CC BY
13
склероза (РС) , миастении (МА)- приводящих к ранней инвалидизации. По данным различных авторов в настоящее время в мире насчитывается более двух миллионов больных РС. Показатель распространенности миастении достигает 38 на 100 тыс. населения в зависимости от региона. Несмотря на раннюю диагностику аутоиммунных заболеваний нервной системы (АИЗН), успехи фармакотерапии, остаются проблемы, нуждающиеся в других терапевтических стратегиях для контроля активности заболевания (Smith JA., et al.2021), предотвращения прогрессирования инвалидности, преодоления резистентности к стандартной терапии.
Гемопоэтические стволовые клетки (ГСК) используются в терапии РС около 20 лет в протоколах низко, средне и высокодозной иммуносупрессивной терапии (ВИСТ) с последующей аутотрансплантацией стволовых кроветворных клеток (АТСКК). Иммуноаблация позволяет элиминировать аутореактивные клоны Т-лимфоцитов, нивелировать иное влияние иммунных механизмов при РС. АТСКК приводит к реконституции иммунной системы без иммунопатологических звеньев, формирующих заболевание, где воспалительный и нейродегенеративный процессы соседствуют. Пациенты с РС в целом хорошо переносят АТСКК, риск смертельных осложнений близок к 0,3 %. В Европейском регистре по трансплантации костного мозга (ЕВМТ) на 2021 год находится 1875 больных РС после АТСКК с различными типами заболевания [1]. На ранних стадиях заболевания с ремиттирующим течением, где преобладает воспалительный процесс в ЦНС, отмечается высокая эффективность лечения с регрессом неврологических симптомов по шкале EDSS и последующей стабилизацией состояния в течении 3-5 лет по разным данным у 70-90 % больных РС. Эти результаты в целом соответствуют нашим наблюдениям 49 пациентов (Макаров С.В. и др.2016), при этом пятилетняя выживаемость без прогрессирования составила в группе 45%. Полагаем, что быстро прогрессирующее течение РС, резистентные к стандартной фармакотерапии формы, являются показанием к АТСКК. Было отмечено (Sharrck B. et al.,2020), что АТСКК, по-видимому, дает явное преимущество с точки зрения NEDA (отсутствие признаков активности заболевания), демонстрируя показатели 66-93% по сравнению с отдельными препаратами второй линии терапии — моноклональными антителами.
АТСКК имеет ограниченную эффективность при прогрессирующих формах РС [2], отсутствует влияние на нейродегенеративный процесс (Muraro et al., 2017). Предполагалось, что аутотрансплантация мезенхималь-ных стволовых клеток (МСК) или нейральных стволовых клеток (НСК) может справиться с такой задачей. Обладая нейропротективным и нейротрофическим влиянием, МСК секретируют факторы, индуцирующие рост аксонов и увеличивающие выживаемость клеток in vitro (Kim et al., 2010). Так же МСК проявляют иммуносупрессив-ную активность путем модуляции регуляторной функции Т-клеток. В работе Karussis etal. (2010) у пациентов с ре-миттирующим и прогрессирующим РС отмечались имму-номодулирующие эффекты после аутотрансплантации МСК и статистически значимое улучшение показателей EDSS в течение 6 месяцев наблюдения. В то же время в группе с прогрессирующим течением РС во второй фазе исследования по введению МСК не отмечалось стойких улучшений (Bonab et al., 2012). На животных моделях РС было установлено, что трансплантация НСК ингибирует периферическую и периваскулярную активацию провоспалительных Т-клеток и увеличивает количество противовоспалительных Т-reg. (Pluchino et al., 2005). Использование НСК на животных моделях
РС выявило их паракринные функции, ограничивающие развитие нейродегенеративного процесса, что открывает в будущем перспективу применения клеток в клинической практике.
Авторами [3] были проанализированы результаты публикаций в базах данных: PubMed/Medline, EMBASE, Web of Science Cochrane Library до сентября 2021. Описано 10 больных с рефрактерной к стандартному лечению МА, которым была проведена АТСКК. У всех наблюдалось клиническое улучшение и ремиссия заболевания. У нас имеется собственный опыт наблюдения двух пациентов с МА после ВИСТ АТСКК. В первом случае после трансплантации отмечался стойкий регресс большинства признаков заболевания с многолетней ремиссией; второй случай без клинического эффекта указывает на то, что больные с МА с длительными сроками заболевания и сопутствующей патологией в стадии декомпенсации имеют ограничения для проведения такой терапии. Просматриваются перспективы персонифицированной терапии МА с использованием гуманизированной докли-нической модели предварительно кондиционированных МСК (Sudres M., et al.2017), что позволяет включать механизмы ингибирования клеточной пролиферации и связанных с В-клетками костимули-рующих молекул, а также активировать регулятор комплемента DAF/CD55.
По поводу применения аллогенной трансплантации при АИЗН не существует единого мнения из-за высокого риска посттрансплантационных осложнений. Дальнейшая разработка терапевтических стратегий на основе достижений регенеративной медицины, изучения стволовых клеток может оказать значительное влияние на качество жизни пациентов с АИЗН.
Литература:
1. Alexander T.., Greco R. Bone Marrow Transplantation (2022) 57:1055-1062.
2. Makarov S., Nikolaeva A. et al. Journal of the Neurological Sciences (2021) 429: 118195.
3. Jaime-Pérez JC, Meléndez-Flores JD, Ramos-Davila EM. et al. Cytotherapy (2022), 24: 676-685.
ПОДХОД К ГЕНОТЕРАПИИ АУТОИММУННЫХ
ЗАБОЛЕВАНИЙ
О.Г. Макеев1, 2, С.В. Костюкова1, 2,
А.В. Коротков1, 2, С.Б. Антонова1
1 ФГБОУ ВО Уральский государственный медицинский университет МЗ РФ, Екатеринбург, Россия
2 ГАУЗ СО Институт медицинских клеточных технологий, Екатеринбург, Россия.
e-mail: larim@mail.ru
Ключевые слова: аутоиммунные заболевания, мультипо-
тентные мезенхимальные стромальные клетки, ген CD 86,
экзосомы.
Необходимость поиска новых путей терапии аутоиммунных заболеваний обусловлена ограниченным арсеналом средств с минимальными числом побочными проявлениями.
Известно, что белок CD 86 в физиологической концентрации индуцирует иммунный ответ организма посредством связывания со стимулирующим рецептором CD 28 Th клеток. Также показано, что избыточная концентрация белка CD 86 в результате активации генов,
ответственных за синтез белка CTLA-4, подавляет иммунный ответ [1, 2].
В нашем исследовании получены экзосомы, несущие избыточное количество белка CD-86. Последнее достигалось путем трансфекции мультипотентных мезенхималь-ных стромальных клеток пациента вектором на основе плазмиды Plasmid 1764 Addgene, с встроенным геном CD 86. Плазмиды с встроенным геном использовали для получения компетентной культуры E.coli (штамм XL1-Blue). Трансфекцию выполняли по достижению 4-го пассажа с ежесуточной заменой 30% культуральной среды. Забранную среду использовали для приготовления экзо-сом методом магнитосорбции.
Полученные экзосомы в последующем использовали для терапии обострений атопического дерматита у трех пациентов (мужчины в возрасте 24-35 лет) с их информированного согласия путем нанесения на область кожного повреждения дважды в день с интервалом в 12 часов. В отсутствии базисной терапии все пациенты отмечали снижение симптоматики уже в первые три дня применения: исчезновение зуда, шелушения и сухости, а в дальнейшем — нормализацию внешнего вида кожных покровов. Исследование выполняется в ходе реализации с госзадания. Рег. № 121032400217-9.
Литература:
1. Yanlan Huang, Bin Wei, Yingcui Gao et al. Cent Eur J Immunol. 2020; 44(4): 364-369. 2020 Jan 20.
2. Miaomiao Han, Jingyu Ma, Suidong Ouyang, et al. Cell Mol Immunol. 2022 Jul; 19(7): 805-819. 2022 May 12.
ГИПЕРЭКСПРЕССИЯ ГЕНА KLOTHO
СОПРОВОЖДАЕТСЯ СНИЖЕНИЕМ
ПРОЯВЛЕНИЙ АТОПИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА
О.Г. Макеев1, 2, Е.А. Шуман1, 2, А.В. Коротков1, 2,
М.А. Десятова1, 2, М.А. Уфимцева1
1 ФГБОУ ВО Уральский государственный медицинский университет МЗ РФ, Екатеринбург, Россия
2 ГАУЗ СО Институт медицинских клеточных технологий, Екатеринбург, Россия
e-mail: larim@mail.ru
Ключевые слова: аутоиммунные заболевания, атопический
дерматит, ген Klotho.
Одним из наиболее перспективных направлений терапии атопического дерматита считается применение тканеинженерных конструкций на основе клеток. Однако, эффективность такой терапии как правило не превышает 40% [1]. Целью исследования явилось повышение успешности лечения повреждений кожи, что достигается путем использования не клеток, а секретируемых ими экзосом, содержащих потенциальные терапевтические агенты.
Так, с целью повышения терапевтического потенциала мультипотентные мезенхимальные стромаль-ные клетки жировой ткани в процессе культивирования трансфецировали плазмидными векторами, обеспечивающими эктопическую экспрессию гена Klotho (membrane, Addgene plasmid 17712) и повышающего клеточную резистентность [2]. Спустя четыре пассажа, забирали «кондиционную» среду (не более 30% от общего объема с заменой на свежую культуральную среду). С целью получения экзосом, отобранную среду центрифугировали. Полученный супернатант фильтровали
на фильтрах с диаметром пор 100 нм и выделенные экзосомы анализировали на содержание белка Klotho и резистентность к долговременному хранению в условиях гипотермии. Оказалось, что концентрация белка Klotho составила 456-486 пг/мл и не изменялась во время хранения (36 суток). В последующем экзосомы наносили непосредственно на повреждённые участки кожи четырех пациентов. Предварительные данные об эффективности метода у данных пациентов — добровольцев с их информированного согласия позволяют предполагать перспективность данного подхода. Исследование выполняется в рамках госзадания № 121032400217-9.
Литература:
1. Husing B., Buhrlen B., Gaisser S.H. Fraunhafer Institutrfor Systems and Innovation Research, Karlsruher, Germany, 2003, P60.
2. Xiao, J., Zheng, S., Qiu, Z., & Wu, KAsian journal of urology, 2022. 9(1), 51-56. https:doi.org/10.1016/j.ajur.2021.04.009
О ПРИРОДЕ РАКА С ТОЧКИ ЗРЕНИЯ ЭВОЛЮЦИОННОЙ МЕДИЦИНЫ
А.В. Макрушин
Институт биологии внутренних вод им. И.Д. Папанина РАН, 152742, пос. Борок Ярославской обл, Россия
e-mail: makru@ibiw.ru
Ключевые слова: междисциплинарный подход, эволюционная медицина, бесполое размножение.
Большинство онкологов считает, что злокачественная опухоль возникает в результате размножения одной единственной мутировавшей клетки. Есть другое объяснение природы онкогенеза. Согласно ему рак — это атавизм, результат пробуждения древнего спавшего механизма бесполого размножения, то есть механизма нормального онтогенеза очень далеких предков [1]. Бесполое размножение — это образование новой особи, но не из зиготы, а из комплекса соматических клеток [2]. Бесполо размножаются наиболее примитивные первичновод-ные беспозвоночные, находящиеся близко к основанию филогенетического дерева Metazoa. Большинством Metazoa способность к бесполому размножение утрачена. Но их регуляторная физиологическая система механизм этого процесса в неактивном спящем виде хранит. Заболевание раком, согласно альтернативному объяснению природы этой болезни, происходит из-за того, что этот механизм пробуждается и начинает работать. Чтобы предупреждать возникновение злокачественной опухоли, следует не допускать пробуждения этого механизма.
Но как это делать? Если исходить из альтернативного объяснения природы онкогенеза, то ответ на этот вопрос есть. Онкогенез, согласно альтернативному объяснению природы рака — это атавистическое бесполое размножение. Значит, опухоль — это атавистический зародыш новой особи. Для предотвращения образования нормального, то есть возникающего из зиготы зародыша, женщины используют противозачаточные средства. Поэтому для предотвращения образования опухоли нужно применять тоже их. Понятно, что эти противозачаточные средства должны быть совершенно другого состава, чем противозачаточные средства, предотвращающие беременность, так как механизмы полового и бесполого размножения сильно различаются.
Эффективность противозачаточных средств, предотвращающих беременность, основана на знании
