CC BY
7
54
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
материалы и методы. При отсутствии гиперэкспрессии PD1 и Tim-3+ рецепторов Т-лимфоцитов еженедельно вну-трикожно вводили СеВ в облученные ИК-лазером участки (n = 12). При гиперэкспрессии PD-1+ предварительно внутривенно вводили БТШ70 (0,05 мг/кг). При сохранении гиперэкспрессии PD1 дополнительно применяли Streptococcus salivarius, а при повышении экспрессии Tim-3 дополнительно вводили нетоксичные производные про-дигиозана (0,01 мг/кг), полученные при его обработке пучком электронов (заявка на патент РФ № 2017119461). При развитии резистентности к проводимой терапии дополнительно применяли радиофармпрепараты (пС-холин, пС-метионин). Критерии эффективности виротерапии — регрессия опухоли, выраженность цитопатических изменений в раковых клетках, уровень гранзима и перфорина в Т-лимфоцитах.
результаты. Методом проточной цитометрии установлено, что введение БТШ70 опухоленосителям снижало число CD8+PD1+ клеток в крови в 1,8—2,7 раза; CD8+PD-1+TIM-3+ клеток в 7,4-10,5 раза (р <0,05). Методом иммуноцитохимии выявлено, что БТШ70 увеличивал количество лимфоцитов без PD1-рецепторов в опухолевом инфильтрате более чем в 3 раза, в них повышался уровень гранзима и перфорина, активировались иммунные механизмы гибели опухолевых клеток. В контрольной группе (применение СеВ без учета индивидуальных показателей пациента) частичный регресс опухоли получен у 7 из 77 пациентов. При персонализированной иммуновиротерапии частичный регресс опухоли выявлен в 32 (50,8 %) из 63 случаев. После циторедуктивного хирургического лечения рака полный ответ на персонализированную терапию получен у 7 пациентов (9 %).
Заключение. Персонализированная терапия рака на основе СеВ, БТШ70, пробиотика Streptococcus salivarius, производных бактериальных ЛПС и лучевых технологий с учетом динамики индивидуальных показателей пациента позволяет существенно повысить эффективность лечения.
О.Л. Орлова, М.А. Дмитриева, Л.Л. Николаева, И.Д. Гулякин, А.П. Полозкова, Н.А. Оборотова, Ю.В. Родионова
выбор режима лиофилизации липосомальной дисперсии цифетрилина
ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия
введение. В лаборатории разработки лекарственных форм создана липосомальная лекарственная форма (ЛЛФ) отечественного аналога соматостатина - цифетрилина. Хранение ЛЛФ в жидком виде сопряжено с рядом проблем, наиболее существенными из которых являются окисление и гидролиз липосомальных фосфолипидов, а также ряд физических изменений (агрегация, слияние и др.) в липо-сомальной дисперсии. Поэтому для повышения устойчивости в процессе хранения предложена стабилизация ЛЛФ цифетрилина посредством сублимационной сушки.
Цель исследования. Выбор оптимального режима лиофилизации ЛЛФ цифетрилина.
материалы и методы. Сублимационная сушка Edwards Minifast DO. 2 (Ero Electronic S. p. A., Италия), ЛЛФ цифетрилина (ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России). Выбор режима сублимационной сушки ЛЛФ цифетрилина проводили на основании сравнительного анализа 2 способов лиофилизации — с «медленным» и «быстрым» замораживанием. При «медленном» замораживании использовали постепенное (ступенчатое) понижение температуры полок в камере сушки, при «быстром» — стремительное. Данные режимы лиофилизации сравнивали путем оценки качества полученных лиофили-затов по внешнему виду, регидратируемости, размеру везикул и уровню включения.
результаты. В ходе анализа полученных данных установлено, что способ замораживания не влияет на показатели качества конечного продукта и оба режима позволяют получить равноценные образцы ЛЛФ-лио цифетрилина. По внешнему виду полученные лиофилизаты представляли собой сухую пористую массу белого цвета, которая легко регидратировалась с образованием липосомальной дисперсии белого цвета. В обоих случаях включение цифетрилина в липосомы находилось на уровне 97 %, а средний диаметр липосом составил около 170 нм. Но поскольку режим с «быстрой» стадией замораживания требует меньших затрат времени и электрической энергии, он предложен для получения лиофилизата ЛЛФ цифетрилина.
Заключение. В ходе ряда экспериментов выбран оптимальный режим лиофилизации ЛЛФ цифетрилина, позволивший получить качественный продукт «цифетрилин липо-сомальный, лиофилизат для приготовления дисперсии для инъекций 6 мг» и заложить его на хранение с целью проведения комплекса химико-фармацевтических исследований.
Л.А. Островская1, Д.Б. Корман1, А.К. Грехова1, Н.В. Блюхтерова1, М.М. Фомина1, В.А. Рыкова1, А.Н. Осипов2, К.А. Абзаева3
экспериментальное изучение противоопухолевой Активности полиакрилата золота
ФГБУН ИБФХ РАН, Москва, Россия; 2ФГБУН ИХФ РАН, Москва, Россия; 3ИНЦ СО РАН, Иркутск, Россия
введение. Изучение золотосодержащих соединений в качестве потенциальных противоопухолевых препаратов признано одним из весьма перспективных направлений медико-биологических исследований в области онкологии. Ранее нами была впервые обнаружена значительная противоопухолевая активность препарата полиакрилата золота (аурумакрил), относящегося к новому для онкологии классу соединений — металлополиакрилатам.
Цель исследования. Изучение ростингибирующей и ци-тотоксической активности аурумакрила.
материалы и методы. Противоопухолевый эффект аурумакрила (20 мг/кг, в/б, 5-кратно) оценивался in vivo на моделях карциномы легких Льюис, аденокарциномы Акатол и аденокарциномы Са-755, цитотоксический эффект — in vitro в культуре клеток карциномы молочной железы человека MCF-7. Исследование in vitro включало оценку выживаемости клеток при воздействии аурумакрила
Спецвыпуск / том 17 / 2018
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 55
(0,001—1 мг/мл в течение 24 ч) в тесте с трипановым синим ность супероксиддисмутазы определяли по ингибирова-и изучение его влияния на кинетику клеточной пролифе- нию фотохимического восстановления нитросинего тетра-рации иммуноцитохимическим методом с использованием золия. Метод определения активности каталазы основан маркера клеточного деления — белка Ki-67. Доля апопто- на образовании формальдегида из метилового спирта тических клеток оценивалась с помощью ДНК-связываю- в присутствии пероксида водорода с последующим окра-щего флуоресцентного красителя YO-PRO. шиванием продукта реакции красителем пурпалд. Концент-результаты. Установлено, что аурумакрил на 70—90 % рацию восстановленного глутатиона определяли, используя ингибирует развитие солидных опухолей мышей и вызы- качественную реакцию с 5,5-дитио-бис-(2-нитробензой-вает гибель 70 % клеток MCF-7 (1 мг/мл, инкубация 24 ч). ной) кислотой, в результате которой образуется окрашен-Запуск раннего апоптоза в опухолевых клетках наблюдает- ный в желтый цвет тионитрофенильный анион. Экспрес-ся через 1 ч после воздействия препарата (1 мг/мл). Кине- сию генов в клетках определяли методом ПЦР в режиме тика пролиферации выжившей фракции опухолевых кле- реального времени с использованием интеркалирующего ток под влиянием аурумакрила претерпевает значительные красителя SYBR Green I. изменения, выражающиеся в преимущественном накопле- результаты. Показано, что все исследованные штаммы нии клеток (93 %) в фазе пролиферативного покоя G0 существенно не различались по активности супероксид-и в значительном уменьшении (7 %) доли делящихся кле- дисмутазы и каталазы. Введение животным с ЛУ штам-ток, что свидетельствует об утрате клетками выжившей мами препаратов, к которым резистентны опухолевые фракции репродуктивной способности. клетки, не вызывало значительных изменений в активно-Заключение. Значительная ростингибирующая актив- сти ферментов АОС. Введение животным со штаммом ность аурумакрила на моделях солидных опухолей живот- P-388/cPt терапевтической дозы доксорубицина индуци-ных in vivo и высокий цитотоксический эффект препарата ровало снижение активности каталазы и супероксиддис-в отношении клеток опухоли человека in vitro свидетельст- мутазы по сравнению с контролем. Аналогичный результат вуют о целесообразности углубленного доклинического получен на штамме Р-388/руб при введении терапевтиче-изучения противоопухолевых свойств и механизма дейст- ских доз циклофосфана. Выявлено, что штаммы, устойчи-вия полиакрилата золота. вые к цисплатину и циклофосфану, существенно отличались от исходного штамма по содержанию восстановленного В.С. Павлов1-2, А.А. Балакина2, В.А. Мумятова2. глутатиона. Показано, что концентрация восстановленного Т.А. Раевская2, С.А. Гончарова2, А.А. Терентьев1-2-3 глутатиона в клетках штамма Р388/цф значительно умень-иЗУчЕниЕ Функционирования шается при введении терапевтического препарата. В клет-АнтиокСидАнтной системы в клетках ках штамма, устойчивого к циклофосфану, выявлен зна-лЕкАрСТвЕННо-УСТОйчивыХ ШтАммов чительно более высокий уровень экспрессии ряда генов лЕйкоЗА P-388 мЫШЕй глутатионовой АОС по сравнению с исходным штаммом. МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия; Заключение. Использование на ЛУ штаммах соедине-2ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область, ний, к которым выработана устойчивость, не оказывало Россия; значительного влияния на АОС клеток. Применение сое-3МГОУ, Москва, Россия динений, не являющихся индукторами ЛУ, сопровожда-введение. Одной из проблем в терапии онкологиче- лось снижением активности ферментов АОС. Выявленное ских заболеваний является развитие лекарственной устой- снижение активности ферментов при действии противоо-чивости (ЛУ) и множественной лекарственной устойчивости пухолевых препаратов может приводить к накоплению (МЛУ) опухолей. Механизмы возникновения ЛУ, а также активных форм кислорода в опухолевых клетках и окисли-подходы к ее преодолению могут быть связаны с измене- тельному стрессу. ЛУ штамма Р388/цф может быть обу-нием регуляции антиоксидантной системы. Изучение словлена высоким уровнем активности глутатионовой функционирования антиоксидантной системы (АОС) опу- АОС в клетках. холевых клеток и ее роли в механизмах развития резистентности к противоопухолевым агентам — важная актуальная А.А. Панов, А.Ю. Симонов, С.Н. Лавренов, А.С. Тренин задача как для создания новых лекарственных препаратов, новые производные трииндолилмЕтилия так и для подбора наиболее эффективных терапевтических Со СНиЖЕННой ТОкСичНоСТЬЮ режимов лечения онкологических заболеваний. ФГБНУ НИИНА, Москва, Россия Цель исследования. Изучить активность ферментов введение. Производные трииндолилметилия известны супероксиддисмутазы и каталазы, концентрацию восста- своей антибактериальной, противогрибковой и противоо-новленного глутатиона и экспрессию генов ферментов пухолевой активностью. Ранее изучавшиеся соединения глутатионовой АОС в клетках ЛУ штаммов лейкоза Р-388 отличались малой селективностью действия и высокой мышей в норме и при действии противоопухолевых соеди- токсичностью. нений. Цель исследования. С целью изучения связи структу-материалы и методы. Исследование проводилось на ра—активность нами были синтезированы и протестиро-ряде ЛУ штаммов лейкоза Р-388 мышей: Р-388/руб, ваны на биологическую активность >35 новых производных, Р-388/цф, P-388/cPt, резистентных к рубомицину, цикло- содержащих в своей структуре малеимидный фрагмент. фосфану и цисплатину соответственно, при этом штамм Среди производных малеимида имеются активные инги-Р-388/руб обладал генотипом и фенотипом МЛУ. Актив- биторы протеинкиназ (например, ребеккамицин), которые
Спецвыпуск / том 17 / 2018 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
