибиотики. Дальнейшую обработку производят так, как описано выше.
Учитывая, что материал, обработанный антибиотиками, перед нанесением на клеточный слой требуется дополнительно разводить в 5—10 раз (для уменьшения цитотоксического действия), мы остановились на следующей методике заражения тканевой культуры. Накануне заражения среду роста заменяли поддерживающей средой с 2% сыворотки или без нее. На следующий день исследуемые пробы вносили в дозах 0,2—0,3 мл непосредственно в поддерживающую среду. Каждым материалом заражали не менее 4 пробирок, содержащих культуру клеток. После 1*/г—2-часового контакта при 37° среду с материалом удаляли и заменяли свежей поддерживающей средой (П. Ф. Здродовский и М. И. Соколова, 1965).
Поступила 21/У1П 1967 г.
УДК 614.73-074
ОПРЕДЕЛЕНИЕ Со60 В ВОДЕ, БИОМАТЕРИАЛЕ И ПОЧВЕ
О. И. Юрасова
Филиал Всесоюзного научно-исследовательского института консервной и овощесушильней промышленности
Использование препаратов кобальта-60 (Со60) с высокой удельной активностью в мощных радиационно-химических у-установках, а также в пищевой промышленности создает опасность распространения радиоак-
тивного загрязнения из рабочих узлов этих установок в производственную и внешнюю среду (А. В. Быховский с соавторами; А. В. Седов и О. И. Юрасова).
Радиометрические методы определения радиоактивных изотопов в объектах внешней среды сводятся к концентрированию активности, а затем к измерению ее в подготовленном образце. Наибольшие трудности связаны с концентрированием активности из почвы, растений и биоматериала из-за плохой десорбируемости большинства радиоактивных изотопов (В. П. Шведов и С. И. Широков). Загрязнение почвы, растений и биоматериала Со80 до уровня Ю-9—Ю-10 кюри/кг может быть установлено у-спектрометри-ческим или радиохимическим методом. При использовании у-спектро-метрического метода не требуется трудоемкого предварительного концентрирования активности. Однако у-спектрометрический анализ проводят с помощью сложного оборудования, мало доступного для широкого круга исследователей. Радиохимические методы обычно просты и не требуют дорогостоящего оборудования.
Предлагаемая методика предусматривает концентрирование Со60 из почвы, биоматериала и воды. За основу взята методика определения этого элемента в смесях радионуклеидов х. Согласно предлагаемой методике, Со отделяется от примесей железа однократным осаждением гидроокиси железа концентрированным аммиаком, а затем экстрагируется смесью этилового эфира и изоамилового спирта с последующим осаждением двойного роданида ртути и Со. Слои никеля этой реакции не дают. Она, следовательно, позволяет открывать ионы кобальта в присутствии солей никеля (В. Ф. Гиллебранд с соавторами).
Порядок выделения Со60 из воды следующий. Проба воды подкисляется раствором НЫ03 до рН 5,0—6,0 по универсальному бумажному индикатору, затем в пробу вносят 20 мг соносителя в виде Со(Ы03)2 и 4 капли РеС13 (10мг ¥е в 1 мл). Гидроокиси однократно осаждают концентрированным ЫН4ОН, осадок отделяют центрифугированием, а надосадочную жидкость подкисляют НС1 до рН 3,0—-4,0 по универсальному бумажному индикатору. Затем в пробу вносят 15 г сухого МН4СЫ5, растворяют роданистый аммоний и в делительной воронке роданистый комплекс Со экст-трагируют с помощью 50 мл смеси эфира (65%) и изоамилового спирта (35%). При этом раданистое соединение Со извлекается амиловым спиртом и всплывает над раствором. В дальнейшем Со реэкстрагируют 20 мл воды, содержащей 4—6 капель концентрированной 1ЧН4ОН. Реэкстракт слегка нагревают, вводят 10 мл ЫаОН и центрифугируют. Осадок гидроокисей кобальта растворяют 5—6 каплями концентрированной НС1, приливают к нему 10 мл воды и 10 мл 0,1 М реагента (27 г ^С12 и 34 г ЫН4СЫЗ в 1 л). Формирующийся мелкий кристаллический осадок двойного роданида ртути и Со выдерживают в течение часа.
Осадок двойного роданида ртути и Со промывают на фильтровальном приборе 2 для получения стандартных осадков 0,01 М реагентом (п. 5), этанолом и подсушивают при 110°. Осадок взвешивают и рассчитывают выход носителя; в заключение осадок поступает на измерение активности по Р-излучению.
Удельную активность образца рассчитывают по формуле:
гл ^пр — /Уф ,
[<2= ,-ЛР-т 2,22-10»] КЮРи'Л'
где —эффективность счета для промежуточного слоя; р — поправка на поглощение излучения в слое препарата; т — химический выход носителя; и — объем воды, взятый на анализ (в л).
1 R. В. Hahn, D. Z. Smith, Talanta, 1961, v. 7, № 3—4, p. 291.
2 В. В. P а ч и н с к и й, А. Г. Т р е щ о в, И. В. Колосов. Практикум по применению изотопов и излучений в сельском хозяйстве. Радиохимия. М., 1960, в. 5, с. 61.
Данная методика позволяет осадить Со в виде двойного роданида ртути и Со. Примеси железа осаждают в виде гидроокиси по ходу анализа; примеси никеля не мешают анализу из-за специфичности реакции роданида аммония с Со и последующей экстракции. Мешающий ион меди можно связать в комплекс добавлением тиосульфата или тиомочевины на втором этапе анализа (Г. Шарло).
В растениях, биоматериале и почве определяют Со60 таким же порядком, как и в пробах воды, загрязненной этим элементом. При этом на анализ берут растворенную золу, полученную после озоления биоматериала или растений, или солянокислую почвенную вытяжку. В конце анализа получают мелкий кристаллический осадок двойного роданида ртути и Со, из которого легко приготовить препарат с равномерным слоем для подсчета активности. Равномерность слоя препарата имеет немаловажное значение; поправка на поглощение излучения в слое препарата, как правило, дает самый значительный вклад в ошибку измерения активности препарата.
Ниже приводятся данные о выходе носителя для предлагаемой радиохимической методики •{см. таблицу).
Полученные результаты соответствуют требованиям к выходу носителя при радиохимических анализах (не менее 60%). Точность предлагаемого метода равна 17,6%.
Таким образом, радиохимическая методика определения радиоактивного Со в воде, биоматериале и почве характеризуется большим выходом носителя и удовлетворительной точностью; образующийся мелкий кристаллический осадок двойного роданида ртути и Со удобен для получения равномерного слоя препарата.
Вид пробы Удельная активность Со60 (в кюри/л) Количество анализов Выход носителя (в %)
Вода .... 6,0-Ю-9 5 78± 1,5
Почва .... 1,7-10-® 7 73±4,0
Растения . . . 2,3 -Ю-8 5 75±3,5
ЛИТЕРАТУРА
Б ы х о в с к и й А. В., Дроздов В. Е., Лисов Г. Н. Атомная энергия, 1966, № 1, с. 63. — Г и л л е б р а н д В. Ф. и др. Практическое руководство по неорганическому анализу. М., 1960.— Седов А. В., Юр асов а О. И. В кн.: Вопросы гигиены в связи с развитием большой химии. М., 1964, с. 137. — Шарло Г. Методы аналитической химии. М., 1966, с. 673. — Шведов В. П., Широков С. И. Радиоактивное загрязнение внешней среды. М., 1962.
Поступила 4/1V 1967 г.
