CC BY
12
ответственных за синтез белка CTLA-4, подавляет иммунный ответ [1, 2].
В нашем исследовании получены экзосомы, несущие избыточное количество белка CD-86. Последнее достигалось путем трансфекции мультипотентных мезенхималь-ных стромальных клеток пациента вектором на основе плазмиды Plasmid 1764 Addgene, с встроенным геном CD 86. Плазмиды с встроенным геном использовали для получения компетентной культуры E.coli (штамм XL1-Blue). Трансфекцию выполняли по достижению 4-го пассажа с ежесуточной заменой 30% культуральной среды. Забранную среду использовали для приготовления экзо-сом методом магнитосорбции.
Полученные экзосомы в последующем использовали для терапии обострений атопического дерматита у трех пациентов (мужчины в возрасте 24-35 лет) с их информированного согласия путем нанесения на область кожного повреждения дважды в день с интервалом в 12 часов. В отсутствии базисной терапии все пациенты отмечали снижение симптоматики уже в первые три дня применения: исчезновение зуда, шелушения и сухости, а в дальнейшем — нормализацию внешнего вида кожных покровов. Исследование выполняется в ходе реализации с госзадания. Рег. № 121032400217-9.
Литература:
1. Yanlan Huang, Bin Wei, Yingcui Gao et al. Cent Eur J Immunol. 2020; 44(4): 364-369. 2020 Jan 20.
2. Miaomiao Han, Jingyu Ma, Suidong Ouyang, et al. Cell Mol Immunol. 2022 Jul; 19(7): 805-819. 2022 May 12.
ГИПЕРЭКСПРЕССИЯ ГЕНА KLOTHO
СОПРОВОЖДАЕТСЯ СНИЖЕНИЕМ
ПРОЯВЛЕНИЙ АТОПИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА
О.Г. Макеев1, 2, Е.А. Шуман1, 2, А.В. Коротков1, 2,
М.А. Десятова1, 2, М.А. Уфимцева1
1 ФГБОУ ВО Уральский государственный медицинский университет МЗ РФ, Екатеринбург, Россия
2 ГАУЗ СО Институт медицинских клеточных технологий, Екатеринбург, Россия
e-mail: larim@mail.ru
Ключевые слова: аутоиммунные заболевания, атопический
дерматит, ген Klotho.
Одним из наиболее перспективных направлений терапии атопического дерматита считается применение тканеинженерных конструкций на основе клеток. Однако, эффективность такой терапии как правило не превышает 40% [1]. Целью исследования явилось повышение успешности лечения повреждений кожи, что достигается путем использования не клеток, а секретируемых ими экзосом, содержащих потенциальные терапевтические агенты.
Так, с целью повышения терапевтического потенциала мультипотентные мезенхимальные стромаль-ные клетки жировой ткани в процессе культивирования трансфецировали плазмидными векторами, обеспечивающими эктопическую экспрессию гена Klotho (membrane, Addgene plasmid 17712) и повышающего клеточную резистентность [2]. Спустя четыре пассажа, забирали «кондиционную» среду (не более 30% от общего объема с заменой на свежую культуральную среду). С целью получения экзосом, отобранную среду центрифугировали. Полученный супернатант фильтровали
на фильтрах с диаметром пор 100 нм и выделенные экзосомы анализировали на содержание белка Klotho и резистентность к долговременному хранению в условиях гипотермии. Оказалось, что концентрация белка Klotho составила 456-486 пг/мл и не изменялась во время хранения (36 суток). В последующем экзосомы наносили непосредственно на повреждённые участки кожи четырех пациентов. Предварительные данные об эффективности метода у данных пациентов — добровольцев с их информированного согласия позволяют предполагать перспективность данного подхода. Исследование выполняется в рамках госзадания № 121032400217-9.
Литература:
1. Husing B., Buhrlen B., Gaisser S.H. Fraunhafer Institutrfor Systems and Innovation Research, Karlsruher, Germany, 2003, P60.
2. Xiao, J., Zheng, S., Qiu, Z., & Wu, KAsian journal of urology, 2022. 9(1), 51-56. https:doi.org/10.1016/j.ajur.2021.04.009
О ПРИРОДЕ РАКА С ТОЧКИ ЗРЕНИЯ ЭВОЛЮЦИОННОЙ МЕДИЦИНЫ
А.В. Макрушин
Институт биологии внутренних вод им. И.Д. Папанина РАН, 152742, пос. Борок Ярославской обл, Россия
e-mail: makru@ibiw.ru
Ключевые слова: междисциплинарный подход, эволюционная медицина, бесполое размножение.
Большинство онкологов считает, что злокачественная опухоль возникает в результате размножения одной единственной мутировавшей клетки. Есть другое объяснение природы онкогенеза. Согласно ему рак — это атавизм, результат пробуждения древнего спавшего механизма бесполого размножения, то есть механизма нормального онтогенеза очень далеких предков [1]. Бесполое размножение — это образование новой особи, но не из зиготы, а из комплекса соматических клеток [2]. Бесполо размножаются наиболее примитивные первичновод-ные беспозвоночные, находящиеся близко к основанию филогенетического дерева Metazoa. Большинством Metazoa способность к бесполому размножение утрачена. Но их регуляторная физиологическая система механизм этого процесса в неактивном спящем виде хранит. Заболевание раком, согласно альтернативному объяснению природы этой болезни, происходит из-за того, что этот механизм пробуждается и начинает работать. Чтобы предупреждать возникновение злокачественной опухоли, следует не допускать пробуждения этого механизма.
Но как это делать? Если исходить из альтернативного объяснения природы онкогенеза, то ответ на этот вопрос есть. Онкогенез, согласно альтернативному объяснению природы рака — это атавистическое бесполое размножение. Значит, опухоль — это атавистический зародыш новой особи. Для предотвращения образования нормального, то есть возникающего из зиготы зародыша, женщины используют противозачаточные средства. Поэтому для предотвращения образования опухоли нужно применять тоже их. Понятно, что эти противозачаточные средства должны быть совершенно другого состава, чем противозачаточные средства, предотвращающие беременность, так как механизмы полового и бесполого размножения сильно различаются.
Эффективность противозачаточных средств, предотвращающих беременность, основана на знании
механизма регуляции полового размножения. Механизм же регуляции бесполого размножения животных неизвестен. Его не изучали. Не изучали его потому, что губки, стрекающие, колониальные асцидии и другие размножающиеся бесполо примитивные беспозвоночные не представляют значительного практического интереса. Незнание механизма регуляции бесполого размножения не дает возможности что-либо сказать о том, как регулируется образование опухоли, а значит и о том, как воздействовать на ее образование, то есть как не допускать пробуждения спящего механизма бесполого размножения. Чтобы найти средство, предотвращающее рак, нужно прежде понять, как регулируется бесполое размножение у беспозвоночных.
Но накоплены обширные сведения о регуляции бесполого размножения у растений. Очень вероятно, что механизм регуляции бесполого размножения у них схож с механизмом регуляции бесполого размножения у животных. Поэтому для понимания механизма регуляции бесполого размножения животных (и для понимания механизма возникновения опухоли) важно знать результаты исследований бесполого размножения растений.
Литература:
1. Макрушин А.В. Как и почему возник механизм старения и онкогенеза: гипотеза. Ж. общ. биологии. 2008.Т. 69. № 1. С. 19-24.
2. Иванова-Казас О.М. Бесполое размножение животных. 1977. Л. Изд. ЛГУ. 239 с.
РЕПАРАТИВНЫЙ ПОТЕНЦИАЛ М2 МАКРОФАГОВ, ПОЛЯРИЗОВАННЫХ В РЕЗУЛЬТАТЕ ЭФФЕРОЦИТОЗА
А.А. Максимова, Е.Я. Шевела, Л.В. Сахно, А.А. Останин, Е.Р. Черных
НИИ фундаментальной и клинической иммунологии, Новосибирск, Россия
e-mail: parkinson.dses@gmail.com
Ключевые слова: макрофаги, эффероцитоз, фибробласты, клеточная терапия, заживление ран.
Длительно незаживающие раны и нарушение регенерации являются актуальной медицинской проблемой. Одно из перспективных направлений терапии в настоящий момент связано с использованием макрофагов [1]. Данные клетки представляют собой гетерогенную пластичную популяцию, внутри которой выделяют фенотипы М1 (провоспалительный) и М2 (противовоспалительный). При этом макрофаги могут быть поляризованы в М2 направлении различными стимулами [2]. Показано, что М2 макрофаги способны оказывать положительное воздействие на заживление ран [3].
Нами был разработан протокол получения макрофагов с М2 фенотипом, в котором ключевым механизмом поляризации является распознавание и поглощение моноцитами апоптотических клеток неадгезивной фракции [4]; клетки были обозначены как M2(LS, Low Serum). Репаративный потенциал данных клеток оценивали по способности модулировать функциональную активность фибробластов дермы (пролиферацию, экспрессию a-SMA, продукцию коллагена I типа) в сравнении с М1 и М2. Содержание растворимых факторов (ангиогенин, TGF-ß, VEGF) определяли при помощи иммуноферментного анализа.
По сравнению с М1, M2(LS) характеризовались более выраженным стимулирующим
влиянием на пролиферацию (увеличение в 3,55 раза vs 2,4) и дифференцировку фибробластов дермы (a-SMA-экспрессирующих клеток в культуре 69,5% vs 48%; содержание коллагена 107,3 нг/мл vs 77,3 нг/ мл). Более того, M2(LS) активнее стимулировали дифференцировку фибробластов по сравнению с клетками, поляризованными в М2 фенотип интерлейкином 4 или дексаметазоном.
Мы предположили, что выраженный стимулирующий эффект M2(LS) связан с продукцией профиброгенных и ангиогенных факторов. Действительно, M2(LS) практически двукратно превышали макрофаги других фенотипов по продукции TGF-pi и более чем в 2,7 раза — ан-гиогенина, а также характеризовались более высоким уровнем VEGF (2870 пг/мл, pW=0,07 по сравнению с другими подтипами).
Таким образом, М2 макрофаги, поляризованные в результате эффероцитоза, представляют собой перспективный материал для разработки новых подходов к лечению ран, ассоциированных с нарушением процессов репарации.
Благодарим ЦКП «Коллекция плюрипотентных культур клеток человека и млекопитающих общебиологического и биомедицинского направления» ФИЦ ИЦиГ СО РАН за предоставление линии дермальных фибробластов NAF1.
Литература:
1. Spiller KL, Koh TJ. Adv. Drug. Deliv. Rev. 2017. V. 122. P.
74-83.
2. Hume D.A. Front. Immunol. 2015. V. 6. Р. 370.
3. Li M., Hou Q., Zhong L., Zhao Y., Fu X. Front. Immunol. 2021. V.
12. Р. 681710.
4. Sakhno L.V., Shevela E.Ya., Tikhonova M.A., Ostanin A.A.,
Chernykh E.R. Scand. J. Immunol. 2016. V. 83. № 2.
P.151-159.
МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ОНКОТРАНСФОРМАЦИИ ТИРЕОИДНОГО ЭПИТЕЛИЯ
П.Е. Максимова, Е.А. Непритимова, Д.В. Зима
ФГАОУ ВО Крымский федеральный университет им. В.И. Вернадского, Симферополь, Россия
e-mail: evgu79@mail.ru
Ключевые слова: онкотрансформация клеток, тироциты, апоптоз, молекулярная диагностика, папиллярный рак, щитовидная железа, патогенез.
Высокая заболеваемость и динамика патоморфоза рака щитовидной железы, требуют совершенствования диагностических подходов и новых данных для персонализированной диагностики, профилактики и лечения [1]. В литературе имеются данные о роли очень распространенного триггера — стресса в развитии патологии щитовидной железы, а также в нарушении сигнальных путей апоптоза и онкотрансформации клеток [2]. Цель нашего исследования — разработать методический подход выявления значимых для практики молекулярно-генетических закономерностей онкотрансформации тиреоидного эпителия с целью выделения разных групп пациентов с точки зрения диагностики и патогенетической терапии.
Материал и методы исследования. Выполнено комплексное экспериментально-клиническое исследование на лабораторных животных (самцы и самки белых крыс зрелого возраста с моделью острого и хронического
