CC BY
18
16
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
Цель исследования. Установить механизм клеточной гибели, вызываемой иммунотоксином scFv-NSP4.
материалы и методы. Иммунотоксин экспрессировали в E. coli и очищали с помощью металл-аффинной хроматографии. Культуры клеток Colo-205 (колоректальная аде-нокарцинома) и MCF-7 (рак молочной железы), предоставленные ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, выращивали по стандартному протоколу. Затем инкубировали в присутствии scFv-NSP4 24 ч. Клетки окрашивали антителами против аннексина V и йодистым пропидием и анализировали методом проточной цитометрии для сравнения количества живых, апоптоти-ческих и некротических клеток. Уровни мРНК Bcl-2 и Bax исследовали методом ОТ-ПЦР в реальном времени.
результаты. В культуре Colo-205 было обнаружено 14 % живых клеток, 50 % раннеапоптотических, 35 % позднеапоптотических, 1 % некротических. В культуре MCF-7 было обнаружено 30 % живых клеток, 56 % ранне-апоптотических, 13 % позднеапоптотических, 1 % некротических. Также в обеих культурах клеток было зарегистрировано повышение уровня мРНК Bax относительно мРНК Bcl-2 после инкубации с scFv-NSP4.
Заключение. Под воздействием scFv-NSP4 в культурах раковых клеток Colo-205 и MCF-7 регистрируется апоп-тоз. Доля клеток, погибших по механизму некроза, незначительна. Таким образом, рекомбинантный иммунотоксин scFv-NSP4 взаимодействует с MUC1 посредством направляющего модуля scFv и индуцирует апоптоз за счет цитотоксического эффекта NSP4. Предположительно индукция апоптоза раковых клеток вызвана взаимодействием NSP4 с alßl и a2ß1 интегринами на поверхности клеточной мембраны.
А.В. Вахрушев, А.М. Дёмин, В.П. Краснов
синтез флуоресцентного производного rgd-пептида
ИОС УрО РАН, Екатеринбург, Россия
введение. Производные RGD-пептида (содержащие последовательность аминокислот L-Arg-Gly-L-Asp) специфически связываются с интегринами avß3 и avß5, находящимися на поверхности опухолевых клеток, что позволяет использовать их в качестве векторов при создании новых препаратов для лечения и диагностики онкологических заболеваний.
Цель исследования. Разработка и оптимизация метода синтеза конъюгата диметилового эфира глицил-Nro-(2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил)-L-аргинил-глицил-L-аспарагиновой кислоты (производное GRGD-пептида) с флуоресцентным красителем Cyanine5.5 (Cy5.5), потенциального материала для специфического окрашивания поверхности опухолевых клеток in vitro.
материалы и методы. Синтез осуществляли с использованием методов пептидной химии в растворе путем последовательного наращивания пептидной цепи, исходя из предварительно полученного диметилового эфира L-Asp. В работе использовано активированное производное красителя Су5.5 (Lumiprobe, Россия). Строение и чистота конечного и промежуточных продуктов подтверждена данными 'H ЯМР (Bruker Avance 500), элементного анализа (Perkin
Elmer РЕ 2400), HRMS (Shimadzu LCMS-2010), обращенно-фазовой ВЭЖХ (Agilent 1100, колонка Kromasil 100-5-C18), ИК-спектрометрии (Nicolet 6700 с приставкой НПВО Smart Orbit с алмазным кристаллом), флуориметрии (Cary Eclipse, Varian), УФ-спектрометрии (UV 2401 PC, Shimadzu).
результаты. В ходе работы оптимизирован синтез производного RGD-пептида, проведен сравнительный анализ эффективности использования конденсирующих реагентов 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)-карбодиимида (EDC), 1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)-карбоди-имида (CMC), О-(бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметил-урония тетрафторбората (TBTU) и гексафторфосфата (HBTU) на ключевой стадии синтеза трипептида №-2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил^-аргинил-глицил^-аспарагиновой кислоты (RGD). Показано, что наибольший препаративный выход достигается при использовании TBTU (76 %). Полученное производное RGD-пептида конденсировали с Fmoc-Gly с использованием конденсирующего реагента TBTU. Защитную Fmoc-группу аминогруппы Gly удалили 20 % пиперидином в метаноле и присоединили Cy5.5 с использованием его активированного N-гидроксисукцинимидного производного. Строение и чистота синтезированного конъюгата подтверждены данными 'H ЯМР, ВЭЖХ, HRMS, флуориметрии, УФ- и ИК-спектроскопии.
Заключение. Разработан и оптимизирован метод синтеза производного GRGD-пептида, содержащего молекулу флуоресцентного красителя Cy5.5, которое может быть использовано в дальнейшем для специфического окрашивания поверхности опухолевых клеток in vitro.
Работа выполнена при финансовой поддержке Комплексной программы УрО РАН (№ 18-3-3-20 и 18-3-3-13).
Н.А. Верлов, М.А. Зелененко, А.П. Трашков, В.А. Печатникова, М.В. Филатов, Д.В. Новик, Е.И. Дрогомирецкая
пероральное введение масляной кислоты ингибирует развитие лимфосаркомы плисса и не снижает эффективность противоопухолевого лечения цисплатином
НИЦ«Курчатовский институт» — ПИЯФ, Гатчина, Ленинградская область, Россия
введение. Нарушения работы различных органов и систем организма при развитии опухолевого процесса, обусловленные как факторами агрессии растущей опухоли, так и применяющимися методами лечения заболевания, является ключевым критерием, приводящим к изменению тактики противоопухолевой терапии и ухудшению прогноза.
Цель исследования. Изучить влияние масляной кислоты как потенциального средства для поддерживающей терапии на развитие злокачественных опухолей на модели лимфосаркомы Плисса (ЛФСП) при проведении высоко-дозной химиотерапии.
материалы и методы. В исследование включены 160 крыс-самцов Wistar с массой тела на момент начала экспериментов 190—230 г. Моделирование опухолевого процесса производили путем подкожной трансплантации всем животным, включенным в исследование, взвеси клеток
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
17
ЛФСП в дозе 106 клеток/особь в физиологическом растворе (объем введения — 0,5 мл). Животные были разделены на 4 группы: «контроль» — крысы, не получавшие терапию; «масляная кислота» — крысы, получавшие масляную кислоту (внутрижелудочно в дозе 11,5 мг/кг на всем протяжении эксперимента); «цисплатин» — крысы, получавшие противоопухолевую терапию (цисплатин-эбеве 8 мг/кг однократно, через 48 ч от момента трансплантации ЛФСП); «масляная кислота + цисплатин» — крысы, получавшие масляную кислоту совместно с противоопухолевым препаратом. Оценивали продолжительность жизни подопытных животных и динамику роста первичного опухолевого узла.
Результаты. Применение масляной кислоты достоверно способствовало увеличению средней продолжительности жизни животных в среднем на 14 %. При этом наблюдалось клинически значимое торможение роста опухоли (ТРО) на 67 % (10-е сутки) и 60 % (20-е сутки). Включение масляной кислоты в схему терапии ЛФСП цисплатином не уменьшало продолжительность жизни крыс и существенно усиливало ингибирование роста опухолевого узла. ТРО в группе «Масляная кислота + Цисплатин» составляло 99 и 61 % (10-е и 20-е сутки соответственно).
Заключение. В ходе предварительных экспериментов показано, что применение масляной кислоты (в режиме монотерапии и при включении в состав схемы противоопухолевого лечения) приводит к ингибированию роста ЛФСП.
А.Ю. Вигоров1, Е.Н. Чулаков1, Д.А. Груздев1, Г.Л. Левит1, М.А. Барышникова2, З.С. Шпрах, В.П. Краснов1 СИНТЕЗ И ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ НОВЫХ КОНЪЮГАТОВ ПУРИНА И 2-АМИНОПУРИНА ИОС УрО РАН, Екатеринбург, Россия; 2ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия
Введение. Синтез и изучение производных пурина, представляющих собой аналоги фолиевой кислоты, представляет значительный интерес, поскольку опухолевые клетки отличаются гиперпродукцией фолатных рецепторов, а производные и аналоги фолиевой кислоты характеризуются избирательным накоплением в опухоли. Кроме того, структурные аналоги фолиевой кислоты применяются в терапии туберкулеза и других бактериальных инфекций.
Цель исследования. Синтезировать новые конъюгаты пурина и 2-аминопурина, содержащие фрагмент амино-бензоил-(5)-глутаминовой кислоты, присоединенный напрямую в положение 6 пуринового ядра или через спейсер (остаток этилендиамина), и изучить их противоопухолевую активность в экспериментах in vitro.
Материалы и методы. Для получения целевых конъю-гатов использована реакция нуклеофильного замещения хлора в 2-амино-6-хлорпурине и 6-хлорпурине 4-амино-бензойной кислотой или ее производным с последующей конденсацией с диметиловым эфиром (^)-глутаминовой кислоты и щелочным гидролизом. Состав и строение синтезированных производных ^[пурин-6-ил)-4-амино-бензоил]-(5)-глутаминовой кислот установлены на осно-
вании данных ЯМР-спектроскопии, элементного анализа и хромато-масс-спектрометрии высокого разрешения. Изучение противоопухолевой активности 9 новых конъю-гатов пурина и 2-аминопурина проведено на следующих клеточных линиях опухолей человека: карцинома толстой кишки HCT-116; карцинома предстательной железы РС-3; карцинома легкого А549; аденокарцинома молочной железы MCF-7; Т-клеточный лимфобластный лейкоз Jurkat, полученных из Банка клеточных линий ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, с использованием 3-(4,5-диметилтиазолин-2)-2,5-дифенил-тетразолий бромида (МТТ-тест).
Результаты и заключение. Синтезирован ряд новых конъюгатов пурина и 2-аминопурина, содержащих фрагмент аминобензоил^-глутаминовой кислоты и представляющих собой аналоги фолиевой кислоты. Противоопухолевая (цитотоксическая) активность синтезированных соединений изучена в экспериментах in vitro (МТТ-тест) на клеточных линиях опухолей человека. Установлено, что ни одно из исследованных соединений в концентрации 100 мкМ не вызывало гибели клеток >50 %. Таким образом, изученные соединения не обладают цитотоксической активностью в отношении клеточных линий опухолей человека.
Работа выполнена при финансовой поддержке РНФ (грант № 14-13-01077).
Ю.Л. Володина1, А.С. Тихомиров23, Л.Г. Деженкова2, Д.Н. Калюжный4, В.Б. Цветков5, А.Е. Щекотихин2,3, А.А. Штиль1, 2
АНТРАФУРАНДИОНЫ - ПЕРСПЕКТИВНЫЙ КЛАСС ОТЕЧЕСТВЕННЫХ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ СОЕДИНЕНИЙ
ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия; 2ФГБНУНИИНА, Москва, Россия; 3РХТУ, Москва, Россия;
4ФГБУН «ИМБ им. В.А. Энгельгардта РАН», Москва, Россия;
5ФГБУН «ИНХС им. А.В. Топчиева РАН», Москва, Россия
Введение. Используемые в клинике производные ан-трахинона (доксорубицин, даунорубицин и др.) недостаточно эффективны при лечении опухолей, устойчивых к ряду препаратов. В результате оптимизации структуры гетероциклических производных антрахинона получены соединения, содержащие циклические диамины в боковой цепи (в частности, антрафуранкарбоксамиды), перспективные для создания новых противоопухолевых средств.
Цель исследования. Установить механизмы гибели опухолевых клеток и изучить связь «структура—активность» в ряду антрафуранкарбоксамидов.
Материалы и методы. Изучали цитотоксичность, клеточный цикл и гибель опухолевых клеток различного тканевого происхождения, ингибирование топоизомераз I и II, комплексообразование с ДНК и протеинкиназами in vitro, токсичность и противоопухолевую эффективность in vivo.
Результаты. Большинство антрафуранкарбоксамидов вызывают апоптоз опухолевых клеток, включая сублинии с нефункционирующим p53 или гиперэкспрессией P-гли-копротеина, резистентные к доксорубицину. Производные
