CC BY
11
В связи с этим целью работы было оценить цито-токсическое влияние рекомбинантного человеческого ИФН-Х1 и его пегилированной формы, на клетки конъюнктивы человека.
ИНФ-Х-1 использовали в концентрациях 37 мкг/ мл, 370 мкг/мл и ПЭГ ИНФ- Х-1, полученного методом электронно-лучевой иммобилизации, в концентрациях 42 мкг/мл, 420 мкг/мл. Оба препарата произведены в АО «СЦФБ» (Россия). Степень чистоты препаратов> 97%. Для культивирования использовали культуру клеток нормальной конъюнктивы человека Chang conjunctiva clone 1-5c-4. Цитотоксическое действие препаратов оценивали в МТТ-тесте. Пролиферативную активность клеток изучали на клеточном анализаторе xCELLigence System (Roche Applies Science, США).
По результатам МТТ-теста жизнеспособность клеток конъюнктивы под влиянием ИНФ-Х-1 в концентрации 37 мкг/мл и ПЭГ ИНФ- X в концентрации 42 мкг/ мл была сопоставимой и составила 92%, 90%, соответственно. Десятикратное увеличение концентрации ИФН-Х1 и ПЭГ ИФН-Х1 снижало жизнеспособность клеток на 15-20%. Также пролиферативная активность клеток конъюнктивы после добавления ИНФ-Х1 и ПЭГ ИНФ-X была сопоставима с пролиферативной активностью клеток в контроле в течение 48 часов наблюдения в режиме реального времени.
Таким образом, препараты ИНФ-X-1 и ПЭГ ИНФ-Х-1 не обладают выраженной цитотоксичностью на клетки конъюнктивы человека и могут считаться безопасными в качестве активных фармацевтических субстанций для разработки лекарственных препаратов в лечении вирусных поражений конъюнктивы.
Литература:
1. Ye L., Schnepf D., Staeheli P. Nat. Rev. Immunol. 2019. Vol. 19.
N.10. P. 614-625.
2. Antony F., Pundkar C., Sandey M et al. Immunol. 2021. Vol. 206.
N.8. P. 1866-1877.
ПРИМЕНЕНИЕ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПРИ
ПОВРЕЖДЕНИИ ГОЛОСОВОГО ОТДЕЛА
ГОРТАНИ
Н.А. Бояринова
ЦГМА ДПО ФГБУ Управления делами Президента
Российской Федерации, Москва, Россия
e-mail: boyarinova.natasha98@yandex.ru
Ключевые слова: стволовые клетки, рубцовые повреждения голосовых складок.
Острые и хронические воспаления гортани; травмы различной этиологии, в том числе ятрогенные; ожоги — все это, в итоге, становится причиной формирования рубцов, которые приводят к нарушению нормального смыкания голосовых складок и стенозу гортани. В результате возникает стойкое нарушение голосовой и дыхательной функций [1]. К сожалению, существующее многообразие методик по реабилитации голосовой функции не приводит к полному ее восстановлению и регрессу нарушений в структуре голосовых складок [2].
Целью данной работы является обзор литературных данных для изучения возможностей стволовых клеток в восстановлении структуры и функций голосовых складок при их повреждении.
Были проанализированы статьи за период с 2010 по 2021. Для поиска использовалась база данных
Medline (Pubmed). Статьи представляли собой преимущественно доклинические исследования на животных.
Рубцовая ткань представляет собой хаотично расположенные пучки коллагеновых волокон. В результате пространственной дезорганизации экстрацеллюлярного матрикса собственной пластинки слизистой оболочки и дисбаланса белков, голосовая складка, представленная такой тканью, не может выполнять свои функции. Стволовые клетки способны увеличивать регенерацию голосовых складок, приводя к образованию ткани, по морфологическим и биомеханическим свойствам приближающейся к строению нативной [3]. Стволовые клетки ингибируют профибротические эффекты фибро-бластов, усиливают экспрессию фактора роста фибро-бластов, фактора роста гепатоцитов, нормализуют экспрессию генов проколлагена, TGF pi, ИЛ-1р, ИЛ-17р и фактора некроза опухоли, оказывая тем самым анти-фибротическое действие и моделируя воспалительную реакцию, чем усиливают регенерацию голосовых складок и улучшают их вибрационные свойства [4].
Клеточная терапия демонстрирует перспективу в репарации структуры и функций голосового отдела гортани. Стволовые клетки эффективно восстанавливают поврежденные голосовые складки, приближая их строение к нативным структурам.
Литература:
1. G. de Bonnecaze, Laryngoscope, 2016.
2. V.M. Svistushkin, Vestn. RAMN, 2016.
3. V.L. Wingstrand, PLOS One, 2016.
4. Y.-M. Kim, Ann Otol Rhinol Laryngol, 2013.
ПЕРСПЕКТИВНЫЙ ИНГИБИТОР
КАЛЬЦИФИКАЦИИ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ
СИСТЕМЫ — КРЕНИГАЦЕСТАТ (LY3039478)
Н.В. Боярская1, О.С. Качанова1, А.А. Лобов1,
А.А. Шишкова1, Б.Р. Зайнуллина2,
A.А. Пичугин1, А.А. Филиппов1,
B.Е. Успенский1, А.Б. Малашичева1
1 ФГБУ НМИЦ им. В.А. Алмазова Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия;
2 Санкт-Петербургский государственный университет, Санкт-Петербург, Россия;
e-mail: nad.vb@yandex.ru
Ключевые слова: кальцификация сердечно-сосудистой системы, ингибитор кальцификации
Кальцификация сердечно-сосудистой системы может происходить в результате осложнений различных заболеваний или являться самостоятельной патологией. Значительную часть этой патологии занимает кальцинирующая болезнь аортального клапана (КБАК). Заболевание смертельно и единственным вариантом лечения является хирургическая замена клапана.
Основой развития КБАК является остеогенная диф-ференцировка интерстициальных клеток клапана (ИКК). В предыдущих исследованиях показана роль сигнального пути Notch как в развитии КБАК, так и в остеогенной дифференцировке ИКК. Таким образом использование ингибиторов передачи сигналов Notch в ИКК может рассматриваться как перспективный подход для лечения КБАК.
Цель данной работы — тестирование ингибиторов сигнального пути Notch для подавления остеогенной дифференцировки первичный культур ИКК, полученных
от пациентов с КБАК. Выделенные ИКК из операционного материала с КБАК были стимулированы в сторону остеогенной дифференцировки с добавлением выбранных ингибиторов Notch: CB-103 или кренигацестата, и без них. Степень дифференцировки исследовали с помощью ПЦР в реальном времени, анализировали уровень экспрессии маркеров остеодифференцировки. А также измеряя уровень кальцификации с помощью окрашивания Ализариновым красным. Цитотоксичность изучали с помощью МТТ-теста. Для понимания молекулярных механизмов при использовании ингибиторов остеогенной дифференцировки проводили протеомный анализ с помощью скорострельной протеомики с ионной подвижностью на платформе TimsToF Pro.
Кренигацестат в концентрациях 50-100 нМ полностью подавляет остеогенную дифференцировку и не оказывает очевидного цитотоксического действия. Ингибитор CB-103 не оказывает значимого ингибирую-щего воздействия на остеодифференцировку.
При помощи протеомного анализа были найдены потенциальные мишени кренигацестата. Нами было выявлено изменение экспрессии белков, ассоциированных с развитием скелета, например, фибриллина 1, и белков, ассоциированных с сердечно-сосудистыми заболеваниями, например, LMOD1. Однако функция большинства из обнаруженных белков не была описана в контексте КБАК ранее, что свидетельствует о недостаточном понимании механизма действия кренигацестата и фундаментальных механизмов остеогенной дифференцировки ИКК.
Другими исследователями кренигацестат был изучен в контексте лечения опухолевых клеток in vitro, в концентрациях схожих с нашими от 100нМ до 10мкМ [1]. И был проверен в клинических испытаниях в перораль-ной форме с дозировками 25, 50 и 75 мг с оптимальной пероральной дозировкой 50 мг и максимальной дозой 100 мг [2]. Он обладает контролируемым токсическим действием без опасных побочных эффектов.
Таким образом, кренигацестат эффективно подавляет остеогенную дифференцировку ИКК, мы знаем эффективную дозировку кренигацестата для ингибиро-вания остеогенной дифференциации ИКК in vitro и интервал дозирования, который безопасен для людей при пероральной или внутривенном введении. Мы предполагаем, что кренигацестат будет эффективен в клинических испытаниях против кальцификации сосудов, но все же считаем, что необходимы дополнительные эксперименты с тканями (кальцинированный аортальный клапан) и моделями животных. Исследование выполнено при финансовой поддержке Министерства Науки и Высшего Образования Российской Федерации (номер соглашения 075-15-2020-901).
Литература:
1. Mancarella S., Serino G., Dituri F. et al. Cell Death Differ. 2020.
27(8):2330-2343
2. Yuen E., Posada M., Smith C. et al. Cancer Chemotherapy and
Pharmacology. 2019. 83 (3): 483-92.
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ЛИОФИЛИЗАТА КОНДИЦИОНИРОВАННОЙ СРЕДЫ И АМНИОТИЧЕСКОЙ МЕМБРАНЫ ПРИ МЕСТНЫХ ЛУЧЕВЫХ ПОРАЖЕНИЯХ
В.А. Брунчуков, Т.А. Астрелина, А.А. Расторгуева, И.В. Кобзева, Ю.Б. Сучкова, В.А. Никитина, В.А. Брумберг, Д.Ю. Усупжанова, Е.Е. Ломоносова, Н.В. Соколова, С.В. Лищук, Е.А. Дубова, К.А. Павлов, А.С. Самойлов
ФГБУ ГНЦ РФ Федеральный медицинский биофизический центр им. А.И. Бурназяна, Москва, Россия
e-mail: brunya2008@yandex.ru
Ключевые слова: местные лучевые поражения, амниоти-ческая мембрана, децеллюляризация, кондиционированная среда
Актуальность: при местных лучевых поражениях (МЛП) большой площади не всегда удается получить трансплантаты кожи для укрытия в нужном объеме. Одним из перспективных методов лечения МЛП является применение децеллюляризованной амниотической мембраны человека (АМ), служащей альтернативным источником укрывного материала для лечения различных повреждений организма [1-2].
Цель: изучить эффективность комбинированной терапии МЛП с применением АМ и лиофилизата кондиционированной среды мезенхимальных стромальных клеток плаценты человека (КС).
Материалы и методы: 28 лабораторных животных (крысы Wistar, самцы с массой 230,0± 20,0 граммов). Животные были рандомизированы случайным образом и разделены на 4 группы (n=7) в зависимости от вида проводимой на 21 сутки терапии после моделирования МЛП:
К — контроль без терапии;
А — фиксация АМ узловыми швами к краям язвенной поверхности;
ЛП — интрадермальное введение КС вокруг зоны поражения;
А+ЛП — интрадермальное введение КС и последующая фиксация АМ к краям язвенной поверхности МЛП.
Каждое животное наблюдали 1 раз в неделю до 112 суток, измеряли зону поражения МЛП кожи, рассчитывали площадь язвенной поверхности. На 112 день эксперимента от животных получали биоптат с МЛП для проведения гистологического исследования. В качестве статистического метода использовали U-критерий Манна-Уитни.
Результаты: на 112 день эксперимента регистрировали наименьшую площадь МЛП в группе А+ЛП — 0,08 ± 0,08 см2. В группах А, ЛП и К площадь МЛП составила 0,12 ±0,08, 0,58 ± 0,23 и 2,15 ± 0,57 см2, соответственно. Статистически значимые различия отмечали в группе К по сравнению с другими группами (p<0,05).
Полное заживление МЛП отмечали у 80% животных в группе А+ЛП, в группах А, ЛП и К у 67%, 25% и 0% животных.
Таким образом, по клинической картине заживления была выявлена лидирующая группа — А+ЛП. При патогистологической оценке в группе А+ЛП отмечали дефект кожи с грануляционной тканью и участками фиброза, либо заживший дефект с толщиной эпителиального пласта 5-10 клеток. Дерма фиброзирована с единичными волосяными фолликулами. Подкожная мышца
