CC BY
10
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 53
содержание VEGF-R1 оказалось в среднем в 3 раза ниже, чем в клетках обеих опухолевых линий (BRO — ДMFI = 425; А431 - ДMFI = 302; ПФЧ - ДMFI = 123). Далее на проточном цитометре при помощи разработанной нами методики экстракции интактных ядер был измерен уровень ядерного VEGF-R1. Полученные данные свидетельствовали о высоком ядерном содержании рецептора в опухолевых клетках и практически полном его отсутствии в ядрах нормальных (ПФЧ — ДMFI = 12,7). Причем было отмечено, что в наиболее злокачественных клетках BRO количество ядерного VEGF-R1 оказалось выше такового для А431 в 1,75 раза ^О — ДMFI = 300; А431 — ДMFI = 172).
Заключение. Доказана внутриклеточная, но не поверхностная локализация VEGF-R1, что указывает на интрак-ринный механизм стимуляции рецептора и подтверждает неэффективность применения моноклональных антител для его ингибирования. Данные о наличии VEGF-R1 в ядрах исключительно опухолевых клеток и обнаруженная нами прямая связь между количеством ядерного рецептора и агрессивностью опухолевой клетки позволяют рассматривать содержание VEGF-R1 в ядре в качестве нового прогностического маркера в онкологии и, главное, подтверждают справедливость его выбора в качестве новой молекулярной мишени для терапии новообразований.
В.К. Новоторцев, В.Е. Филатов, М.Е. Кукушкин, А.Г. Мажуга, Е.К. Белоглазкина, Н.В. Зык
разработка новых потенциальных противоопухолевых препаратов -производных
диспиро- и спироиндолинонов
Химический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
введение. В последнее время для успешной терапии раковых заболеваний требуются новые методы лечения опухолей. Одним из таких методов является применение непептидных низкомолекулярных препаратов, действующих на клеточные белки р53 и MDM2. Белок р53 является опухолевым супрессором и играет важную роль в жизненном цикле клетки — в активном состоянии он останавливает клеточный цикл и репликацию ДНК и запускает апоп-тоз клетки. MDM2 выполняет функцию эндогенного ингибитора р53. Низкомолекулярный ингибитор связывается с MDM2, за счет чего высвобождается белок р53, действие которого приводит к гибели клетки и разрушению опухоли. Таким образом, блокирование взаимодействия р53 и МDM2 является перспективным направлением в терапии раковых заболеваний. Так, большинство синтезируемых соединений-ингибиторов MDM2 в своей структуре содержат спироиндолиноновый фрагмент, за счет которого они эффективно препятствуют взаимодействию р53 с MDM2.
Цель исследования. Оптимизация и разработка новых методов синтеза 2 структурных типов диспиро- и спиро-индолинонов в целях их последующего фармакологического тестирования и определения оптимальных структурных параметров данных соединений.
Материалы и методы. Были разработаны методы получения диспироиндолинонов путем 1,3-диполярного ци-клоприсоединения с участием продукта взаимодействия
изатинов с тиогидантоинами — производными 2-тиоксо-тетрагидро-4Н-имидазол-4-онов, и азометин-илидов с образованием соединений, в структуре которых имеется жесткий каркас из 3 спиро-сочлененных гетероциклов, в основе которых лежит спироиндолиноновое ядро. Также разработаны методы получения спироиндолинонов по реакции 1,3-диполярного циклоприсоединения с участием (3-имино)индолин-2-онов и азометин-илидов с образованием соединений, также содержащих спироиндолиноно-вый фрагмент и имеющих 2 спиро-сочлененных цикла. Структура получаемых соединений была подтверждена с использованием физико-химических методов, таких как ЯМР-спектроскопия, масс-спектрометрия высокого разрешения и рентгено-структурный анализ.
Результаты. Предложен универсальный метод синтеза исследуемых структурных типов диспиро- и спироиндолинонов. На клеточных линиях LNCap, PC-3, HCT-116(+/+) и HCT-116(-/-) исследована цитотоксичность полученных соединений и определены предварительные соединения-лидеры. Был получен монокристалл одного из исследуемых диспироиндолинонов, благодаря чему однозначно установлена структура данного соединения.
Заключение. По полученным в ходе работы результатам было установлено, что исследуемые классы спиро- и ди-спироиндолинонов проявляют хорошую афинность к сайту связывания белков р53/MDM2, что дает возможность судить о перспективности проводимых исследований.
Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ № 16-33-60166.
С.Б. Оникиенко1, В.А. Черешнев2, А.В. Земляной1, В.Ю. Кравцов1,3, Н.В. Бычкова3, В.В. Лишенко1,3, И.В. Гужова4, Б.А. Маргулис4
ПЕРСОНАЛИЗИРОВАННАЯ КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ РАКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОЛОГИЧЕСКИХ, ЛАЗЕРНЫХ И ЯДЕРНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова,
Санкт-Петербург, Россия;
2ИИФ УрО РАН, Екатеринбург, Россия;
3ФГБУ ВЦЭРМ им. А.М. Никифорова МЧС России,
Санкт-Петербург, Россия;
4ФГБУН ИНЦ РАН, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Известно, что ингибиторы блокирующих противоопухолевый иммунный ответ PD1 и Tim-3 рецепторов Т-лимфоцитов повышают эффективность виротерапии рака. БТШ70 и пробиотик Streptococcus salivarius являются блокаторами PD1 и Tim-3 рецепторов. Низкомолекулярные производные бактериальных липополисахаридов (ЛПС), лазерное облучение кожи в зоне введения онколитических вирусов и лучевая терапия также повышают эффективность иммуновиротерапии рака.
Цель исследования. Разработать технологию персонализированной терапии рака на основе онколитического вируса Сендай (СеВ), БТШ70, пробиотика Streptococcus salivarius, производных бактериальных ЛПС и радиофармпрепаратов под контролем индивидуальных показателей пациента в ходе лечения.
54
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
материалы и методы. При отсутствии гиперэкспрессии PD1 и Tim-3+ рецепторов Т-лимфоцитов еженедельно вну-трикожно вводили СеВ в облученные ИК-лазером участки (n = 12). При гиперэкспрессии PD-1+ предварительно внутривенно вводили БТШ70 (0,05 мг/кг). При сохранении гиперэкспрессии PD1 дополнительно применяли Streptococcus salivarius, а при повышении экспрессии Tim-3 дополнительно вводили нетоксичные производные про-дигиозана (0,01 мг/кг), полученные при его обработке пучком электронов (заявка на патент РФ № 2017119461). При развитии резистентности к проводимой терапии дополнительно применяли радиофармпрепараты (пС-холин, пС-метионин). Критерии эффективности виротерапии — регрессия опухоли, выраженность цитопатических изменений в раковых клетках, уровень гранзима и перфорина в Т-лимфоцитах.
результаты. Методом проточной цитометрии установлено, что введение БТШ70 опухоленосителям снижало число CD8+PD1+ клеток в крови в 1,8—2,7 раза; CD8+PD-1+TIM-3+ клеток в 7,4-10,5 раза (р <0,05). Методом иммуноцитохимии выявлено, что БТШ70 увеличивал количество лимфоцитов без PD1-рецепторов в опухолевом инфильтрате более чем в 3 раза, в них повышался уровень гранзима и перфорина, активировались иммунные механизмы гибели опухолевых клеток. В контрольной группе (применение СеВ без учета индивидуальных показателей пациента) частичный регресс опухоли получен у 7 из 77 пациентов. При персонализированной иммуновиротерапии частичный регресс опухоли выявлен в 32 (50,8 %) из 63 случаев. После циторедуктивного хирургического лечения рака полный ответ на персонализированную терапию получен у 7 пациентов (9 %).
Заключение. Персонализированная терапия рака на основе СеВ, БТШ70, пробиотика Streptococcus salivarius, производных бактериальных ЛПС и лучевых технологий с учетом динамики индивидуальных показателей пациента позволяет существенно повысить эффективность лечения.
О.Л. Орлова, М.А. Дмитриева, Л.Л. Николаева, И.Д. Гулякин, А.П. Полозкова, Н.А. Оборотова, Ю.В. Родионова
выбор режима лиофилизации липосомальной дисперсии цифетрилина
ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия
введение. В лаборатории разработки лекарственных форм создана липосомальная лекарственная форма (ЛЛФ) отечественного аналога соматостатина - цифетрилина. Хранение ЛЛФ в жидком виде сопряжено с рядом проблем, наиболее существенными из которых являются окисление и гидролиз липосомальных фосфолипидов, а также ряд физических изменений (агрегация, слияние и др.) в липо-сомальной дисперсии. Поэтому для повышения устойчивости в процессе хранения предложена стабилизация ЛЛФ цифетрилина посредством сублимационной сушки.
Цель исследования. Выбор оптимального режима лиофилизации ЛЛФ цифетрилина.
материалы и методы. Сублимационная сушка Edwards Minifast DO. 2 (Ero Electronic S. p. A., Италия), ЛЛФ цифетрилина (ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России). Выбор режима сублимационной сушки ЛЛФ цифетрилина проводили на основании сравнительного анализа 2 способов лиофилизации — с «медленным» и «быстрым» замораживанием. При «медленном» замораживании использовали постепенное (ступенчатое) понижение температуры полок в камере сушки, при «быстром» — стремительное. Данные режимы лиофилизации сравнивали путем оценки качества полученных лиофили-затов по внешнему виду, регидратируемости, размеру везикул и уровню включения.
результаты. В ходе анализа полученных данных установлено, что способ замораживания не влияет на показатели качества конечного продукта и оба режима позволяют получить равноценные образцы ЛЛФ-лио цифетрилина. По внешнему виду полученные лиофилизаты представляли собой сухую пористую массу белого цвета, которая легко регидратировалась с образованием липосомальной дисперсии белого цвета. В обоих случаях включение цифетрилина в липосомы находилось на уровне 97 %, а средний диаметр липосом составил около 170 нм. Но поскольку режим с «быстрой» стадией замораживания требует меньших затрат времени и электрической энергии, он предложен для получения лиофилизата ЛЛФ цифетрилина.
Заключение. В ходе ряда экспериментов выбран оптимальный режим лиофилизации ЛЛФ цифетрилина, позволивший получить качественный продукт «цифетрилин липо-сомальный, лиофилизат для приготовления дисперсии для инъекций 6 мг» и заложить его на хранение с целью проведения комплекса химико-фармацевтических исследований.
Л.А. Островская1, Д.Б. Корман1, А.К. Грехова1, Н.В. Блюхтерова1, М.М. Фомина1, В.А. Рыкова1, А.Н. Осипов2, К.А. Абзаева3
экспериментальное изучение противоопухолевой Активности полиакрилата золота
ФГБУН ИБФХ РАН, Москва, Россия; 2ФГБУН ИХФ РАН, Москва, Россия; 3ИНЦ СО РАН, Иркутск, Россия
введение. Изучение золотосодержащих соединений в качестве потенциальных противоопухолевых препаратов признано одним из весьма перспективных направлений медико-биологических исследований в области онкологии. Ранее нами была впервые обнаружена значительная противоопухолевая активность препарата полиакрилата золота (аурумакрил), относящегося к новому для онкологии классу соединений — металлополиакрилатам.
Цель исследования. Изучение ростингибирующей и ци-тотоксической активности аурумакрила.
материалы и методы. Противоопухолевый эффект аурумакрила (20 мг/кг, в/б, 5-кратно) оценивался in vivo на моделях карциномы легких Льюис, аденокарциномы Акатол и аденокарциномы Са-755, цитотоксический эффект — in vitro в культуре клеток карциномы молочной железы человека MCF-7. Исследование in vitro включало оценку выживаемости клеток при воздействии аурумакрила
