CC BY
7
УДК 615.778.38-014.3 + 613.26 : 615.26 : 615.778.38-0741 : 543.54f
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ ХЛОРОФОСА И ДДВФ 1
ПРИ СОВМЕСТНОМ ПРИСУТСТВИИ В ПРЕПАРАТЕ
И РАСТИТЕЛЬНОЙ ПРОБЕ
Г. Ф. Вылегжанина
Молдавский филиал Всесоюзного института защиты растений, Кишинев
Хлорофос широко применяют в борьбе с сельскохозяйственными вредителями. Однако его высокая инсектицидная активность сочетается с небольшой продолжительностью действия. Некоторые авторы высказывают предположение, что на обработанной поверхности он быстро разлагается. Одним из промежуточных продуктов его разложения может быть ДДВФ — соединение, токсичность которого в 10—30 раз выше токсичности самого хлорофоса. В работах Metcaff с соавторами, посвященных механизму разложения хлорофоса в организме насекомых, убедительно доказана правильность этого предположения. Кроме того,, имеются сведения, что ДДВФ может находиться в технических препаратах хлорофоса в виде примесей и оказывать влияние на степень его токсичности. Что касается механизма разложения хлорофоса на обработанном растении, то каких-либо определенных сведений об этом мы не нашли.
Отсутствие таких данных, помогающих объяснить поведение хлорофоса, привело нас к необходимости постановки ряда опытов, на основании которых можно было бы судить об образовании ДДВФ на растении. В свою очередь это осуществимо только с помощью точного и очень чувствительного метода, позволяющего установить наличие нескольких химических, продуктов при совместном их присутствии. Мы остановились на методе бумажной хроматографии. Задача состояла в том, чтобы подобрать систему растворителей, в которой разделялись бы хлорофос и ДДВФ, подобрать условия извлечения препаратов из растительной пробы и очистки экстрактов от мешающих примесей. Замена малодоступного «полиэтиленгликоля 400» 5% вазелиновым маслом в серном эфире и использование в качестве подвижного растворителя смеси бензина и н-бутилового спирта или бензина и хлороформа не дали удовлетворительных результатов. В этих условиях разделение хлорофоса и ДДВФ не обеспечивалось.
Поиски подходящей системы растворителей показали, что при использовании в качестве неподвижного растворителя 5% вазелинового масла в серном эфире и подвижного растворителя — смеси бензина (температура кипения 100—120°) — бензола и метанола (4:2:1) достигается полное разделение хлорофоса и ДДВФ на бумажной хромато-грамме.
Хроматограммы проявлены обработкой 2 н. раствором КОН в метаноле и 0,05 н. раствором AgNOa в HNO3: Н20 (1 : 3), как описывают Terranowa и Ware.
Данные Rf хлорофоса и ДДВФ представлены в таблице. Как видно из этой таблицы, значения Rf хлорофоса более или менее постоянны (0,20—0.28), тогда как Rf ДДВФ отличаются большим непостоянством (0,41—0,56). Непостоянство значений Rf заставляет всегда пользоваться свидетелем. Однако при строгом соблюдении всех условий определения (постоянства температуры, степени обработки хроматограмм неподвижным растворителем) можно добиться значительного увеличения постоянства Rf ДДВФ.
1 ДДВФ — диметилдихлорвинилфосфат.
При определении хлорофоса и ДДВФ в экстрактах из растительных проб необходима их предварительная очистка от пигментов. Успешная очистка экстрактов достигается активированным углем. При этом мешающие вещества практически удаляются полностью. Но иногда на хроматограммах, кроме пятен хлорофоса и ДДВФ, проявляются не-
Значения К! хлорофоса и ДДВФ (чистые препараты)
Задано
хлорофоса ДДВФ Я! хлорофоса К* ДДВФ
в мкг
40 100 0,23 0,47
20 20 0,27 0,51
40 50 0,21 0,56
12 20 0,20 0,42
20 50 0,28 0,52
20 20 0,26 0,43
20 20 0,27 0,50
20 20 0,22 0,51
50 50 0,28 0,52
50 50 0,21 0,54
50 50 0,23 0,41
большие пятна, характерные для самой растительной пробы. Это проявляются остатки веществ, которые не удаляются при очистке активированным углем. Однако они не мешают идентификации хлорофоса и ДДВФ, так как проявляются в нижней части хроматограммы (их 1^ = 0,11—0,15). '
Ниже -приводится перечень используемых реактивов и оборудования.
1. Бензин. Из авиационного бензина выделяют перегонкой фракцию с температурой кипения 100—120°. 2. Бензол. 3. Метанол. 4. Хлороформ. 5. Ацетон. 6. Серный эфир. 7. Активированный уголь КАД молотый. 8. Натрий сернокислый безводный. 9. Хроматографическая система: а) неподвижный растворитель: 5% вазелиновое масло в серном эфире; б) подвижный растворитель: бензин (температура кипения 100—120°) — бензол — метанол (4:2:1) по объему; в) проявитель: 2 н. раствор едкого кали в метаноле и 0,05 н. раствор азотнокислого серебра в растворе концентрированной азотной кислоты и воды в соотношении 1:3, 1—2 капли 30% Н2О2. 10. Хроматографическая бумага Ленинградской фабрики, медленная. Предварительно бумага промывается водой и высушивается. И. Хроматографический сосуд высотой 40—45 см. 12. Сосуды для экстракции растительных проб емкостью 1,5—2 л. 13. Аппарат Кудерна—Даниша для упаривания растворителя под уменьшенным давлением. 14. Колбы конические емкостью 250 и 50 мл с пробками. 15. Пробирки центрифужные. 16. Цилиндры мерные емкостью 1 л и 250—100 мл. 17. Микропипетки 0,1 мл.
Экстракция и очистка производятся так. Среднюю пробу продуктов растительного происхождения весом не менее 0,5 кг заливают водой и оставляют на ночь для экстракции. На следующий день воду сливают, фильтруют, измеряют объем экстракта и отбирают подходящий аликвот для работы. Вливают его в делительную воронку, добавляют равный объем хлороформа и встряхивают в течение 10 мин. Экстракцию хлороформом проводят трижды. Вместо него можно экстрагировать хлорофос и ДДВФ серным эфиром, при этом достигаются одинаковые результаты.
Соединенные хлороформные или эфирные экстракты перенося в аппарат для упаривания под уменьшенным давлением, добавляют 5 мл 20% водного этилового спирта для предотвращения улетучивания ДДВФ и отгоняют хлороформ или эфир на водяной бане при температуре, не превышающей 60°, под уменьшенным давлением, создаваемым водоструйным насосом. Следы хлороформа удаляют отсасыванием паров насосом Комовского. Остаток переносят в маленькую коническую колбочку. Ополаскивают колбу от аппарата для упаривания 2—3 раза небольшим количеством ацетона (5—6 мл) и сливают в ту же колбочку. Затем добавляют к ацетоновому раствору безводный сернокислый натрий для высушивания раствора и оставляют на 3—4 часа. Фильтруют ацетоновый экстракт через ватный фильтр в чистую колбочку, добавляют 0,2—0,3 г активированного угля КАД (молотого) для очистки раствора от пигментов и встряхивают 5 мин. Отфильтровывают раствор через плотный фильтр в центрифужную пробирку, ополаскивают колбу и фильтр 3 раза небольшим количеством ацетона. Упаривают ацетон до небольшого объема (0,2 мл), а остаток наносят на хроматограмму.
Расстояние между соседними точками на линии старта должно быть не менее 3 см. Рядом с исследуемыми растворами наносят свидетель: 10—20 мкг хлорофоса и 20—30 мкг ДДВФ.
Обрабатывают хроматограмму неподвижным растворителем— 5% вазелиновым маслом в серном эфире. После высыхания растворителя хроматограмму помещают в хроматографический сосуд на 3 часа. После 4—5-кратного использования подвижный растворитель меняют. Затем отмечают уровень, на который поднялся подвижный растворитель, и сушат хроматограмму на воздухе около 30 мин.
Обрабатывают хроматограмму 2 н. раствором КОН в метаноле и оставляют на 2—3 часа, но можно и до следующего дня. Обработку хроматограмм 2 н. раствором КОН ведут при комнатной температуре во избежание потерь ДДВФ из-за его чрезвычайной летучести. Затем хроматограмму обрабатывают 0,05 н. раствором азотнокислого серебра в азотной кислоте.
После высыхания хроматограмму вывешивают на солнце или перед ультрафиолетовой лампой для проявления пятен хлорофоса и ДДВФ. Предел чувствительности для хлорофоса 10 мкг, для ДДВФ — 20 мкг. В этих условиях достигается четкое разделение хлорофоса и ДДВФ.
ЛИТЕРАТУРА
Metcaff R. L., Fucuto Т. R., March R. В., J. econ. Entomol., 1959, v. 52, p. 44.—Terranowa A. C„ Ware G. W., Ibid., 1963, v. 56, p. 596.
Поступила l/III 1965 r.
УДК 613.295-07 : 577.164.2-074
УСКОРЕННОЕ ПРИБЛИЖЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА С ПРИ КОНТРОЛЕ ЗА С ВИТАМИНИЗАЦИЕЙ ГОТОВОЙ ПИЩИ
Т. П. Чайка
Ялтинская санитарно-эпидемиологическая станция (главный врач К. Е. Комиссарова)
Доставка из отдаленных мест пищи для исследования на витамин С затруднена в связи с его нестойкостью, особенно в жаркое время года. Мы пользуемся для этого походным прибором; с помощью ега
в * ^
