CC BY
4ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Научная статья
https://doi.org/10.36233/0372-9311-266
Щ Check for updates
Первый случай выявления Listeria monocytogenes сиквенс-типов ST7, ST20, ST425 в сточных водах при обследовании водных объектов Вологодской области
Алексеева E.A.1, Полосенко О.В.2, Фурсова Н.К.2, Асташкин Е.И.2, Борзенков В.Н.2, Кисличкина А.А.2, Коломбет Л.В.2И, Шепелин А.П.2, Миронов А.Ю.3
1Центр гигиены и эпидемиологии в Вологодской области, Вологда, Россия;
2Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии, Оболенск, Россия; 3Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.Н. Габричевского, Москва, Россия
Аннотация
Введение. Listeria monocytogenes относится к числу значимых патогенов человека, вызывает различные формы листериоза, в том числе пищевые инфекции, менингиты, неонатальный сепсис, аборты. Листерии распространены во всех регионах мира.
Целью исследования явилось проведение микробиологического мониторинга Listeria monocytogenes в водных объектах вблизи животноводческих предприятий Вологодского района Вологодской области. Материалы и методы. Выделение культур бактерий осуществляли титрационным и фильтрационным методами, идентифицировали с применением бактериологического, серологического методов, автоматизированных приборных методов, полногеномного секвенирования и биоинформационного анализа. Результаты. Из 12 проанализированных образцов водных источников (6 образцов — сточные воды, 4 — речная вода, 2 — ливневые воды) выделены 3 штамма L. monocytogenes и один штамм L. innocua. Полногеномное секвенирование 3 штаммов L. monocytogenes установило их принадлежность к эволюционной линии II, к 3 сиквенс-типам и 2 серогруппам: ST425(1/2a-3a), ST20(1/2a-3a) и ST7(4a-4c). Показана принадлежность штаммов к категории множественно лекарственно-устойчивых, резистентных к 3 функциональным группам антимикробных препаратов (тетрациклинам, макролидам, сульфаниламидам). В геномах штаммов идентифицированы гены антибиотикорезистентности (fosX, pbp-like, lin, norB, sul), острова патогенности LIPI-1,LIPI-2, гены вирулентности inlABCJ, oatA, ami, gtcA, vip, lisK. У 1 штамма выявлен остров стрессоустойчивости SSI-1.
Заключение. Полученные данные свидетельствуют о контаминации водных источников вблизи животноводческих предприятий штаммами L. monocytogenes, обладающими высоким потенциалом патогенности, который может привести к вспышкам листериоза у людей, что указывает на необходимость тщательного мониторинга водных источников на наличие возбудителя листериоза и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий.
Ключевые слова: Listeria monocytogenes, мониторинг, генетические линии, сиквенс-типы, гены вирулентности, гены стрессоустойчивости
Источник финансирования. Авторы заявляют об отсутствии внешнего финансирования при проведении исследования.
Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.
Для цитирования: Алексеева E.A., Полосенко О.В., Фурсова Н.К., Асташкин Е.И., Борзенков В.Н., Кисличкина А.А., Коломбет Л.В., Шепелин А.П., Миронов А.Ю. Первый случай выявления Listeria monocytogenes сиквенс-типов ST7, ST20, ST425 в сточных водах при обследовании водных объектов Вологодской области. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2022;99(4):453-464. DOI: https://doi.org/10.36233/0372-9311-266
© Коллектив авторов, 2022
ORIGINAL RESEARCHES
Original article
https://doi.org/10.36233/0372-9311-266
The first case of detection of Listeria monocytogenes sequence types ST7, ST20, ST425 in wastewater during an investigation of water bodies in the Vologda region
Elena A. Alekseeva1, Olga V. Polosenko2, Nadezhda K. Fursova2, Evgeny I. Astashkin2, Valery N. Borzenkov2, Angelina A. Kislichkina2, Liubov V. Kolombet2^, Anatoly P. Shepelin2, Andrey Yu. Mironov3
'Center of Hygiene and Epidemiology in the Vologda region, Vologda, Russia;
2State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology, Obolensk, Russia;
3G.N. Gabrichevsky Moscow Research Institute for Epidemiology and Microbiology, Moscow, Russia
Abstract
Introduction. Listeria monocytogenes is an important human pathogen causing various forms of listeriosis, including foodborne infections, meningitis, neonatal sepsis, and abortion. Listeria are common all over the world. The purpose of the study was to conduct microbiological monitoring of L. monocytogenes in water reservoirs near livestock premises in the Vologda district of the Vologda region.
Materials and methods. Bacterial cultures were isolated using two methods, titration and filtration, followed by analysis using methods of conventional bacteriology, serotyping, and species identification by instrumental procedures such as whole genome sequencing, and bioinformatic analysis.
Results. Three isolates of L. monocytogenes and one isolate of Listeria innocua were isolated from 12 analyzed water samples (wastewater — 6, river water — 4, and storm water — 2 samples). whole genome sequencing of three L. monocytogenes strains attributed them to the evolutionary line II, and to three sequence types and two serogroups sT425(1/2a-3a), ST20(1/2a-3a), ST7 (4a-4c). The strains are shown to belong to multiple drug resistant ones conferring resistance to three functional groups of antibacterials such as tetracyclines, macrolides, and sulfonamides. Antibiotic resistance genes (fox, psp-like, lin,norB,sul), virulence Islands LIpI-1 and LIPI-2, and virulence genes inlABCJ, oatA, ami, gtcA, vip, and lisK in genomes of the strain were identified. Stress tolerance Island SSI-1 was identified in one strain.
Conclusions. The data obtained indicate contamination of water sources near the livestock premises with L. monocytogenes strains possessing high pathogenic potentiality for outbreaks of listeriosis in humans. This shows the necessity of careful monitoring of water sources for the presence of the causative agent of listeriosis as well as the implementing of anti-epidemic measures.
Keywords: Listeria monocytogenes, monitoring, genetic lines, sequence types, virulence genes, stress tolerance genes
Funding source. This study was not supported by any external sources of funding.
Conflict of interest. The authors declare no apparent or potential conflicts of interest related to the publication of this article.
For citation: Alekseeva E.A., Polosenko O.V., Fursova N.K., Astashkin E.I., Borzenkov V.N., Kislichkina A.A., Kolombet L.V., Shepelin A.P., Mironov A.Yu. The first case of detection of Listeria monocytogenes sequence types ST7, ST20, ST425 in wastewater during an investigation of water bodies in the Vologda region. Journal of microbiology, epidemiology andimmunobiology = Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunobiologii. 2022;99(4):453-464. DOI: https://doi.org/10.36233/0372-9311-266
Введение
Listeria monocytogenes относится к числу проблемных патогенов человека, вызывает различные формы листериоза, в том числе менингиты, неона-тальный сепсис, аборты. Заболеваемость листерио-зом в мире составляет 0,30-0,46 случая на 100 тыс. населения с показателем летальности до 21% [1, 2].
Грамположительные бактерии L. monocytogenes относятся к роду Listeria, наряду с другим патогенным видом L. ivanovii, непатогенными видами L. innocua, L. welshimeri, L. seeligeri, L. grayi и др. [3, 4]. Листерии широко распространены в разных экологических системах. Они выделяются из поч-
венных и водных экосистем, от животных, людей, из пищевых продуктов, окружающей среды на животноводческих предприятиях и предприятиях пищевой промышленности. L. monocytogenes патогенна для человека и животных, L. ivanovii — только для животных, но в редких случаях может вызвать заболевание у человека. Описаны случаи выделения L. ivanovii из организма здорового животного или человека-бактерионосителя, из окружающей среды [3, 5].
Распространению листерий способствует широкомасштабная хозяйственная деятельность человека: внедрение новых технологий возделывания почвы, строительство животноводческих комплек-
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
сов, комбикормовых заводов, централизованных предприятий по переработке и реализации сырья животного происхождения, продовольственных складов и хранилищ. В группе риска по возможности заболевания листериозом находятся беременные женщины, новорождённые дети, лица пожилого возраста, иммунокомпрометированные лица. Листериоз часто регистрируется у работников цехов первичной переработки на птицефабриках и мясокомбинатах [3, 4, 6]. Листерии распространены во всех регионах мира, в том числе в различных климатических поясах и даже за Полярным кругом, заболеваемость листериозом отмечается в 56 странах [7]. Одним из основных факторов передачи ли-стерий человеку и животных является вода [8, 9]. Благодаря своим высоким адаптивным свойствам в широком температурном диапазоне, влажности, рН среды, листерии циркулируют в почве, пресной и морской воде [3, 10].
Главная задача санитарной охраны водных объектов базируется на предотвращении сброса в них сточных вод, контаминированных бактериями [11]. Отсутствует методологическая база выделения культур L. monocytogenes из сточных вод. Недостаточно освещён вопрос о распространении листерий в пресных водоёмах на территории России. Отсутствуют данные по внутривидовому типированию L. monocytogenes и принадлежности к генетическим линиям (сиквенс-типам).
Цель исследования — индикация L. monocyto-genes в водных объектах Вологодской области и изучение их биологических и молекулярно-генети-ческих свойств, в том числе чувствительности к антимикробным препаратам (АМП), наличия генетических детерминант антибиотикорезистентности, патогенности, стрессоустойчивости, внутривидового мультилокусного сиквенс-типирования.
Материалы и методы
Объекты исследования
Обследованы 12 образцов водных объектов, расположенных вблизи животноводческих предприятий Вологодского района Вологодской области, в том числе образцы сточных вод (n = 6), речной воды (n = 4), ливневых вод (n = 2). Образцы воды отобраны в осенний период 2018 г. в рамках производственного микробиологического контроля поверхностных вод ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Вологодской области», согласно СанПиН 2.1.5.980-001.
1 СанПиН 2.1.5.980-00. 2.1.5. «Водоотведение населённых мест, санитарная охрана водных объектов. Гигиенические требования к охране поверхностных вод. Санитарные правила и нормы» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 22.06.2000) (с изм. от 04.02.2011, с изм. от 25.09.2014).
Питательные среды. Для накопления ли-стерий в образцах использован селективный накопительный бульон «UVM» («Merck»), «Бульон Фрейзера, основа» (ГНЦ ПМБ). В качестве дифференциально-диагностических применены среды «Listeria agar (base) acc. OTTAVIANI and AGOSTI» («Merck»), «ПАЛКАМ агар» (ГНЦ ПМБ). Штаммы листерий культивировали на средах: «Мясо-пептон-ный агар» с 1% глюкозы (ГНЦ ПМБ), «Триптон-со-евый агар, ТСА (ГНЦ ПМБ), «Мясо-пептонный бульон, МПБ» с 1% глюкозы (ГНЦ ПМБ), «Tryptone Soya Yeast Extract Broth» («ffiMedia»), «L. mono Blood Agar Base» («ffiMedia) [12, 13].
Титрационный и фильтрационный методы посева образцов воды
При выделении и идентификации L. monocytogenes из водных объектов в качестве основы использованы схемы и питательные среды для выделения патогенных листерий из пищевых продуктов, согласно утверждённым в России нормативным документам2, 3.
Посевной объём образца составлял 1000 мл, материал сеяли на питательные среды титрацион-ным и фильтрационным способами. Для посева титрационным способом использованы 2 объёма воды по 250 мл, 4 объёма по 100 мл, 10 объёмов по 10 мл, при этом воду сеяли сразу в среды накопления и инкубировали при 30°С в течение 24-48 ч. Для фильтрационного способа образцы делили на 4 объёма по 250 мл для более лёгкого прохождения воды через фильтры. При видимом загрязнении образец делили на 5 и/или 10 равных частей. Отмеренные объёмы воды фильтровали через мембранные фильтры со средним диаметром пор 0,45 мкм и диаметром фильтрующей поверхности 37 мм с использованием аппарата для фильтрования. После фильтрации мембранные фильтры вносили в 50-100 мл среды накопления и инкубировали в термостате при температуре 30 ± 1°С в течение 24 ч. Дальнейшие этапы исследования для титраци-онного и фильтрационного способов одинаковы: после предварительного обогащения пересевали 0,1 мл материала в 9 мл среды для вторичного накопления с последующей инкубацией при 37°С в течение 24-48 ч.
Идентификация листерий
Видовую идентификацию листерий осуществляли согласно инструкциям производителей: с помощью биохимической тест-системы «API Listeria»
2 ГОСТ 32031-2012 (ISO 11290-1:1996/Amd.1:2004, NEQ) Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes. М.; 2014.
3 МУК 4.2.1122-02 Организация контроля и методы выявления бактерий Listeria monocytogenes в пищевых продуктах. М.; 2002.
ORIGINAL RESEARCHES
(«bioMerieux»), ПЦР-тест-системы «АмплиСенс Listeria monocytogenes-EPh» (ЦНИИ эпидемиологии), «Латексной тест-системы Listeria monocytogenes» (ГНЦ ПМБ) [14].
Молекулярно-генетическая идентификация L. monocytogenes
Видовую идентификацию листерий подтверждали с помощью экспериментальных ПЦР тест-систем (ГНЦ ПМБ): для определения рода Listeria применяли «ПЦР тест-систему Listeria spp.»; для определения видов листерий — «ПЦР тест-систему Listeria monocytogenes», «ПЦР тест-систему Listeria innocua», «ПЦР тест-систему Listeria ivanovii», «ПЦР тест-систему Listeria welshime-ri», «ПЦР тест-систему Listeria siligeri» и «ПЦР тест-систему Listeria greyi». В качестве ДНК-матрицы использованы термолизаты исследуемых культур. Визуализацию продуктов амплификации осуществляли с помощью электрофореза в 1,5% агарозном геле. В качестве референс-штаммов использованы штаммы L. monocytogenes ATCC13932, L. innocua АТСС33090, L. ivanovii ATCC19119, L. welshimeri B7382, L. siligeri ATCC35967, L. greyi ATCC25400, полученные из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов «ГКПМ-Оболенск».
Чувствительность к АМП
Минимальные подавляющие концентрации (МПК) ампициллина, амоксициллина, меропенема, тетрациклина, кларитромицина, амикацина, бисеп-тола, ципрофлоксацина («HiMedia») определяли методом микроразведений в бульоне. Интерпретацию результатов осуществляли в соответствии с рекомендациями EUCAST4. Принадлежность к категории множественной лекарственной резистентности (MDR) определяли в соответствии с критериями A.P. Magiorakos и соавт. [15].
ПЦР-серотипирование
Серотипирование штаммов осуществляли с помощью мультиплексной ПЦР по методу М. Dou-mith и соавт. [16].
Генотипирование штаммов L. monocytogenes
Мультилокусное сиквенс-типирование осуществляли по схеме Института Пастера, основанной на анализе нуклеотидных последовательностей 7 генов «домашнего хозяйства»: abcZ (ABC-транс-портёра), bglA ф-глюкозидазы), cat (каталазы), dapE (сукцинилдиаминопимелат десукцинилазы), dat (аминотрансферазы D-аминокислоты), ldh (L-лак-татдегидрогеназы), lhkA (гистидинкиназы) [17].
Полногеномное секвенирование штаммов L. monocytogenes
Секвенирование осуществляли на платформе «Illumina MiSeq» с использованием наборов «Nextera DNA Library Preparation Kit» («Illumina»), «MiSeq Reagent Kit sv3» («Illumina»), согласно инструкциям производителя. Полученные единичные прочтения собирали в контиги с использованием программного обеспечения «SPAdes 3.9.0».
Детекция генов антибиотикорезистентности, патогенности, стрессоустойчивости в геномах L. monocytogenes
В геномах штаммов L. monocytogenes идентифицированы гены антибиотикорезистентности fosX, lmo0441, lmo0919, norB, lmo0224; гены островов патогенности LIPI-1 (prfA, hly, plcA, plcB, mpl, actA), LIPI-2 (inlABCJ), LIPI-3 (llsAXGHBYDP), LIPI-4 (licABC, lm900558-70013, glvA); гены интер-налинов (inlEFGHIKP); другие гены патогенности (oatA, ami, gtcA, vip, lisK); гены островов стрессоустойчивости SSI-1 (lmo0444, lmo0445, lmo0446, lmo0447, lmo0448), SSI-2 (lin0464, lin0465) с помощью веб-ресурса базы данных BIGSdb-Lm5
Результаты
Выделение культур L. monocytogenes
Из образцов воды титрационным и фильтрационным способами выделены штаммы Listeria spp.
Наличие листерий выявляли визуально по характеру роста на селективных бульонах и дифференциально-диагностических средах.
При селективном обогащении в среде UVM Listeria spp. и через 24 и 48 ч инкубации при 30 ± 1°С наблюдалось незначительное диффузное помутнение среды. Наличие листерий на бульоне Фрейзера подтверждалось изменением цвета среды.
Затем из всех исследуемых пробирок проводили высевы материала из верхнего слоя питательной среды петлёй на селективно-диагностические питательные среды. На среде ПАЛКАМ агар через 24 ч инкубации листерии формировали мелкие, серовато-зелёные или оливково-зелёные колонии, диаметром 0,5-1,0 мм, через 48 ч — диаметром 1-2 мм с чёрным ореолом. На среде ALOA — предположительно L. monocytogenes образовывали типичные сине-зелёные колонии, окружённые непрозрачным ореолом, L. innocua — в виде сине-зелёных колоний без зоны помутнения.
На кровяном агаре вокруг колоний, предположительно являющихся L. monocytogenes, отмечено наличие зон ß-гемолиза; вокруг колоний L. innocua, зоны ß-гемолиза отсутствовали.
4 URL: http://www.eucast.org/clinical_breakpoints
5 URL: https://bigsdb.pasteur.fr/cgi-bin/bigsdb/bigsdb.pl?db = pubmlst_listeria_seqdef
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
При исследовании материала фильтрационным методом рост бактерий рода Listeria наблюдался через 24 ч, при использовании титрационного метода — через 48 ч.
По культуральным свойствам на питательных средах из 12 образцов отобраны культуры с типичным для листерий ростом (табл. 1). Морфология выделенных культур листерий при использовании как зарубежных, так и отечественных сред идентична: короткие палочки с закруглёнными концами, располагающиеся поодиночке или в виде коротких цепочек; грамположительные, спор и капсул не образуют, имеют несколько перитрихиально расположенных жгутиков.
Ферментативные свойства культур
При изучении биохимических свойств штаммов Listeria spp. с помощью API тест-системы установлено, что культуры, выделенные из сточных вод (образцы № 2934, 2965, 2966), гидролизуют эску-лин, ферментируют а-маннозид, D-арабит, рамно-зу, метил-а^-глюкопиранозиды, не ферментируют ксилозу, рибозу, глюкозо-1-фосфат, тагалозу. Культуры идентифицированы как L. monocytogenes. При изучении биохимических свойств образца № 2889 выявлен гидролиз эскулина, ферментация а-манно-зида, D-арабита, рамнозы, метил-а^-глюкопира-нозидов, отсутствие ферментации ксилозы, рибозы, глюкозо-1-фосфата, тагалозы. Изолят № 2889 идентифицирован как L. innocua.
После постановки дополнительных тестов для всех эскулинположительных культур микроорганизмов, выросших на среде ПАЛКАМ, и лецитинобра-зующих культур на среде ALOA — по Оттавиани и Агости, подтверждена принадлежность культур из образцов № 2934, 2965, 2966, выделенных из сточных вод, к L. monocytogenes, а культуры из образца № 2889, выделенного из речной воды, — к L. innocua. В остальных образцах воды из водных объектов Вологодского района Вологодской области бактерии рода Listeria не обнаружены (табл. 1).
Идентификации L. monocytogenes и L. innocua с помощью ПЦР и латексной тест-систем
Принадлежность 4 культур из образцов № 2934, 2965, 2966, 2889 к роду Listeria подтверждена с помощью экспериментальной тест-системы «ПЦР тест-система Listeria spp.». У 3 культур из образцов № 2934, 2965, 2966 подтверждена принадлежность к виду L. monocytogenes как «ПЦР тест-системой Listeria monocytogenes», так и в реакции латекс-агглютинации на стекле с помощью «Латексной тест-системы Listeria monocytogenes». У культуры из образца № 2889 подтверждена принадлежность к виду L. innocua с помощью «ПЦР тест-системы Listeria innocua».
Чувствительность к АМП
На основании определения МПК АМП три штамма L. monocytogenes отнесены к категории MDR, в соответствии с критериями [15], т.е. устойчивы к АМП 3 и более классов. Все штаммы были устойчивы к тетрациклинам (тетрациклину), макролидам (кларитромицину) и сульфаниламидам (бисептолу). Эти штаммы чувствительны к меро-пенему, амикацину и ципрофлоксацину (табл. 2). В геномах всех штаммов идентифицировали 5 генов антибиотикорезистентности:
• fosX (lmo1702), кодирующий белок резистентности к фосфомицину;
• pbp-like (lmo0441), кодирующий пеницил-лин-связывающий белок, определяющий устойчивость к Р-лактамам;
• lin (lmo0919), определяющий устойчивость к макролидам-линкозамидам-стрептограми-нам;
• norB, кодирующий NO-редуктазу, ассоциированную с устойчивостью к фторхинолонам;
• sul (lmo0224), детерминирующий устойчивость к сульфаниламидам.
Идентифицированные гены антибиотикорези-стентности вносят вклад в формирование MDR-фе-нотипа изученных штаммов.
Генетические линии штаммов L. monocytogenes
Штаммы L. monocytogenes 2934, 2965, 2966 принадлежат к одной эволюционной линии II, но к разным сиквенс-типам: ST425, ST20, ST7 соответственно (табл. 3). Это первый случай выявления данных сиквенс-типов L. monocytogenes у штаммов, выделенных из сточных вод.
Острова патогенности и стрессоустойчивости в геномах L. monocytogenes
При анализе полногеномных последовательностей штаммов L. monocytogenes 2934, 2965, 2966 показано, что гены островов патогенности LIPI-1 и LIPI-2 присутствуют у всех 3 штаммов, гены LIPI-3 и LIPI-4 отсутствуют. На этом основании можно предположить, что штаммы не являются гипервирулентными, т.к. ранее отмечено, что наличие островов патогенности LIPI-3 и LIPI-4 характерно для гипервирулентных штаммов L. monocytogenes [18]. Гены кластера интерналинов inlE, inlI, inlK, inlP детектированы у всех штаммов, гены inlF, inlG — у штаммов L. monocytogenes 2934 и 2965, ген inlH — у штаммов L. monocytogenes 2934 и 2966. Прочие гены патогенности листерий (oatA, ami, gtcA, vip, lisK) детектированы у всех 3 штаммов, кроме гена vip, который отсутствовал у штамма L. monocytogenes 2966.
Остров стрессоустойчивости SSI-1, ассоциированный с устойчивостью к кислотам, солям и обеспечивающий рост в пищевых продуктах [19], обнаружен у штамма L. monocytogenes 2966 сиквенс-ти-
Таблица 1. Анализ образцов воды бактериологическим и биохимическим методами Table 1. Analysis of water samples by bacteriological and biochemical methods
Образец Sample
Источник выделения Isolation source
Рост на бульоне UVM Growth in UVM broth
Рост на бульоне Фрейзера, основа Growth in Fraser Broth Base
Рост на агаре ALOA по Оттавиани и Агости Growth on ALOA agar based on Ottaviani & Agosti formula
Рост на ПАЛКАМ агаре
Growth on PALCAM agar
2934
2967
2965
2968
2966
Сточные воды Waste water
Сточные воды Waste water
Сточные воды Waste water
Сточные воды Waste water
Сточные воды Waste water
Рост в виде помутнения Growth opacity
Нет роста No growth
Рост в виде помутнения Growth opacity
Нет роста No growth
Рост в виде помутнения Growth opacity
Помутнение, изменение цвета Opacity, color change
Помутнение, изменение цвета Opacity, color change
Помутнение, изменение цвета Opacity, color change
Нет роста No growth
Помутнение, изменение цвета Opacity, color change
Сине-зелёные колонии, окружённые непрозрачным ореолом Blue-green colonies surrounded by an opaque halo
Нет роста No growth
Сине-зелёные колонии,
окружённые непрозрачным ореолом
Blue-green colonies surrounded by an opaque halo
Нет роста No growth
Сине-зелёные колонии,
окружённые непрозрачным ореолом Blue-green colonies
surrounded by an opaque halo
Оливково-зелёные колонии с чёрным
ореолом Olive-green round colonies with a black halo
Нет роста No growth
Оливково-зелёные колонии с чёрным
ореолом Olive-green round colonies with a black halo
Нет роста No growth
Оливково-зелёные колонии с чёрным
ореолом Olive-green round
colonies with a black halo
2990
2888
2889
Сточные воды Waste water
Речная вода River water
Речная вода River water
Нет роста No growth
Нет роста No growth
Рост в виде помутнения Growth opacity
Нет роста No growth
Нет роста No growth
Помутнение, изменение цвета Opacity, color change
Нет роста No growth
Нет роста No growth
Сине-зелёные колонии Blue-green colonies
Нет роста No growth
Нет роста No growth
Оливково-зелёные колонии с чёрным ореолом Olive-green round small colonies with a black halo
ß-Гемолиз ß-Hemolysis
Ферментация ксилозы Xylose fermentation
Ферментация рамнозы Rhamnose fermentation
Ферментация маннита Mannitol fermentation
Заключение Conclusion
L. monocytogenes
Листерии не обнаружены ND
+ - + - L. monocytogenes
Листерии не обнаружены ND
L. monocytogenes
Листерии не обнаружены
Листерии не обнаружены ND
L. innocua
о о
^ о
ND =г о
>
О о О
л w и
5 Я Ô
■ I г-
О
о Ci
' I -<
! Ю
^ & °
>
п
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
.Q
,го
О "О с Ш
ё го
I
го т
О
1 °
ф (Л
т о
2 13 С с ^ о
i I 11 р
£р Ц Is
а:
ш 5 <?
ж !=
a w ш г с ° £ = га
ш н о X £ ~
(Л
С it О о 5 Е ,<в (U , X
а> а. га
« !i
г? 5
31 < <
а> ^
га оа га ■ -га S га
О | Е С О £
^ ° S
£з тз ст а ш <
Uss
о
Ш ш
Е ° ll га ю .я .Е ш
га С _£- £
; ш
'■go
> с £
£ 3 f
о о 2
ю
к
X О <и
(Ц ■— О
<S - =
я- о о
3 оо <л
-D —
m
, а) га ^ л
.о- ™
О га
га И
S Й
ш SiQ
о s
££ н
ш о X Z
н
<и о X Z
I-
ш о X Z
.0 X
S <и S И о. ^ ш siQ
S3
S ю
СЦ о
-
X
££ н
ш о X Z
н
ш о X Z
н
ш о X Z
Ь о
.
S Й
о. ^ ш SiQ
S ю
СЦ о
££ н
ш о X Z
н
<и о X Z
S Й
о. ^ ш SiQ
££ н
aj о X Z
н
Ш О
X z
Ш
га н
-
- ™ - ?
1 s
Ф aj га
^ s or
= s °
^ ш Л iS x О ° " о
d S
Ь о
.
£ 5 h-
<D О
X z
О О
.
<u
¡0 <| |й J^ яга fc ju
то=^га то=^га
(UmCCi (UmCCi mm
CL CL s
<u 4 >
S ^ E
CO
о
CO
-
-о ra
m .o >
<u 4 >
x о E
m m E
s ^
0Q
00 CO
о
CO
о .a
£ О
<NC0
Ю (fl ra ^^
ja
m
ra
л Ш
о £
<D ""
£
s ra z
2 CD
5 x
n
a о С z
па ST7 эволюционной линии II, что согласуется с данными, поученными ранее в Китае [20]. Остров стрессоустойчивости SSI-2, обеспечивающий L. monocytogenes выживание в щелочных условиях и в условиях окислительного стресса [21], не выявлен ни у одного штамма (табл. 3). В геномах 2 штаммов серогруппы 1/2a-3a сиквенс-типов ST20 и ST425 не обнаружено ни одного острова стрессоустойчивости.
Обсуждение
В разных странах наблюдается устойчивая тенденция к увеличению доли антибиотикорези-стентных штаммов L. monocytogenes: к ципрофлок-сацину (2%), эритромицину (1%) в Австралии [22]; амоксициллину/клавуланату (6%), ко-тримоксазолу (10%), цефтриаксону (49%), клиндамицину (54%), ампициллину (83%), оксациллину (90%) в Польше [23, 24]; гентамицину (94%), стрептомицину (98%) в Ираке [25], что связывают с мутациями и горизонтальным переносом генов [26]. Повсеместно отмечается неблагоприятная тенденция распространения MDR-штаммов. В Японии с 2012 по 2017 г. отмечено увеличение доли MDR-штаммов L. monocytogenes с 46,7 до 82,6% [27]. В Египте в 2017 г. 88% штаммов L. monocytogenes, выделенных из молочных продуктов и от сотрудников молокопе-рерабатывающего предприятия, относились к категории MDR [28].
Выявление MDR-штаммов L. monocytogenes в сточных водах и идентификация в их геномах генетических детерминант антибиотикорезистентно-сти указывает на неблагоприятную эпидемическую ситуацию по листериозу на территории вблизи животноводческих предприятий в обследованном регионе.
Сиквенс-типы ST7, ST20, ST425 L. monocyto-genes преимущественно идентифицированы у штаммов, выделенных из пищевых продуктов [29], в образцах фекалий животных в национальных парках Новосибирской, Калужской, Тверской, Владимирской областей [30]. L. monocytogenes ST7 является аутохтонной генетической линией для России, характерной для изолятов из пищевых продуктов, объектов окружающей среды и от больных с перинатальным и неонатальным листериозом и менингитом [31]. ST7 определён у штаммов L. mo-nocytogenes, выделенных от людей, сельскохозяйственных животных, грызунов на территории Восточной Европы, Центральной Азии, России [32].
Штаммы L. monocytogenes 2934 и 2965 отнесены к серогруппе 1/2a-3a, штамм L. monocytogenes 2966 — к серогруппе 4a-4c. Серогруппа 1/2a-3a L. monocytogenes ранее описана у 51,0% штаммов, выделенных из пищевых продуктов и окружающей среды животноводческих и птицеводческих ферм в Польше [24], 48,3% штаммов в Японии [27], 75,7%
ORIGINAL RESEARCHES
Таблица 2. Фенотипы антибиотикорезистентности штаммов L. monocytogenes, выделенных из сточных вод — МПК антибактериальных препаратов, мг/л
Table 2. Phenotypes of antibiotic resistance of L. monocytogenes strains isolated from waste water samples — апШайепа! MICs, mg/l
Антибактериальные препараты Antibacterials Штамм L. monocytogenes L. monocytogenes strain
2934 2965 2966
Ампициллин / Ampicillin
Амоксициллин / Amoxicillin
Меропенем / Meropenem
Тетрациклин / Tetracycline
Кларитромицин / Clarithromycin
Амикацин / Amikacin
Бисептол / Biceptol
Ципрофлоксацин / Ciprofloxacin
Множественная лекарственная устойчивость Multidrug resistance
1 (S) 1 (S) 1 (S) 0,5 (S) 0,5 (S) 0,5 (S) 0,12 (S) 0,12 (S) 0,12 (S)
4 (R) 4 (R) 4 (R)
2 (R) 2 (R) 2 (R)
2 (S) 2 (S) 2 (S)
1/5 (R) 1/5 (R) 1/5 (R)
0,12 (S) 0,12 (S) 0,12 (S)
Тетрациклины, макролиды, сульфаниламиды Tetracyclines, macrolides, sulphanylamides
Примечание. R — резистентность; S — чувствительность. Note. R — resistance; S — susceptibility.
Таблица 3. Характеристика геномов 3 штаммов L. monocytogenes, выделенных из сточных вод Table 3. Characteristics of genomes of 3 L. monocytogenes strains isolated from waste water samples
Параметр / Parameter Штамм L. monocytogenes / L. monocytogenes strain
2934 2965 2966
Размер генома, т.п.н. / Genome size, kb 2834,6 2927,0 2849,7
GC-состав, % / GC composition, % 40 40 40
Количество контигов / Number of contigs 26 22 30
Количество генов / Number of genes 2830 2938 2833
Эволюционная линия / Evolutionary line II II II
Сиквенс-тип / Sequence type ST425 ST20 ST7
Серогруппа / Serogroup 1/2a-3a 1/2a-3a 4a-4c
Острова патогенности: / Pathogenicity islands:
LIPI-1 + + +
LIPI-2 + + +
LIPI-3 _ _ _
LIPI-4
Гены интерналинов / Internalin genes
Другие гены вирулентности Some other virulence genes
Островa стрессоустойчивости Stress resistance islands
SSI-1
SSI-2
inlEHIKP oatA, ami, gtcA, vip, lisK
inlEFGIKP oatA, ami, gtcA, vip, lisK
inlEFGHIKP oatA,ami, gtcA, lisK
+
штаммов в Турции [33]. Серогруппа 4a-4c редко определялась у штаммов L. monocytogenes, выделенных из пищевых продуктов в Польше [24] и Турции [33] и от сельскохозяйственных животных в Ираке [34]. В литературе отсутствуют данные о выделении L. monocytogenes серогрупп 1/2a-3a и 4a-4c из сточных вод.
Установлена гетерогенность 3 штаммов L. monocytogenes, выделенных из сточных вод Вологодской области, по наличию генетических детерминант антибиотикорезистентности, патогенности, стрессоустойчивости. Наличие в геномах штаммов генетических детерминант антибиотикорезистент-ности, островов патогенности и стрессоустойчиво-
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
сти, выявление генетического родства штаммов с эпидемически значимыми генетическими линиями L. monocytogenes свидетельствует о наличии у них высокого патогенного потенциала, который может быть реализован при попадании в организм человека, что указывает на необходимость использования молекулярно-генетических методов диагностики при оценке эпидемиологической ситуации по листериозу и разработке эффективных профилактических и противоэпидемических мероприятий.
Выводы
1. Разработанная и апробированная схема выделения патогенных для человека листерий, включающая титрационный и фильтрационный методы посева, позволила выделить из водных образцов штаммы L. monocytogenes. Полученные данные могут быть использованы в качестве основы для разработки нормативных документов для проведения микробиологического мониторинга L. mo-nocytogenes в водных объектах.
2. Выявление контаминации сточных вод животноводческих предприятий MDR L. monocytogenes, несущих генетические детерминанты антибиоти-корезистентности, патогенности, стрессоустой-чивости, предполагает наличие у них высокого патогенного потенциала, способности вызвать вспышки листериоза среди людей.
3. Зафиксирован первый случай выделения из сточных вод штаммов L. monocytogenes, относящихся к генетическим линиям ST7, ST20, ST425, которые ранее выделялись в России и других странах от людей, из пищевых продуктов и окружающей среды.
4. Мультилокусное сиквенс-типирование штаммов L. monocytogenes, выделенных из сточных вод, может стать инструментом для выявления возможных источников инфекции людей во время вспышек листериозной инфекции, материалом для сравнения возбудителей, циркулирующих на различных территориях в разное время.
СПИСОК ИСТОЧНИКОВ
1. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Vital signs: Listeria illnesses, deaths, and outbreaks — United States, 20092011. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2013; 62(22): 448-52.
2. European Food Safety Authority (EFSA). EU summary report on trends and sources of zoonoses, zoonotic agents and food-borne outbreaks in 2015. EFSA. 2016; 14(12): e04634. https://doi.org/10.29037j.efsa.2016.4634
3. Воробьёв А.А., Быков А.С., Бойченко М.Н. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник для студентов медицинских вузов. М.: МИА; 2022.
4. Тартаковский И.С., Малеев В.В., Ермолаева С.А. Листерии: роль в инфекционной патологии человека и лабораторная диагностика. М.: Медицина для всех; 2001.
5. Cao X., Wang Y., Wang Y., Li H., Luo L., Wang P., et al. Prevalence and characteristics of Listeria ivanovii strains in wild
rodents in China. Vector Borne Zoonotic Dis. 2019; 19(1): 8-15. https://doi.org/10.1089/vbz.2018.2317
6. Lepe J.A. Current aspects of listeriosis. Med. Clin. (Barc.). 2020; 154(11): 453-8. https://doi.org/10.1016/j.medcli.2020.02.001
7. Фертиков В.И., Тихонов А.Н., Хрипунов Е.М., Егорова И.Ю. К формированию бактерий рода Listeria в эпоху позднего плейстоцена: факты и гипотезы. Сельскохозяйственная биология. 2009; 44(6): 18-26.
8. Бакулин Н.И., Батуро А.П., Блинкова Л.П., Бурова С.А., Воропаева С.Д., Гавристова И.А. и др. Клиническая лабораторная аналитика. М.: Агат-Мед; 2003.
9. Meghdadi H., Khosravi A.D., Sheikh A.F., Alami A., Nassira-bady N. Isolation and characterization of Listeria monocyto-genes from environmental and clinical sources by culture and PCR-RFLP methods. Iran J. Microbiol. 2019; 11(1): 7-12.
10. Еськова А.И., Бузолева Л.С., Ким А.В., Богатыренко Е.А., Голозубова Ю.С. Биотические факторы среды, влияющие на выживаемость листерий в морских экосистемах. Современные проблемы науки и образования. 2016; (5): 294.
11. Ibrahim S., Azab El-Liethy M., Abia A.L.K., AbdelGabbar M., Mahmoud Al Zanaty A., Mohamed Kamel M. Design of a bioaugmented multistage biofilter for accelerated municipal wastewater treatment and deactivation of pathogenic microorganisms. Sci. Total Environ. 2020; 703: 134786. https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2019.134786
12. Шепелин А.П., Полосенко О.В., Дятлов И.А. Листерии. Современный подход к проблеме выделения листерий с использованием питательных сред. Справочник заведующего КДЛ. 2018; (7): 33-48.
13. Полосенко О.В., Шепелин А.П., Марчихина И.И., Шолохова Л.П. Разработка питательных сред для выделения листерий. Инфекция и иммунитет. 2016; 6(3): 92. https://doi.org/10.15789/2220-7619-2016-3
14. Светоч Э.А., Ерусланов Б.В., Борзенков В.Н., Асташкин Е.И., Хаптанова Н.М., Карцев Н.Н. и др. Специфичность и чувствительность отечественной латексной тест-системы для идентификации Listeria monocytogenes. Дальневосточный журнал инфекционной патологии. 2019; (37): 81-2.
15. Magiorakos A.P., Srinivasan A., Carey R.B., Carmeli Y., Falagas M.E., Giske C.G., et al. Multidrug-resistant, extensively drug-resistant and pandrug-resistant bacteria: an international expert proposal for interim standard definitions for acquired resistance. Clin. Microbiol. Infect. 2012; 18(3): 268-81. https://doi.org/10.1111/j.1469-0691.2011.03570.x
16. Doumith M., Buchrieser C., Glaser P., Jacquet C., Martin P. Differentiation of the major Listeria monocytogenes serovars by multiplex PCR. J. Clin. Microbiol. 2004; 42(8): 3819-22. https://doi.org/10.1128/JCM.42.8.3819-3822.2004
17. Moura A., Criscuolo A., Pouseele H., Maury M.M., Leclercq A., Tarr C., et al. Whole genome-based population biology and epidemiological surveillance of Listeria monocytogenes. Nat. Microbiol. 2016; 2: 16185. https://doi.org/10.1038/nmicrobiol.2016.185
18. Maury M.M., Tsai Y.H., Charlier C., Touchon M., Chenal-Francisque V., Leclercq A., et al. Uncovering Listeria monocytogenes hypervirulence by harnessing its biodiversity. Nat. Genet. 2016; 48(3): 308-13. https://doi.org/10.1038/ng.3501
19. Patange A., O'Byrne C., Boehm D., Cullen P.J., Keener K., Bourke P. The effect of atmospheric cold plasma on bacterial stress responses and virulence using Listeria monocytogenes knockout mutants. Front. Microbiol. 2019; 10: 2841. https://doi.org/10.3389/fmicb.2019.02841
20. Chen Y., Chen Y., Pouillot R., Dennis S., Xian Z., Luchansky J.B., et al. Genetic diversity and profiles of genes associated with virulence and stress resistance among isolates from the 20102013 interagency Listeria monocytogenes market basket survey. PLoS One. 2020; 15(4): e0231393. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0231393
ORIGINAL RESEARCHES
21. Kaszoni-Ruckerl I., Mustedanagic A., Muri-Klinger S., Brugger K., Wagner K.H., Wagner M., et al. Predominance of distinct Listeria Innocua and Listeria monocytogenes in recurrent contamination events at dairy processing facilities. Microorganisms. 2020; 8(2): 234. https://doi.org/10.3390/microorganisms8020234
22. Wilson A., Gray J., Chandry P.S., Fox E.M. Phenotypic and genotypic analysis of antimicrobial resistance among Listeria monocytogenes isolated from Australian food production chains. Genes (Basel). 2018; 9(2): 80. https://doi.org/10.3390/genes9020080
23. Mackiw E., Stasiak M., Kowalska J., Kucharek K., Korsak D., Postupolski J. Occurrence and characteristics of Listeria monocytogenes in ready-to-eat meat products in Poland. J. Food Prot. 2020; 83(6): 1002-9. https://doi.org/10.4315/JFP-19-525
24. Kuch A., Goc A., Belkiewicz K., Filipello V., Ronkiewicz P., Gol^biewska A., et al. Molecular diversity and antimicrobial susceptibility of Listeria monocytogenes isolates from invasive infections in Poland (1997-2013). Sci. Rep. 2018; 8(1): 14562. https://doi.org/10.1038/s41598-018-32574-0
25. Al-Mashhadany D.A. Occurrence and antibiogram of Listeria monocytogenes isolates from retail meat shops at Erbil city, Kurdistan region, Iraq. Ital. J. Food Saf. 2019; 8(4): 8451. https://doi.org/10.4081/ijfs.2019.8451
26. Baquero F., F Lanza V., Duval M., Coque T.M. Ecogenetics of antibiotic resistance in Listeria monocytogenes. Mol. Microbiol. 2020; 113(3): 570-9. https://doi.org/10.1111/mmi.14454
27. Maung A.T., Mohammadi T.N., Nakashima S., Liu P., Masuda Y., Honjoh K.I., et al. Antimicrobial resistance profiles of Listeria monocytogenes isolated from chicken meat in Fukuoka, Japan. Int. J. Food Microbiol. 2019; 304: 49-57. https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2019.05.016
28. Tahoun A.B.M.B., Abou Elez R.M.M., Abdelfatah E.N., Elsohaby I., El-Gedawy A.A., Elmoslemany A.M. Listeria monocytogenes in raw milk, milking equipment and dairy workers: Molecular characterization and antimicrobial resistance patterns. J. Glob. Antimicrob. Resist. 2017; 10: 264-70. https://doi.org/10.1016/jjgar.2017.07.008
29. Caruso M., Fraccalvieri R., Pasquali F., Santagada G., Lator-re L.M., Difato L.M., et al. Antimicrobial susceptibility and multilocus sequence typing of Listeria monocytogenes isolated over 11 years from food, humans, and the environment in Italy. Foodborne Pathog. Dis. 2020; 17(4): 284-94. https://doi.org/10.1089/fpd.2019.2723
30. Voronina O.L., Ryzhova N.N., Kunda M.S., Kurnaeva M.A., Semenov A.N., Aksenova E.I., et al. Diversity and pathogenic potential of Listeria monocytogenes isolated from environmental sources in the Russian Federation. Int. J. Modern Eng. Res. Technol. 2015; 5(3): 5-15.
31. Воронина О.Л., Кунда М.С., Рыжова Н.Н., Кутузова А.В., Аксёнова Е.И., Карпова Т.И. и др. Листериоз: генотипиро-вание как ключ к выявлению возможного источника заражения. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2019; 21(4): 261-73. https://doi.org/10.36488/cmac.2019A261-273
32. Psareva E.K., Egorova I.Y., Liskova E.A., Razheva I.V., Gladkova N.A., Sokolova E.V., et al. Retrospective study of Listeria monocytogenes isolated in the territory of inner Eurasia from 1947 to 1999. Pathogens. 2019; 8(4): 184. https://doi.org/10.3390/pathogens8040184
33. Coban A., Pennone V., Sudagidan M., Molva C., Jordan K., Aydin A. Prevalence, virulence characterization, and genetic relatedness of Listeria monocytogenes isolated from chicken retail points and poultry slaughterhouses in Turkey. Braz. J. Microbiol. 2019; 50(4): 1063-73. https://doi.org/10.1007/s42770-019-00133-y
34. Al-Ali H.J., Al-Rodhan M.A., Al-Hilali S.A., Al-Charrakh A.H., Al-Mohana A.M., Hadi Z.J. Molecular detection of serotype
groups of Listeria monocytogenes isolated from gallbladder of cattle and sheep in Iraq. Vet. World. 2018; 11(4): 431-6. https://doi.org/10.14202/vetworld.2018.431-6
REFERENCES
1. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Vital signs: Listeria illnesses, deaths, and outbreaks — United States, 20092011. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 2013; 62(22): 448-52.
2. European Food Safety Authority (EFSA). EU summary report on trends and sources of zoonoses, zoonotic agents and food-borne outbreaks in 2015. EFSA. 2016; 14(12): e04634. https://doi.org/10.2903Zi.efsa.2016.4634
3. Vorob'ev A.A., Bykov A.S., Boychenko M.N. Medical Microbiology, Virology and Immunology: Textbook for Medical School [Meditsinskaya mikrobiologiya, virusologiya i immu-nologiya: Uchebnik dlya studentov meditsinskikh vuzov]. Moscow: MIA; 2022. (in Russian)
4. Tartakovskiy I.S., Maleev V.V., Ermolaeva S.A. Listeria: Role in Infectious Pathology and Laboratory Diagnostics [Listerii: rol' v infektsionnoy patologii cheloveka i laboratornaya diag-nostika]. Moscow: Meditsina dlya vsekh; 2001. (in Russian)
5. Cao X., Wang Y., Wang Y., Li H., Luo L., Wang P., et al. Prevalence and characteristics of Listeria ivanovii strains in wild rodents in China. Vector Borne Zoonotic Dis. 2019; 19(1): 8-15. https://doi.org/10.1089/vbz.2018.2317
6. Lepe J.A. Current aspects of listeriosis.Med. Clin. (Barc.). 2020; 154(11): 453-8. https://doi.org/10.1016/j.medcli.2020.02.001
7. Fertikov V.I., Tikhonov A.N., Khripunov E.M., Egorova I.Yu. On the occasion of formation of bacteria of Listeria genus in epoch of late pleistocene: the facts and hypothesis. Sel'skok-hozyaystvennaya biologiya. 2009; 44(6): 18-26. (in Russian)
8. Bakulin N.I., Baturo A.P., Blinkova L.P., Burova S.A., Voropae-va S.D., Gavristova I.A., et al. Clinical Laboratory Analytics [Klinicheskaya laboratornaya analitika]. Moscow: Agat-Med; 2003. (in Russian)
9. Meghdadi H., Khosravi A.D., Sheikh A.F., Alami A., Nassir-abady N. Isolation and characterization of Listeria monocyto-genes from environmental and clinical sources by culture and PCR-RFLP methods. Iran J. Microbiol. 2019; 11(1): 7-12.
10. Es'kova A.I., Buzoleva L.S., Kim A.V., Bogatyrenko E.A., Golozubova Yu.S. Biotic environmental factors, affect survival of Listeria monocytogenes in marine ecosystems. Sovremennye problemy nauki i obrazovaniya. 2016; (5): 294. (in Russian)
11. Ibrahim S., Azab El-Liethy M., Abia A.L.K., Abdel-Gabbar M., Mahmoud Al Zanaty A., Mohamed Kamel M. Design of a bioaugmented multistage biofilter for accelerated municipal wastewater treatment and deactivation of pathogenic microorganisms. Sci. Total Environ. 2020; 703: 134786. https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2019.134786
12. Shepelin A.P., Polosenko O.V., Dyatlov I.A. Listeria. Modern approach to the problem of Listeria isolation using nutrient media. Spravochnik zaveduyushchego KDL. 2018; (7): 33-48. (in Russian)
13. Polosenko O.V., Shepelin A.P., Marchikhina I.I., Sholokhova L.P. Designing nutrient media for Listeria isolation. Infektsiya i immunitet. 2016; 6(3): 92.
https://doi.org/10.15789/2220-7619-2016-3 (in Russian)
14. Svetoch E.A., Eruslanov B.V., Borzenkov V.N., Astashkin E.I., Khaptanova N.M., Kartsev N.N., et al. Specificity and sensitivity of the domestic latex test-system for Listeria monocyto-genes identification. Dal'nevostochnyy zhurnal infektsionnoy patologii. 2019; (37): 81-2. (in Russian)
15. Magiorakos A.P., Srinivasan A., Carey R.B., Carmeli Y., Fa-lagas M.E., Giske C.G., et al. Multidrug-resistant, extensively drug-resistant and pandrug-resistant bacteria: an international expert proposal for interim standard definitions for acquired resistance. Clin. Microbiol. Infect. 2012; 18(3): 268-81. https://doi.org/10.1111/j.1469-0691.2011.03570.x
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
16. Doumith M., Buchrieser C., Glaser P., Jacquet C., Martin P. Differentiation of the major Listeria monocytogenes serovars by multiplex PCR. J. Clin. Microbiol. 2004; 42(8): 3819-22. https://doi.org/10.1128/JCM.42.8.3819-3822.2004
17. Moura A., Criscuolo A., Pouseele H., Maury M.M., Leclercq A., Tarr C., et al. Whole genome-based population biology and epidemiological surveillance of Listeria monocytogenes. Nat. Microbiol. 2016; 2: 16185. https://doi.org/10.1038/nmicrobiol.2016.185
18. Maury M.M., Tsai Y.H., Charlier C., Touchon M., Chenal-Francisque V., Leclercq A., et al. Uncovering Listeria monocyto-genes hypervirulence by harnessing its biodiversity. Nat. Genet. 2016; 48(3): 308-13. https://doi.org/10.1038/ng.3501
19. Patange A., O'Byrne C., Boehm D., Cullen P.J., Keener K., Bourke P. The effect of atmospheric cold plasma on bacterial stress responses and virulence using Listeria monocytogenes knockout mutants. Front. Microbiol. 2019; 10: 2841. https://doi.org/10.3389/fmicb.2019.02841
20. Chen Y., Chen Y., Pouillot R., Dennis S., Xian Z., Luchan-sky J.B., et al. Genetic diversity and profiles of genes associated with virulence and stress resistance among isolates from the 2010-2013 interagency Listeria monocytogenes market basket survey. PLoS One. 2020; 15(4): e0231393. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0231393
21. Kaszoni-Ruckerl I., Mustedanagic A., Muri-Klinger S., Brugger K., Wagner K.H., Wagner M., et al. Predominance of distinct Listeria Innocua and Listeria monocytogenes in recurrent contamination events at dairy processing facilities. Microorganisms. 2020; 8(2): 234.
https://doi.org/10.3390/microorganisms8020234
22. Wilson A., Gray J., Chandry P.S., Fox E.M. Phenotypic and genotypic analysis of antimicrobial resistance among Listeria monocytogenes isolated from Australian food production chains. Genes (Basel). 2018; 9(2): 80. https://doi.org/10.3390/genes9020080
23. Mackiw E., Stasiak M., Kowalska J., Kucharek K., Korsak D., Postupolski J. Occurrence and characteristics of Listeria monocytogenes in ready-to-eat meat products in Poland. J. FoodProt. 2020; 83(6): 1002-9. https://doi.org/10.4315/JFP-19-525
24. Kuch A., Goc A., Belkiewicz K., Filipello V., Ronkiewicz P., Gol^biewska A., et al. Molecular diversity and antimicrobial susceptibility of Listeria monocytogenes isolates from invasive infections in Poland (1997-2013). Sci. Rep. 2018; 8(1): 14562. https://doi.org/10.1038/s41598-018-32574-0
25. Al-Mashhadany D.A. Occurrence and antibiogram of Listeria monocytogenes isolates from retail meat shops at Erbil city, Kurdistan region, Iraq. Ital. J. Food Saf. 2019; 8(4): 8451. https://doi.org/10.4081/ijfs.2019.8451
Информация об авторах
Алексеева Елена Андреевна — к.м.н., зав. бактериологической лабораторией Центра гигиены и эпидемиологии в Вологодской области, Вологда, Россия, https://orcid.org/0000-0002-1860-0026
Полосенко Ольга Вадимовна — к.б.н., в.н.с. сектора микробиологических исследований ЛМиФХМА научно-производственного отдела питательных сред ГНЦ ПМБ, Оболенск, Россия, https://orcid.org/0000-0001-5961-9041
Фурсова Надежда Константиновна — к.б.н., в.н.с. лаб. антимикробных препаратов отдела молекулярной микробиологии ГНЦ ПМБ, Оболенск, Россия, https://orcid.org/0000-0001-6053-2621
Асташкин Евгений Ильич — к.м.н., в.н.с. лаб. антимикробных препаратов отдела молекулярной микробиологии ГНЦ ПМБ, Оболенск, Россия, https://orcid.org/0000-0002-3559-9071 Борзенков Валерий Николаевич — к.б.н., с.н.с. лаб. антимикробных препаратов отдела молекулярной микробиологии ГНЦ ПМБ, Оболенск, Россия, https://orcid.org/0000-0002-6382-4299 Кисличкина Ангелина Александровна — к.б.н., с.н.с. отдела коллекционных культур ГНЦ ПМБ, Оболенск, Россия, https://orcid.org/0000-0001-8389-2494
26. Baquero F., F Lanza V., Duval M., Coque T.M. Ecogenetics of antibiotic resistance in Listeria monocytogenes. Mol. Microbiol. 2020; 113(3): 570-9. https://doi.org/10.1111/mmi.14454
27. Maung A.T., Mohammadi T.N., Nakashima S., Liu P., Masu-da Y., Honjoh K.I., et al. Antimicrobial resistance profiles of Listeria monocytogenes isolated from chicken meat in Fukuoka, Japan. Int. J. Food Microbiol. 2019; 304: 49-57. https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2019.05.016
28. Tahoun A.B.M.B., Abou Elez R.M.M., Abdelfatah E.N., Elso-haby I., El-Gedawy A.A., Elmoslemany A.M. Listeria monocytogenes in raw milk, milking equipment and dairy workers: Molecular characterization and antimicrobial resistance patterns. J. Glob. Antimicrob. Resist. 2017; 10: 264-70. https://doi.org/10.1016/jjgar.2017.07.008
29. Caruso M., Fraccalvieri R., Pasquali F., Santagada G., La-torre L.M., Difato L.M., et al. Antimicrobial susceptibility and multilocus sequence typing of Listeria monocytogenes isolated over 11 years from food, humans, and the environment in Italy. Foodborne Pathog. Dis. 2020; 17(4): 284-94. https://doi.org/10.1089/fpd.2019.2723
30. Voronina O.L., Ryzhova N.N., Kunda M.S., Kurnaeva M.A., Semenov A.N., Aksenova E.I., et al. Diversity and pathogenic potential of Listeria monocytogenes isolated from environmental sources in the Russian Federation. Int. J. Modern Eng. Res. Technol. 2015; 5(3): 5-15.
31. Voronina O.L., Kunda M.S., Ryzhova N.N., Kutuzova A.V., Aksenova E.I., Karpova T.I., et al. Listeriosis: genotyping as a key for identification a possible source of infection. Klinicheskaya mikrobiologiya i antimikrobnaya khimioterapiya. 2019; 21(4): 261-73.
https://doi.org/10.36488/cmac.20194.261-273 (in Russian)
32. Psareva E.K., Egorova I.Y., Liskova E.A., Razheva I.V., Glad-kova N.A., Sokolova E.V., et al. Retrospective study of Listeria monocytogenes isolated in the territory of inner Eurasia from 1947 to 1999. Pathogens. 2019; 8(4): 184. https://doi.org/10.3390/pathogens8040184
33. Coban A., Pennone V., Sudagidan M., Molva C., Jordan K., Aydin A. Prevalence, virulence characterization, and genetic relatedness of Listeria monocytogenes isolated from chicken retail points and poultry slaughterhouses in Turkey. Braz. J. Mi-crobiol. 2019; 50(4): 1063-73. https://doi.org/10.1007/s42770-019-00133-y
34. Al-Ali H.J., Al-Rodhan M.A., Al-Hilali S.A., Al-Charrakh A.H., Al-Mohana A.M., Hadi Z.J. Molecular detection of serotype groups of Listeria monocytogenes isolated from gallbladder of cattle and sheep in Iraq. Vet. World. 2018; 11(4): 431-6. https://doi.org/10.14202/vetworld.2018.431-6
Information about the authors
Elena A. Alekseeva — Cand. Sci. (Med.), Head, Bacteriological laboratory, Center of Hygiene and Epidemiology in the Vologda region, Vologda, Russia, https://orcid.org/0000-0002-1860-0026 Olga V. Polosenko — Cand. Sci. (Biol.), leading researcher, Microbiological research department, State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology, Obolensk, Russia, https://orcid.org/0000-0001-5961-9041
Nadezhda K. Fursova — Cand. Sci. (Biol.), leading researcher, Antimicrobial agents laboratory, Molecular microbiology department, State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology, Obolensk, Russia, https://orcid.org/0000-0001-6053-2621 Evgeny I. Astashkin — Cand. Sci. (Med.), senior researcher, Antimicrobial agents laboratory, Molecular microbiology department, State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology, Obo-lensk, Russia, https://orcid.org/0000-0002-3559-9071 Valery N. Borzenkov — Cand. Sci. (Biol.), senior researcher, Antimicrobial agents laboratory, Molecular microbiology department, State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology, Obo-lensk, Russia, https://orcid.org/0000-0002-6382-4299
ORIGINAL RESEARCHES
Коломбет Любовь Васильевнам — д.б.н., зав. научной частью ГНЦ ПМБ, Оболенск, Россия, kolombet@obolensk.org, https://orcid.org/0000-0001-9637-7790
Шепелин Анатолий Прокопьевич — д.б.н., зам. директора по научно-производственной работе ГНЦ ПМБ, Оболенск, Россия, https://orcid.org/0000-0002-8253-7527
Миронов Андрей Юрьевич — д.м.н., профессор, рук. отдела микробиологии МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, Москва, Россия, https://orcid.org/0000-0002-8544-5230
Участие авторов. Алексеева E.A. — концепция исследования, сбор и обработка материала, сбор литературных данных; По-лосенко О.В. — обработка материала, написание текста, подготовка иллюстративного материала; Фурсова Н.К. — концепция и дизайн исследования, написание текста, редактирование; Асташкин Е.И. — обработка материала, статистическая обработка данных; Борзенков В.Н. — обработка материала; Кислич-кина А.А. — сбор литературных данных и обработка материала, статистическая обработка данных; Коломбет Л.В. — редактирование; Шепелин А.П. — дизайн исследования, написание текста; Миронов А.Ю. — редактирование.
Статья поступила в редакцию 05.04.2022; принята к публикации 05.07.2022; опубликована 30.08.2022
Angelina A. Kislichkina — Cand. Sci. (Biol.), senior researcher, Microbial collection department, State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology, Obolensk, Russia, https://orcid.org/0000-0001-8389-2494
Liubov V. KolombeP — D. Sci. (Biol.), Head, Science Department, State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology, Obolensk, Russia, kolombet@obolensk.org, https://orcid.org/0000-0001-9637-7790
Anatoly P. Shepelin — D. Sci. (Biol.), Deputy director, State Research Center for Applied Microbiology and Biotechnology, Obolensk, Russia, https://orcid.org/0000-0002-8253-7527
Andrey Yu. Mironov — D. Sci. (Med.), Professor, Head, Department of microbiology, G.N. Gabrichevsky Moscow Research Institute for Epidemiology and Microbiology, Moscow, Russia, https://orcid.org/0000-0002-8544-5230
Author contribution. Alekseeva E.A. — developing a research concept, material collecting and processing, published data survey; Polosenko O.V. — material processing, writing the text, preparing illustrative material; Fursova N.K. — concept and design of the research, writing the text, editing; Astashkin E.I. — material processing, statistical data processing; Borzenkov V.N. — material processing; Kislichkina A.A. — literature data survey and material processing, statistical data processing; Kolombet L.V. — editing; Shepelin A.P. — research designing, writing the text; Mironov A.Yu. — editing.
The article was submitted 05.04.2022; accepted for publication 05.07.2022;
published 30.08.2022
