Синтез флуоресцентного производного RGD-пептида Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

16

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

Цель исследования. Установить механизм клеточной гибели, вызываемой иммунотоксином scFv-NSP4.

материалы и методы. Иммунотоксин экспрессировали в E. coli и очищали с помощью металл-аффинной хроматографии. Культуры клеток Colo-205 (колоректальная аде-нокарцинома) и MCF-7 (рак молочной железы), предоставленные ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, выращивали по стандартному протоколу. Затем инкубировали в присутствии scFv-NSP4 24 ч. Клетки окрашивали антителами против аннексина V и йодистым пропидием и анализировали методом проточной цитометрии для сравнения количества живых, апоптоти-ческих и некротических клеток. Уровни мРНК Bcl-2 и Bax исследовали методом ОТ-ПЦР в реальном времени.

результаты. В культуре Colo-205 было обнаружено 14 % живых клеток, 50 % раннеапоптотических, 35 % позднеапоптотических, 1 % некротических. В культуре MCF-7 было обнаружено 30 % живых клеток, 56 % ранне-апоптотических, 13 % позднеапоптотических, 1 % некротических. Также в обеих культурах клеток было зарегистрировано повышение уровня мРНК Bax относительно мРНК Bcl-2 после инкубации с scFv-NSP4.

Заключение. Под воздействием scFv-NSP4 в культурах раковых клеток Colo-205 и MCF-7 регистрируется апоп-тоз. Доля клеток, погибших по механизму некроза, незначительна. Таким образом, рекомбинантный иммунотоксин scFv-NSP4 взаимодействует с MUC1 посредством направляющего модуля scFv и индуцирует апоптоз за счет цитотоксического эффекта NSP4. Предположительно индукция апоптоза раковых клеток вызвана взаимодействием NSP4 с alßl и a2ß1 интегринами на поверхности клеточной мембраны.

А.В. Вахрушев, А.М. Дёмин, В.П. Краснов

синтез флуоресцентного производного rgd-пептида

ИОС УрО РАН, Екатеринбург, Россия

введение. Производные RGD-пептида (содержащие последовательность аминокислот L-Arg-Gly-L-Asp) специфически связываются с интегринами avß3 и avß5, находящимися на поверхности опухолевых клеток, что позволяет использовать их в качестве векторов при создании новых препаратов для лечения и диагностики онкологических заболеваний.

Цель исследования. Разработка и оптимизация метода синтеза конъюгата диметилового эфира глицил-Nro-(2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил)-L-аргинил-глицил-L-аспарагиновой кислоты (производное GRGD-пептида) с флуоресцентным красителем Cyanine5.5 (Cy5.5), потенциального материала для специфического окрашивания поверхности опухолевых клеток in vitro.

материалы и методы. Синтез осуществляли с использованием методов пептидной химии в растворе путем последовательного наращивания пептидной цепи, исходя из предварительно полученного диметилового эфира L-Asp. В работе использовано активированное производное красителя Су5.5 (Lumiprobe, Россия). Строение и чистота конечного и промежуточных продуктов подтверждена данными 'H ЯМР (Bruker Avance 500), элементного анализа (Perkin

Elmer РЕ 2400), HRMS (Shimadzu LCMS-2010), обращенно-фазовой ВЭЖХ (Agilent 1100, колонка Kromasil 100-5-C18), ИК-спектрометрии (Nicolet 6700 с приставкой НПВО Smart Orbit с алмазным кристаллом), флуориметрии (Cary Eclipse, Varian), УФ-спектрометрии (UV 2401 PC, Shimadzu).

результаты. В ходе работы оптимизирован синтез производного RGD-пептида, проведен сравнительный анализ эффективности использования конденсирующих реагентов 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)-карбодиимида (EDC), 1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)-карбоди-имида (CMC), О-(бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметил-урония тетрафторбората (TBTU) и гексафторфосфата (HBTU) на ключевой стадии синтеза трипептида №-2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил^-аргинил-глицил^-аспарагиновой кислоты (RGD). Показано, что наибольший препаративный выход достигается при использовании TBTU (76 %). Полученное производное RGD-пептида конденсировали с Fmoc-Gly с использованием конденсирующего реагента TBTU. Защитную Fmoc-группу аминогруппы Gly удалили 20 % пиперидином в метаноле и присоединили Cy5.5 с использованием его активированного N-гидроксисукцинимидного производного. Строение и чистота синтезированного конъюгата подтверждены данными 'H ЯМР, ВЭЖХ, HRMS, флуориметрии, УФ- и ИК-спектроскопии.

Заключение. Разработан и оптимизирован метод синтеза производного GRGD-пептида, содержащего молекулу флуоресцентного красителя Cy5.5, которое может быть использовано в дальнейшем для специфического окрашивания поверхности опухолевых клеток in vitro.

Работа выполнена при финансовой поддержке Комплексной программы УрО РАН (№ 18-3-3-20 и 18-3-3-13).

Н.А. Верлов, М.А. Зелененко, А.П. Трашков, В.А. Печатникова, М.В. Филатов, Д.В. Новик, Е.И. Дрогомирецкая

пероральное введение масляной кислоты ингибирует развитие лимфосаркомы плисса и не снижает эффективность противоопухолевого лечения цисплатином

НИЦ«Курчатовский институт» — ПИЯФ, Гатчина, Ленинградская область, Россия

введение. Нарушения работы различных органов и систем организма при развитии опухолевого процесса, обусловленные как факторами агрессии растущей опухоли, так и применяющимися методами лечения заболевания, является ключевым критерием, приводящим к изменению тактики противоопухолевой терапии и ухудшению прогноза.

Цель исследования. Изучить влияние масляной кислоты как потенциального средства для поддерживающей терапии на развитие злокачественных опухолей на модели лимфосаркомы Плисса (ЛФСП) при проведении высоко-дозной химиотерапии.

материалы и методы. В исследование включены 160 крыс-самцов Wistar с массой тела на момент начала экспериментов 190—230 г. Моделирование опухолевого процесса производили путем подкожной трансплантации всем животным, включенным в исследование, взвеси клеток

Спецвыпуск / том 17 / 2018

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ