CC BY
11
УДК 615.778.4-031/.33:543.544
ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДА ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИПТАЛА В БИОЛОГИЧЕСКИХ СРЕДАХ
Канд. биол. наук Г. А. Хохолькова
Научно-исследовательский институт гигиены труда и профзаболеваний, Киев
В сельском хозяйстве широко применяется группа ядохимикатов — производных карбаминовой кислоты, одним из представителей которых является диптал. Химически чистый диптал
О
II С1
(ш с,н7)г ы-с - в-СНг-СС] =С<С)
(диизопропилтрихлораллилтиокарбамат) — кристаллическое вещество бледно-бурого цвета с температурой кипения 152° при 4 мм рт. ст., хорошо растворимое в масле и органических растворителях, со специфическим запахом. Диптал относительно высоко летуч (Ю. А. Баскаков; Н. Н. Мельников). Диптал — препарат узко избирательного действия, применяется в виде 5% водной эмульсии для борьбы с овсюгом и лисохвостом в посевах льна, риса, сахарной свеклы, ячменя и пшеницы (Ю. А. Баскаков; Н. Н. Мельников, В. Никитин).
При разработке метода определения диптала в крови и внутренних органах мы руководствовались принципом метода изучения монурона, диурона и симазина в цитрусовых, описанным 3. Ф. Юрковой и М. А. Клисенко.
Метод заключается в обнаружении диптала хроматографией в тонком слое окиси алюминия с применением в качестве реактива для проявления азотнокислого серебра в ацетоне.
Пластинки для хроматографии готовят нанесением 15 г сорбционной смеси на стеклянную пластинку размером 9X12 см. Для приготовления сорбционной массы растирают в ступке 50 г окиси алюминия и 15 г медицинского гипса. Содержимое ступки переносят в колбу емкостью 1,5—2 л, приливают 75 мл воды и смесь тщательно перемешивают при энергичном встряхивании в течение 30 мин. Затем сорбционную массу наносят на пластинки, которые сушат при комнатной температуре 18—20 часов. Хранят пластинки в эксикаторе. Реактив для проявления хроматограмм готовят таким образом: 0,85 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, прибавляют 2,5 мл аммиака (удельный вес 0,9) и доводят ацетоном до 100 мл.
Ход определения следующий. Животных (белых крыс) забивают декапитацией. Кровь собирают в пробирку, предварительно смоченную 5% раствором лимоннокислого натрия. Внутренние органы (печень, почки, селезенка, сердце, легкие, мозг) извлекают, отмывают от крови охлажденным 0,85% раствором хлористого натрия, измельчают ножницами, а затем растирают в ступке (или гомогенизаторе) до получения однородной кашицы. Навеску (0,2 г) или 0,4—0,5 мл крови помещают в пробирку с притертой пробкой емкостью 12—15 мл, приливают 5 мл эфира и диптал экстрагируют 30 мин. при постоянном энергичном встряхивании. Затем эфир осторожно сливают в сухую химическую пробирку или хроматографируют через слой (1—2 см) натрия сернокислого безводного. Пробирку с пробой и колонку промывают 2—3 раза небольшими порциями эфира, эфирные растворы объединяют и эфир выпаривают до небольшого объема (0,1—0,2 мл) на водяной бане при 40°. Экстракт количественно наносят на пластинку, отмечая линию старта. Параллельно с пробой на ту же пластинку наносят «свидетель»— чистый диптал. Пластинку помещают в камеру для хроматографии, заполненную смесью гексана и хлороформа (4: 1). Камерой может служить обычный эксикатор. После того как растворитель пройдет расстояние около 10 см, отмечают линию фронта растворителя, пластинку вынимают из камеры и сушат при комнатной температуре до удаления паров растворителя. Затем пластинку обрабатывают реактивом для проявления и облучают 20 мин. в ультрафиолетовом свете. Источником последнего служат ртутно-кварцевые лампы ПРК-2 или ПРК-4. При наличии диптала на месте его локализации появляются черные пятна с соответствующим для данного ядохимиката /?/.
Описанным методом может быть обнаружено 0,001 мг диптала в пробе.
Другие карбаматы — эптам, ялан, тиллам, к'арбин — не мешают определению. Ялан, эптам, тиллам не дают реакции с азотнокислым серебром методом хроматографии в тонком слое, карбин дает положительную реакцию, но при других условиях.
Величины Rt чистого диптала при нанесении его на пластинки представлены в табл. 7. Среднее значение Rt чистого диптала 0,56.
Таблица 1 Таблица 2
Величина Rf при
нанесении чистого Величина Rf диптала при добавлении к пробам in
диптала vitro
Нанесено
диптала *f
(в мкг)
1 0,56
2 0,55
5 0,52
7 0,57
9 0,56
10 0,65
Среднее... 0,56
Биологическая среда
кровь печень почки мозг сердце легкие
0,51 0,47 0,52 0,51 0,63 0,51
0,63 0,56 0,55 0,51 0,56 0,52
0,58 0,54 0,-59 0,62 0,45 0,50
0,51 0,50 0,63 0,47 0,45 0,45
0,48 0,52 — — 0,45 0,—
0,54 0,51 0,57 0,52 0,50 0,49
Границы Rf 0,5—0,6.
Размер и интенсивность пятен зависят от количества нанесенного ядохимиката. Таким образом, содержание диптала в крови и внутренних органах может быть определено количественно при сравнении размеров и интенсивности окрашивания пятна пробы с размером и интенсивностью окрашивания пятен известного количества диптала.
При хроматографии контрольных проб из крови и внутренних органов в тонком слое окиси алюминия с последующим проявлением раствором азотнокислого серебра в ацетоне мы не обнаружили каких-либо веществ, которые могли бы мешать определению диптала. На хромато-граммах (см. рисунок) контрольных проб либо вообще не было пятен (пробы крови), либо обнаруживались желто-коричневые пятна экстрактивных веществ на линии старта с небольшим расплывчатым «ореолом» коричневого цвета вокруг пятен. На хроматограммах контрольных проб мозга проявляются желтые пятна на старте с «языком» желтого цвета, на фоне которого при наличии диптала образуется черное пятно.
Опыты in vitro с добавлением диптала к пробам крови и внутренних органов (табл. 2) показали, что диптал был обнаружен во всех пробах. Следовательно, метод хроматографии в тонком слое окиси алюминия с последующим проявлением раствором азотнокислого серебра и выдерживанием в ультрафиолетовом свете может быть применен для определения диптала в биологических средах.
Разработанный нами метод проверен в опытах на животных, получавших per os однократно химически чистый диптал в дозе 1475 мг/кг (LD50). Препарат обнаруживается в крови и внутренних органах (пече-
Хроматограммы контрольных проб печени (А) и мозга (Б).
/ — линия старта; 2 — линия фронта растворителя.
5 Гигиена и санитария N« 7
65
ни, почках, селезенке, легких, мозге, сердце) уже через 15 мин. после его введения животным. Максимальное содержание ядохимиката отмечается в крови через 30 мин., во внутренних органах через 12 часов при затравке животных дипталом в дозе 1475 мг/кг. Наибольшее количество диптала выявляется в печени и легких, что согласуется с данными Fang и сотрудников о том, что С14-тиллам — препарат, относящийся к группе карбаматов, именно в этих органах претерпевает наибольшие превращения.
Таким образом, разработан чувствительный метод, позволяющий открывать диптал в количестве 0,001 мг и более в биологических средах, основанный на хроматографии ядохимикатов в тонком слое окиси алюминия с последующим проявлением азотнокислым серебром и выдерживанием в ультрафиолетовом свете. Метод специфичен в присутствии других карбаматов — эптама, тиллама, ялана и карбина.
ЛИТЕРАТУРА
Баскаков Ю. А. Ж- Всесоюзн. хим. о-ва, 1964, т. 9, № 5, с. 486.— Мельников Н. Н. Новые пестициды. М., 1964, с. 125.— Он ж е. Ж- Всесоюзн. хим. о-ва, 1964, т. 9, № 5, с. 524. — Никитин В. Защита растений, 1965, № 5, с. 25. — Юркова 3. Ф., Клисенко М. А. Химия в сел. хоз-ве, 1966, т. 4, № 7, с. 52—54.— Fang S. С., George М„ Freed V. Н„ J. agricult. Food Chem., 1964, v. 12, p. 37.
Поступила 10/V 1967 г.
