CC BY
8
52
материалы конференции «отечественные противоопухолевые препараты»
противоопухолевым действием: фикоцианин и комплекс миксоксантофилла и осцилоксантина.
Л.Н. Николаевич1, И.В. Руденкова1, В.А. Гайдукевич2, В.А. Книжников2
оценка цитотоксических эффектов
ЦИКЛОДИПЕПТИДА PRO-PHE
на экспериментальной модели клоногенных опухолевых клеток in vitro
Институт физиологии НАН Беларуси, Минск, Беларусь; 2ИФОХНАН Беларуси, Минск, Беларусь
Введение. Клоногенные клетки опухоли обладают неограниченной пролиферативной способностью и высокой степенью выживаемости, за счет чего возможно повторное развитие опухоли. Поэтому исследование ответа клоногенных клеток на противоопухолевые препараты является перспективным направлением в поиске новых способов лечения онкологических заболеваний.
Цель исследования. Изучение цитотоксического действия циклодипептида Pro—Phe на клоногенные опухолевые клетки in vitro.
Материалы и методы. Исследования выполнены на клеточных линиях С6 (глиома крысы), HeLa (карцинома шейки матки человека), К562 (хроническая миелоидная лейкемия) и диплоидных клетках FL (амнион человека). Изучены цитотоксические эффекты цикло Pro—Phe в дозах 5, 50, 500, 1000, 5000 мкг методом МТТ-теста. Ингибиру-ющую активность субстанции циклодипептида Pro—Phe проверяли на экспериментальной модели опухолевых и диплоидных клеток перевиваемых линий С6 и FL в дозах 50, 500, 5000 мкг/мл, а также на клоногенных опухолевых клетках С6к/к и FLк/к в аналогичных дозах. Цикло-Pro-Phe вводили в монослойную культуру клеток на 24 ч. После инкубации подсчитывали количество клеток в камере Го-ряева. Ингибирующую активность рассчитывали по формуле: ИА = (К - О) / К х 100 %.
Результаты. Результаты исследований показали, что циклодипептид Pro-Phe характеризуется низкой степенью цитотоксичности. Индекс токсичности составляет 20-25 % при дозе 1000 мкг/мл. Обнаружено, что циклоди-пептид Pro-Phe не оказывает цитотоксического действия на диплоидные клетки амниона человека линии FL. На модели клоногенных клеток линии С6к/к показано, что ци-тотоксический эффект циклодипептида Pro-Phe наиболее выражен в дозе 1000 мкг/мл. Наибольшую чувствительность проявили клоногенные клетки С6к/к. Выживаемость клоногенных и неклоногенных клеток линии С6 составила 40 и 50 % соответственно.
Заключение. Результаты исследований показали, что по мере увеличения дозы цикло-Pro-Phe наблюдается подавление пролиферации опухолевых клоногенных клеток и увеличение частоты их гибели по механизму апоптоза. Модель клоногенных клеток может использоваться в качестве тест-системы in vitro для оценки цитотоксических, ингибирующих, антипролиферативных и апоптотических эффектов циклодипептидов на опухолевые клоногенные клетки.
С.И. Никулицкий, Е.Г. Тырсина ВОЗМОЖНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ VEGF-R1 В КАЧЕСТВЕ МИШЕНИ ДЛЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ТЕРАПИИ
ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия
Введение. Преимуществом таргетной противоопухолевой терапии является избирательность токсического действия на злокачественные клетки с минимальным повреждением нормальных клеток, что предопределяет поиск новых различий между ними. Одним из кандидатов на эту роль может служить рецептор фактора роста эндотелия сосудов I типа (VEGF-R1), который присутствует в большинстве опухолевых клеток, но не представлен в нормальных. Причем, как выяснилось, активация VEGF-R1 усиливает такие проявления злокачественности, как инвазия, миграция, метастазирование и выживаемость опухолевых клеток.
Цель исследования. В свете вышеизложенного мы решили проверить следующие положения: действительно ли экспрессия VEGF-R1 характерна исключительно для опухолевых клеток; присутствует ли рецептор в клеточном ядре, что свидетельствовало бы о его функциональной активности; и, наконец, имеется ли связь между количеством VEGF-R1 и степенью агрессивности неопластических клеток. Для ответа на эти вопросы мы оценили содержание рецептора в нормальных и опухолевых клетках человека, а также при помощи разработанного нами подхода к им-мунофлуоресцентной детекции белков в нативных клеточных ядрах на проточном цитометре определили уровень VEGF-R1 в ядрах клеток, различающихся по степени злокачественности.
Материалы и методы. Исследования проводили на 2 линиях опухолевых клеток — А431 (карцинома вульвы) и BRO (высокозлокачественная меланома). Контролем служила линия нормальных постнатальных фибробластов человека (ПФЧ). Локализацию и оценку содержания рецептора определяли при помощи иммуноцитохимического окрашивания (ИЦХ) и проточной цитофлуориметрии ^С). В ходе FC уровень VEGF-R1 в клетках и ядрах оценивали по величине ДMFI — разности средней интенсивности флуоресценции между опытными и контрольными образцами.
Результаты. По данным иммуноцитохимического исследования VEGF-R1 визуализировался внутриклеточно и в опухолевых, и в нормальных клетках, однако интенсивность окраски в обеих злокачественных линиях была выше. Для выявления рецептора в ядре препараты перед фиксацией обрабатывали 0,05 % раствором тритона Х-100, что значительно уменьшало долю цитозольного VEGF-R1. В результате было выявлено наличие рецептора в ядрах исключительно опухолевых клеток. Результаты ИЦХ были подтверждены и дополнены количественными данными FC. Эксперименты с интактными клетками показали практически полное отсутствие VEGF-R1 на цитоплазматиче-ской мембране как в опухолевых клетках А431 (ДМИ = 21,4) и BRO (ДMFI = 14,4), так и в нормальных ПФЧ (ДМИ = 15,8). В пермеабилизованных клетках рецептор регистрировали во всех 3 линиях, но в нормальных внутриклеточное
материалы конференции «отечественные противоопухолевые препараты» 53
содержание VEGF-R1 оказалось в среднем в 3 раза ниже, чем в клетках обеих опухолевых линий (BRO — ДMFI = 425; А431 - ДMFI = 302; ПФЧ - ДMFI = 123). Далее на проточном цитометре при помощи разработанной нами методики экстракции интактных ядер был измерен уровень ядерного VEGF-R1. Полученные данные свидетельствовали о высоком ядерном содержании рецептора в опухолевых клетках и практически полном его отсутствии в ядрах нормальных (ПФЧ — ДMFI = 12,7). Причем было отмечено, что в наиболее злокачественных клетках BRO количество ядерного VEGF-R1 оказалось выше такового для А431 в 1,75 раза ^О — ДMFI = 300; А431 — ДMFI = 172).
Заключение. Доказана внутриклеточная, но не поверхностная локализация VEGF-R1, что указывает на интрак-ринный механизм стимуляции рецептора и подтверждает неэффективность применения моноклональных антител для его ингибирования. Данные о наличии VEGF-R1 в ядрах исключительно опухолевых клеток и обнаруженная нами прямая связь между количеством ядерного рецептора и агрессивностью опухолевой клетки позволяют рассматривать содержание VEGF-R1 в ядре в качестве нового прогностического маркера в онкологии и, главное, подтверждают справедливость его выбора в качестве новой молекулярной мишени для терапии новообразований.
В.К. Новоторцев, В.Е. Филатов, М.Е. Кукушкин, А.Г. Мажуга, Е.К. Белоглазкина, Н.В. Зык
разработка новых потенциальных противоопухолевых препаратов -производных
диспиро- и спироиндолинонов
Химический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия
введение. В последнее время для успешной терапии раковых заболеваний требуются новые методы лечения опухолей. Одним из таких методов является применение непептидных низкомолекулярных препаратов, действующих на клеточные белки р53 и MDM2. Белок р53 является опухолевым супрессором и играет важную роль в жизненном цикле клетки — в активном состоянии он останавливает клеточный цикл и репликацию ДНК и запускает апоп-тоз клетки. MDM2 выполняет функцию эндогенного ингибитора р53. Низкомолекулярный ингибитор связывается с MDM2, за счет чего высвобождается белок р53, действие которого приводит к гибели клетки и разрушению опухоли. Таким образом, блокирование взаимодействия р53 и МDM2 является перспективным направлением в терапии раковых заболеваний. Так, большинство синтезируемых соединений-ингибиторов MDM2 в своей структуре содержат спироиндолиноновый фрагмент, за счет которого они эффективно препятствуют взаимодействию р53 с MDM2.
Цель исследования. Оптимизация и разработка новых методов синтеза 2 структурных типов диспиро- и спиро-индолинонов в целях их последующего фармакологического тестирования и определения оптимальных структурных параметров данных соединений.
Материалы и методы. Были разработаны методы получения диспироиндолинонов путем 1,3-диполярного ци-клоприсоединения с участием продукта взаимодействия
изатинов с тиогидантоинами — производными 2-тиоксо-тетрагидро-4Н-имидазол-4-онов, и азометин-илидов с образованием соединений, в структуре которых имеется жесткий каркас из 3 спиро-сочлененных гетероциклов, в основе которых лежит спироиндолиноновое ядро. Также разработаны методы получения спироиндолинонов по реакции 1,3-диполярного циклоприсоединения с участием (3-имино)индолин-2-онов и азометин-илидов с образованием соединений, также содержащих спироиндолиноно-вый фрагмент и имеющих 2 спиро-сочлененных цикла. Структура получаемых соединений была подтверждена с использованием физико-химических методов, таких как ЯМР-спектроскопия, масс-спектрометрия высокого разрешения и рентгено-структурный анализ.
Результаты. Предложен универсальный метод синтеза исследуемых структурных типов диспиро- и спироиндолинонов. На клеточных линиях LNCap, PC-3, HCT-116(+/+) и HCT-116(-/-) исследована цитотоксичность полученных соединений и определены предварительные соединения-лидеры. Был получен монокристалл одного из исследуемых диспироиндолинонов, благодаря чему однозначно установлена структура данного соединения.
Заключение. По полученным в ходе работы результатам было установлено, что исследуемые классы спиро- и ди-спироиндолинонов проявляют хорошую афинность к сайту связывания белков р53/MDM2, что дает возможность судить о перспективности проводимых исследований.
Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ № 16-33-60166.
С.Б. Оникиенко1, В.А. Черешнев2, А.В. Земляной1, В.Ю. Кравцов1,3, Н.В. Бычкова3, В.В. Лишенко1,3, И.В. Гужова4, Б.А. Маргулис4
ПЕРСОНАЛИЗИРОВАННАЯ КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ РАКА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОЛОГИЧЕСКИХ, ЛАЗЕРНЫХ И ЯДЕРНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова,
Санкт-Петербург, Россия;
2ИИФ УрО РАН, Екатеринбург, Россия;
3ФГБУ ВЦЭРМ им. А.М. Никифорова МЧС России,
Санкт-Петербург, Россия;
4ФГБУН ИНЦ РАН, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Известно, что ингибиторы блокирующих противоопухолевый иммунный ответ PD1 и Tim-3 рецепторов Т-лимфоцитов повышают эффективность виротерапии рака. БТШ70 и пробиотик Streptococcus salivarius являются блокаторами PD1 и Tim-3 рецепторов. Низкомолекулярные производные бактериальных липополисахаридов (ЛПС), лазерное облучение кожи в зоне введения онколитических вирусов и лучевая терапия также повышают эффективность иммуновиротерапии рака.
Цель исследования. Разработать технологию персонализированной терапии рака на основе онколитического вируса Сендай (СеВ), БТШ70, пробиотика Streptococcus salivarius, производных бактериальных ЛПС и радиофармпрепаратов под контролем индивидуальных показателей пациента в ходе лечения.
