CC BY
8
14
материалы конференции «отечественные противоопухолевые препараты»
недостаточно и в композицию необходимо также вводить дополнительно 0,5 мас. % ПЭГ, что позволяет повысить устойчивость полимерной композиции к радиационной стерилизации, сохраняя при этом вязкость на уровне 1,5— 2,0 Пас.
Заключение. Показано, что дополнительное введение в лечебную композицию «Колегель-уро» 0,5 мас. % ФЭ и 0,5 мас. % ПЭГ позволяет использовать стерилизующую дозу 15кГр и обеспечивает срок годности такой композиции 2 года, что способствует расширению возможностей применения данного лечебного материала в медицине.
Работа выполнена в рамках гранта РФФИ № 15-29-04847.
П.М. Бычковский1, Т.Л. Юркштович2, Н.В. Голуб2, С.О. Соломевич2, В.Н. Гапоненко1, И.И. Тагиль1, Е.Г. Дрепаков1, В.И. Артюкевич1
сравнение цитостатического эффекта пролонгированных форм цисплатина in vitro
1УП«Унитехпром БГУ», Минск, Беларусь; 2НИИ ФХП БГУ, Минск, Беларусь
введение. Цисплацел, пролонгированная форма цис-диамминдихлороплатина (II) в виде салфетки, характеризуется высокой противоопухолевой активностью, пониженной токсичностью и применяется при локальной химиотерапии опухолей головного мозга. В настоящей работе путем иммобилизации цисплатина на окисленной бактериальной наноцеллюлозе получена новая пролонгированная форма цитостатика в виде гель-пленки, изучены ее свойства.
Цель исследования. Сравнительное изучение противоопухолевых свойств макромолекулярных соединений цис-платина, полученных путем сорбции цитостатика на окисленной бактериальной, вискозной и хлопковой целлюлозе.
материалы и методы. Структура и состав пролонгированных форм цисплатина на основе целлюлозы, окисленной 5—40 % растворами оксида азота (IV) в хлороформе, подтверждены методами хроматографического анализа, ИК-спектроскопии, элементного анализа, гравиметрии, сканирующей электронной микроскопии. Исследование цитостатической активности макромолекулярных соединений цисплатина при концентрации активного вещества 0,5—1,0 мкг/г проведено на клеточной линии HeLa (адено-карцинома шейки матки человека) при инкубации в течение 48 ч.
результаты. Установлено, что в процессе окисления бактериальной целлюлозы в системе оксид азота (]У)-хло-роформ происходит не только увеличение содержания карбоксильных групп, но и значительная деструкция макромолекул исходного полисахарида. В результате гель-пленки на основе окисленной бактериальной целлюлозы (ОБЦ) можно условно разделить на 2 группы: без существенного нарушения морфологической структуры волокна и с разрушением нановолокон бактериальной целлюлозы до на-ночастиц, связанных между собой водородными связями. Чешуйчатое строение нановолокон ОБЦ с содержанием карбоксильных групп в интервале 13,5-23,4 % приводит к высокой скорости гидролиза окисленных образцов
в условиях in vitro: гель-пленки полностью деградируют в течение 3 сут. Как результат, цитостатик может высвобождаться из гель-пленки ОБЦ не только в виде отдельных молекул, но также молекул, связанных с наночастицами модифицированной целлюлозы. Экспериментальные данные по противоопухолевой активности растворов цис-платина и их макромолекулярных форм свидетельствуют о том, что по критерию торможения пролиферации опухолевых клеток образец ОБЦ—цисплатин близок по активности к нативному цисплатину и примерно в 2 раза активнее цисплатина, включенного в состав окисленной вискозной и хлопковой целлюлозы.
Заключение. Установлена более высокая антипролифе-ративная активность иммобилизованного на ОБЦ циспла-тина в отличие от цисплатина, включенного в состав салфеток на основе окисленной растительной целлюлозы, что связано со структурными особенностями ОБЦ.
Г.Г. Варванина1, А.В. Смирнова12, И.Е. Трубицына1, Л.В. Винокурова1, А.С. Гуляев1, К.К. Носкова1
исследование концентрации эндогенного ингибитора матриксной
металлопротеиназы 1 (TIMP1)
при заболеваниях поджелудочной железы
1ГБУЗ«МКНЦим. А.С. Логинова ДЗМ», Москва, Россия; 2ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия
введение. Развитие рака головки поджелудочной железы (РПЖ) часто инициируется рецидивирующим течением хронического панкреатита (ХП). Эндогенный ингибитор матриксной металлопротеиназы 1 (TIMP1) определяет интенсивность роста опухолевых образований, миграцию клеток и формирование опорной стромы для новых клонов. Процесс активации факторов развития соединительной ткани на фоне обострений ХП изучен недостаточно и потому требует более пристального внимания.
Цель исследования. Определить концентрацию TIMP1 (нг/мл) в крови больных с РПЖ, ХП с кистами (ХКП) и без кист, группы контроля (К).
материалы и методы. Кровь больных, страдающих ХП 7—12 лет, с кистами и без, а также с первично диагностированным РПЖ. Выделены сравнимые по количеству подгруппы (n = 16): киста, РПЖ, ХП. Белок определяли в плазме венозной крови методом ELISA. Статистический анализ данных проводили после оценки характера распределения данных и расчетов в Statistica 6.0, используя для оценки тест Манна—Уитни для попарных сравнений.
результаты. При анализе данных установлено, что существует достоверное различие концентраций TIMP1 в группе РПЖ по сравнению с группой К (р = 0,01; min— max 1371—3250 нг/мл против 709—2096 нг/мл). При сравнении групп К и ХКП и/или К и ХП статистически значимых различий выявлено не было.
Заключение. На примере малой выборки больных с длительным рецидивирующим течением ХП обнаружена вовлеченность TIMP1 в процесс развития опухоли головки поджелудочной железы. Это требует продолжения изучения роли факторов межклеточного ремоделирования при ХП.
материалы конференции «отечественные противоопухолевые препараты»
15
Г.Г. Варванина1, А.В. Смирнова12, И.Е. Трубицына1, Л.В. Винокурова1, А.С. Гуляев1, К.К. Носкова1, А.С. Дорофеев1, Ж.В. Борунова1
исследование концентрации матриксной металлопротеиназы 9, эндогенного ингибитора матриксной металлопротеиназы 1 (TIMP1), ингибитора тканей матриксной металлопротеиназы 2 (TIMP2) при заболеваниях поджелудочной железы
1ГБУЗ«МКНЦим. А.С. Логинова ДЗМ», Москва, Россия; 2ФГБУ«НМИЦонкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия
введение. Ремоделирование соединительной ткани при воспалении поджелудочной железы является ключевым событием для развития опухолевых очагов при раке головки поджелудочной железы (РПЖ).
Цель исследования. Определить концентрацию матриксной металлопротеиназы 9 (ММР9), эндогенного ингибитора матриксной металлопротеиназы 1 (TIMP1) и ингибитора тканей матриксной металлопротеиназы 2 (TIMP2) в крови больных с заболеваниями поджелудочной железы.
Материалы и методы. В исследование включены 72 больных хроническим панкреатитом (ХП) и РПЖ, средний возраст 54 ± 12 лет (46 мужчин и 26 женщин). Для анализа данных больные были разделены на 4 группы: контроль — 13 (без патологий поджелудочной железы), РПЖ — 16, ХП с постнекротическими кистами — 23, ХП без кис-тозных образований — 37. В сыворотке крови определяли концентрацию ММР9, TIMP1 и TIMP2 (нг/мл) методом ELISA. Статистический анализ данных проводили c использованием непараметрического критерия Манна-Уит-ни после оценки характера распределения данных; достоверность различий считали существенной прир <0,05.
результаты. Выявлено достоверное повышение уровня ММР9 в сыворотке крови больных ХП и РПЖ по сравнению с группой контроля (р = 0,008). Также было выявлено значимое различие концентраций TIMP1 (p = 0,01), но не для TIMP2 (p >0,05) при сравнении групп контроля и РПЖ. Между группами контроля и ХП (группы с кистами и без) статистически значимых различий выявлено не было.
Заключение. Исследование изменения концентрации ММР9 и тканевых ингибиторов является перспективной темой для дальнейшего изучения хронического воспаления как фактора опухолевого роста.
А.А. Вартанян, Д.А. Хоченков, О.С. Бурова
взаимосвязь между аутофагией и железом в васкулогенной мимикрии
ФГБУ«НМИЦонкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия
введение. Аутофагия, катаболический процесс удаления отработанных органелл, долгоживущих белков и продуктов распада, имеет патологически повышенную активность в опухолевых клетках. Стремительный рост злокачественной опухоли требует значительно большего расхода железа, чем метаболизм нормальных клеток.
Цель исследования. Получение экспериментального подтверждения существования взаимосвязи между аутофагией и железом в васкулогенной мимикрии (ВМ).
материалы и методы. В работе были использованы 2D-и 3D-культивирование клеток, электрофорез и вестерн-блот, проточная цитофлуориметрия, siRNA-опосредован-ный нокдаун генов, флуоресцентная микроскопия.
результаты. О базовом уровне аутофагии судили по экспрессии маркера последней стадии аутофагии — LC-3B и флуоресценции монодансилкадаверина. В клетках меланомы, формирующих сосудистоподобные структуры (СПС) на матригеле, базовый уровень аутофагии был значительно выше, чем в клетках, не способных участвовать в ВМ. Блокирование аутофагии фармакологическими ингибиторами инициации и терминальной фазы аутофагии ингибировало формирование СПС. Полученные результаты были подтверждены siRNA-опосредованным подавлением экспрессии гена BECN1, инициатора аутофагии, и ATG5, маркера необратимой стадии аутофагии. При нокдауне гена BECN1 клетки не теряли способности мигрировать, но рисунок структур, сформированных на матригеле, заметно отличался от геометрии классических СПС. Клетки меланомы с нокдауном гена ATG5 меняли форму с ве-ретеноподобной на шаровидную, сохраняли способность мигрировать, формирования СПС не наблюдалось. Низкомолекулярный ингибитор ВМ, ЛХС-1269, заметно снижал базовый уровень аутофагии. Хелатирование железа снижало на 20—25 % экспрессию CD71 и полностью блокировало формирование СПС. В присутствии донора железа клетки меланомы ненормально удлинялись, формировали в 3D-культуре СПС с многочисленными разрывами в сети. Хелатор железа повышал базовый уровень аутофагии в 2 раза. Донор железа не влиял ни на аутофагию, ни на экспрессию CD71.
Заключение. Аутофагия обеспечивает прогрессию опухоли 2 путями: способствует выживанию опухолевых клеток при стрессе и индуцирует частичную трансдиф-ференцировку опухолевых клеток в эндотелиоподобный фенотип. Хелатирование железа блокирует ВМ и повышает аутофагию.
П.И. Васильчиков, А.Д. Перенков, Д.В. Новиков, С.Г. Фомина, В.В. Новиков
механизм клеточной гибели, вызываемой рекомбинантным иммунотоксином Против муцина 1
ННГУ им. Н.И. Лобачевского, Нижний Новгород, Россия
введение. Муцин 1 (МиС1) является перспективной мишенью для таргетной иммунотерапии онкозаболеваний в связи с изменением степени гликозилирования и гиперэкспрессией на поверхности клеток 70—80 % карцином. Ранее нами был получен рекомбинантный иммунотоксин против опухолеассоциированного МиС1 человека, представляющий собой мини-антитело (scFv) против МиС1, слитое с ротавирусным энтеротоксином №Р4, который демонстрировал специфическое взаимодействие с опухолевыми клетками человека линий Со1о-205 и MCF-7, ги-перэкспрессирующими МиС1, и выраженную цитотокси-ческую активность.
1б
материалы конференции «отечественные противоопухолевые препараты»
Цель исследования. Установить механизм клеточной гибели, вызываемой иммунотоксином scFv-NSP4.
материалы и методы. Иммунотоксин экспрессировали в E. coli и очищали с помощью металл-аффинной хроматографии. Культуры клеток Colo-205 (колоректальная аде-нокарцинома) и MCF-7 (рак молочной железы), предоставленные ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, выращивали по стандартному протоколу. Затем инкубировали в присутствии scFv-NSP4 24 ч. Клетки окрашивали антителами против аннексина V и йодистым пропидием и анализировали методом проточной цитометрии для сравнения количества живых, апоптоти-ческих и некротических клеток. Уровни мРНК Bcl-2 и Bax исследовали методом ОТ-ПЦР в реальном времени.
результаты. В культуре Colo-205 было обнаружено 14 % живых клеток, 50 % раннеапоптотических, 35 % позднеапоптотических, 1 % некротических. В культуре MCF-7 было обнаружено 30 % живых клеток, 56 % ранне-апоптотических, 13 % позднеапоптотических, 1 % некротических. Также в обеих культурах клеток было зарегистрировано повышение уровня мРНК Bax относительно мРНК Bcl-2 после инкубации с scFv-NSP4.
Заключение. Под воздействием scFv-NSP4 в культурах раковых клеток Colo-205 и MCF-7 регистрируется апоп-тоз. Доля клеток, погибших по механизму некроза, незначительна. Таким образом, рекомбинантный иммунотоксин scFv-NSP4 взаимодействует с MUC1 посредством направляющего модуля scFv и индуцирует апоптоз за счет цитотоксического эффекта NSP4. Предположительно индукция апоптоза раковых клеток вызвана взаимодействием NSP4 с alßl и a2ß1 интегринами на поверхности клеточной мембраны.
А.В. Вахрушев, А.М. Дёмин, В.П. Краснов
синтез флуоресцентного производного rgd-пептида
ИОС УрО РАН, Екатеринбург, Россия
введение. Производные RGD-пептида (содержащие последовательность аминокислот L-Arg-Gly-L-Asp) специфически связываются с интегринами avß3 и avß5, находящимися на поверхности опухолевых клеток, что позволяет использовать их в качестве векторов при создании новых препаратов для лечения и диагностики онкологических заболеваний.
Цель исследования. Разработка и оптимизация метода синтеза конъюгата диметилового эфира глицил-Nro-(2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил)-L-аргинил-глицил-L-аспарагиновой кислоты (производное GRGD-пептида) с флуоресцентным красителем Cyanine5.5 (Cy5.5), потенциального материала для специфического окрашивания поверхности опухолевых клеток in vitro.
материалы и методы. Синтез осуществляли с использованием методов пептидной химии в растворе путем последовательного наращивания пептидной цепи, исходя из предварительно полученного диметилового эфира L-Asp. В работе использовано активированное производное красителя Су5.5 (Lumiprobe, Россия). Строение и чистота конечного и промежуточных продуктов подтверждена данными 'H ЯМР (Bruker Avance 500), элементного анализа (Perkin
Elmer РЕ 2400), HRMS (Shimadzu LCMS-2010), обращенно-фазовой ВЭЖХ (Agilent 1100, колонка Kromasil 100-5-C18), ИК-спектрометрии (Nicolet 6700 с приставкой НПВО Smart Orbit с алмазным кристаллом), флуориметрии (Cary Eclipse, Varian), УФ-спектрометрии (UV 2401 PC, Shimadzu).
результаты. В ходе работы оптимизирован синтез производного RGD-пептида, проведен сравнительный анализ эффективности использования конденсирующих реагентов 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)-карбодиимида (EDC), 1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)-карбоди-имида (CMC), О-(бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметил-урония тетрафторбората (TBTU) и гексафторфосфата (HBTU) на ключевой стадии синтеза трипептида №-2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил^-аргинил-глицил^-аспарагиновой кислоты (RGD). Показано, что наибольший препаративный выход достигается при использовании TBTU (76 %). Полученное производное RGD-пептида конденсировали с Fmoc-Gly с использованием конденсирующего реагента TBTU. Защитную Fmoc-группу аминогруппы Gly удалили 20 % пиперидином в метаноле и присоединили Cy5.5 с использованием его активированного N-гидроксисукцинимидного производного. Строение и чистота синтезированного конъюгата подтверждены данными 'H ЯМР, ВЭЖХ, HRMS, флуориметрии, УФ- и ИК-спектроскопии.
Заключение. Разработан и оптимизирован метод синтеза производного GRGD-пептида, содержащего молекулу флуоресцентного красителя Cy5.5, которое может быть использовано в дальнейшем для специфического окрашивания поверхности опухолевых клеток in vitro.
Работа выполнена при финансовой поддержке Комплексной программы УрО РАН (№ 18-3-3-20 и 18-3-3-13).
Н.А. Верлов, М.А. Зелененко, А.П. Трашков, В.А. Печатникова, М.В. Филатов, Д.В. Новик, Е.И. Дрогомирецкая
пероральное введение масляной кислоты ингибирует развитие лимфосаркомы плисса и не снижает эффективность противоопухолевого лечения цисплатином
НИЦ «Курчатовский институт» — ПИЯФ, Гатчина, Ленинградская область, Россия
введение. Нарушения работы различных органов и систем организма при развитии опухолевого процесса, обусловленные как факторами агрессии растущей опухоли, так и применяющимися методами лечения заболевания, является ключевым критерием, приводящим к изменению тактики противоопухолевой терапии и ухудшению прогноза.
Цель исследования. Изучить влияние масляной кислоты как потенциального средства для поддерживающей терапии на развитие злокачественных опухолей на модели лимфосаркомы Плисса (ЛФСП) при проведении высоко-дозной химиотерапии.
материалы и методы. В исследование включены 160 крыс-самцов Wistar с массой тела на момент начала экспериментов 190—230 г. Моделирование опухолевого процесса производили путем подкожной трансплантации всем животным, включенным в исследование, взвеси клеток
