CC BY
27
УДК 616-43
Патогенетические механизмы нарушения лимфатического дренажа печени и свертываемость лимфы при экспериментальном сахарном диабете
Нифталиева С.Ф.
Кафедра патологической физиологии Азербайджанского медицинского университета, Баку
Аннотация. Целью настоящего исследования явилось изучение роли активации внутрисосудистого свертывания лимфы в нарушении лимфатического дренажа печени при моделировании сахарного диабета у кроликов. Опыты проводились под наркозом, на 25 кроликах, обоего пола, породы «Шиншилла». Результаты исследования показали, что моделирование СД с внутривенным введением аллоксана способствовало к активации внутрисосудистого свертывания лимфы. О чем свидетельствует весьма выраженные гиперкоагуляционные изменения таких показателей свертываемости в лимфе, как КВ, КфВ, АЧТВ, ПВ и ТВ. По мере увеличение срока исследования выявленные сдвиги усугублялись на фоне заметного угнетения лимфатического дренажа печени. При этом весьма выражено уменьшалась СЛО из грудного протока. Сравнение полученных данных с литературными, позволяет утверждать, что внутрисосудистая активация лимфы занимает одно из важных мест в патогенезе нарушение лимфатического дренажа печени и, следовательно, в патогенезе печеночных осложнений СД.
Ключевые слова: лимфа, свертываемость, сахарный диабет, лимфатический дренаж печени.
За последнее время количество больных с сахарным диабетом (СД) во всем мире прогрессивно увеличивается. Число вновь заболевших СД, независимо от возраста, ежегодно увеличивается на 5-7% и каждые 10-15 лет их количество удваивается [7, 9, 25]. Актуальность проблемы, прежде всего, определяется широкой распространенностью СД и ранней инвалидизацией больных [3, 10, 24].
Известно, что при сахарном диабете страдают все виды обмена веществ: вследствие нарушения проникновения глюкозы в клетку развивается стойкая гипергликемия, резко снижается синтез белка, замедляется тканевое дыхание, нарушается продукция АТФ, повышается образование кетоновых тел и триглицеридов в печени, в результате генерации большого количества свободных радикалов образуются и накапливаются высокотоксичные липоперекисные соединения [8, 15]. Эти метаболические нарушения являются причиной развития таких осложнений, как ангиопатия, ретинопатия, периферическая нейропатия, жировая инфильтрация печени и т.д. [6]. Весомое место среди висцеральных поражений при сахарном диабете занимают изменения органов пищеварения, встречающиеся с частотой от 30 до 83 % [16]. Целый ряд исследователей обращают внимание
на частое поражение гепатобилиарной системы у больных сахарным диабетом с развитием жирового гепатоза и атонии желчного пузыря [16, 18, 19, 20]. Не в полной мере ясен патогенез поражения печени при сахарном диабете. Инициация процессов перекисного окисления липидов с образованием активных форм кислорода, избыточное накопление которых приводит к формированию синдрома цитолиза, холестаза, хронизации поражения печени [18, 19], а также гликозилированию белков, ведет к развитию сосудистых осложнений, «ответственных» за тяжесть сахарного диабета и инвалидизацию больных [2, 5, 19]. В то же время известно, что актвация ПОЛ приводит к эндотелиальной дисфункции с последующей активацией внутрисосудистого свертывания крови [5, 12, 17, 22, 23]. Последнее играет важную роль в патогенезе сосудистых осложнений СД со всеми вытекающими отсюда последствиями. Вместе с тем установлено, что при различных патологиях нарушения в системе гемостаза сопровождается с активацией внутрисосудистого свертывания лимфы и расстройствам лимфатического дренажа тканей [13, 14]. Последние способствуя накоплению в межклеточном пространстве различных токсичных метаболитов, крупномолекулярных частиц поврежденных клеток, усугубляет эндотоксикоз на клеточном и органном уровней. Все это отягощает течение основного заболевания. Однако до настоящего времени состояния свертываемости лимфы и лимфатического дренажа печени, их роль в патогенезе печеночных осложнений при сахарном диабете не исследовано.
Исходя из вышеизложенного целью настоящего исследования явилось изучение состояние свертываемости лимфы и лимфатического дренажа печени и их роль в возникновении печеночных осложнений при экспериментальном СД.
Материал и методы исследования
Опыты проводились на 25 кроликах, обоего пола, породы «Шиншилла», весом 2,2-3,0 кг, которые содержались вивариуме на стандартном рационе. Для моделирование СД животным внутривенно вводили 5% водный раствор аллоксана (Mol Weight: 244. 13), в дозе 150 мг/кг при этом накануне в течение ночи (корм убирали за 14 час) животные не получали пищи. Проводили регулярный динамический контроль за развитием сахарного диабета, определяя уровень глюкозы крови натощак при помощи глюкометра (SensoLite Nova, Budapest-Hungary) на 15, 30, 60, 90 и 120-е сут. после введения аллоксана. Продолжительной гипергликемии (уровень глюкозы
Таблица. Состояния свертываемости лимфы и лимфатического дренажа печени при моделировании аллоксаного сахарного диабета. (М±т; п=33)
Показатели Исходный фон Сахарный диабет Периоды исследования (сутки)
15 30 60 90 120
N 5 5 6 4 5 5 5
КВ(с) 72,3 ± 4,4 62,1 ± 3,3 н.д. 55,5 ± 4,6 * 51,4 ± 4,3 *** 46,7± 4,2 *** 59,4± 3,9 *** 60,6±3,1 ***
КфВ (с) 80,9 ± 4,5 80,8 ± 4,1 * 71,6 ± 4,2 ** 66,7 ± 3,9 ** 55,6± 3,2 *** 69,1 ± 4,1 *** 75,6±6,2 *
АЧТВ(с) 56,7 ± 3,9 52,4 ± 3,6 н.д. 50,9 ± 4,5 * 41,7 ± 4,1 ** 37,9 ±3,5 *** 46,7 ± 3,5 ** 52,4±5,1 н.д.
ПВ(с) 35,8 ± 2,4 31,3 ± 1,1 н.д. 30,4 ± 1,4 * 26,7 ± 2,2 ** 30,4 ± 2,1 * 31,4 ± 1,6 н.д. 37,4±2,2 *
ТВ (с) 27,4±1,5 22,3 ± 1,3 * 21,6± 1,1 *** 19,7 ± 0,0 ** 21,2 ± 0,6 н.д. 28,4± 0,7 д.д. 34,21±1,4 ***
КцФ(г/л) 2,1±0,01 2,4±0,02 н.д. 2,7±0,02 н.д. 2,5±0,01 н.д. 2,2±0,02 * 2,0±0,01 ** 2,4±0,01 ***
РКФМ(+-) - - + + + + +
ПДФ(+-) - - + + + +
AT-iii(o) 140,4±5,2 136,7±5,3 ** 155,7±7,4 * 120,7±5,9 *** 115,9±6,1 *** 122,7±5,3 * * 124,7±5,2 д.д.
ФА(мин) 17,2±1,1 16,1±1,1 н.д. 19,0±1,0 н.д. 22,4±1,1 ** 16,7±0,7 ** 14,9±0,8 н.д. 16,7±0,5 ***
СЛО (мл.кг/мин) 0,22±0,02 0,26±0,03 ** 0,25±0,02 ** 0,20±0,02 н.д. 0,15±0,01 ** 0,14±0,03 *** 0,13±0,02 **
Примечание: статистически значимая разница с исходными показателями: * - p<0,05; **- p<0,01; ***- p<0,001
превышал исходные данные, более чем в два раза) наблюдали через 2 недели после инъекции аллоксана, что считали моделирования СД состоявшийся.
Для анализов, лимфу получали из дренированного грудного протока по методу А. А. Крниенко и др. (1977) с модификацией М.Х. Алиева и В. К. Мамедова (1990). При этом в качестве наркозных средств использовали растворы калипсола (8 мг/кг) и димедрола (0,15 мг/кг-1%-го раствора), который вводили в ушную вену ухо кролика. Состояние системы свертывания, антисвертывания и фибринолиза (САФ) лимфы оценивали по комплексу общепринятых пробирочных тестов таких, как каолиновое время (КВ), кефалиновое время (КфВ), активизированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), протромбиновое время (ПВ), тромбиновое время (ТВ), концентрация фибриногена (КцФ), растворимые фибрин мономерные комплексы (РФМК), продукты деградации фибриногена (ПДФ), антитромбина-111 (АТ-III) и фибринолитической активности (ФА). Изученные показатели свертываемости лимфы определяли на полуавтоматическом коагулометре «Хумаклот-Дуо» (Германия) с помощью готовых наборов реактивов фирмы «Хуман» (Германия) и «Коагулотест» (Россия). О состоянии дренажной функции лимфатической системы печени судили на основании определения скорости лимфооттока из дренированного грудного протока. Известно, что лимфа грудного протока 70-80% состоит из печеночной лимфы. Скорость лимфооттока (СЛО) из грудного протока определяли по объему лимфы, оттекающей из дренированного грудного протока в
единицу времени.
Цифровые результаты эксперимента статистически обрабатывались с применением непараметрических и параметрических методов анализа; данные обрабатывались при помощи пакетов программ EXCEL и Statistika по Стьюденту-Фишеру и методом Вилкоксона.
Результаты и их обсуждение
Из представленных данных (таблица) видно, что моделирование сахарного диабета приводит к значительным изменениям свертывающей способности лимфы, полученной из дренированного грудного протока. Заметные гиперкоагуляционные изменения в лимфе появились на 15 сутки исследования. По мере увеличение срока исследования гиперкоагуляционные сдвиги в лимфе усугублялись. Так, через 30 сутки исследования оно выражалось в укорочении (по сравнении c нормальными величинами) таких показателей САФ в лимфе, как КВ, КфВ, АЧТВ, ПВ и ТВ, соответственно на 28,9%, 17,6%, 26,5%, 25,4% и 28,1% (р >0,05-0,001). В этот период исследования появились в лимфе маркеры активации внутрисосудистого свертывания - РКФМ и ПДФ на фоне увеличе
ния ФА лимфы. Такая динамика изученных показателей наблюдалась и в последующих периодах исследования. Так, через 60 суток исследования КВ, КфВ и АЧТВ лимфы максимально укорачивались (составляли 64,6%, 68,7% и 66,8% соответствующего исходного показателя), а при исследовании показателей ТВ и ПВ выявляли обратную волну сдвигов - обе показатели по сравнению
с предыдущими начали возрастать на фоне угнетении активности АТ-III и ФА лимфы. Обратная волна сдвигов обнаружили и в последующем периоде исследования при определении показателей КВ, КфВ и АЧТВ. Так, КВ, КфВ и АЧТВ через 60 сутки исследования возрастали до 81,2%, 85,4% и 82,3% от соответствующих исходных показателей (р< 0,01-0,001). При этом ФА лимфы максимально снижалось - до 86,6% от исходного уровня (p<0,05). Изученные показатели свертываемости лимфы в дальнейшем сохраняли такую динамику, постепенно возрастали и некоторые показатели (КфВ, АЧТВ и ПВ) к концу исследования нормализовались, а ТМ лимфы даже превышало соответствующий исходный показатель на 24,4% (р< 0,01). Несмотря на то, что КВ лимфы также возрастали, однако не достигало до исходного уровня, составляло 83,8% исходной величины (р< 0,05). Как уже отмечали, начиная с 15 сутки исследования, в лимфе появились маркеры внутрисосудистого свертывания такие, как РКМФ и ПДФ. По мере увеличения срока исследования их концентрация в лимфе постепенно возрастала. Активность фибринолитической системы в течение 15 и 30 суток заметно возрастала, превышая исходный уровень на 10,5% и 30,2 %, соответственно (р< 0,05-0,01). Однако активность АТ-III через 15 суток исследования имела только тенденцию к увеличению, а через 30 суток исследования снижалась и через 60 суток исследования - даже ниже нормы на 17,5% (р< 0,05). К значительным изменениям подвергалась также СЛО из грудного протока. Так, в начале исследования (в течение 30 суток после инъекции аллоксана) СЛО из грудного протока имела тенденцию к возрастанию. Однако, начиная с 30 сутки исследования СЛО из грудного протока постепенно угнеталась, через 90 дней исследования -до 55,0% от исходного (р< 0,001).
Таким образом, результаты наших исследований показали, что при моделировании сахарного диабета лимфатический дренаж печени нарушается на фоне внутрисосудистой активации свертываемости лимфы. О чем свидетельствует заметное уменьшение СЛО из грудного протока. Сопоставляя данные настоящего исследования с литературными [4, 13, 14], можно заключить, что внутрисосудистая активация свертываемости лимфы и угнетение лимфатического дренажа тканей на уровне грудного протока отрицательно влияют на дренажную функцию лимфатической системы печени при моделирование аллоксанового СД. Все это создают условия для накопление в межклеточном пространстве печени токсичных продуктов нарушенного метаболизма, усугубление ендотоксикоза на клеточном и органном уровней со всеми отсюда вытекающими последствиями. Подытоживая вышеизложенные можно прийти к мнению, что при построении лечебно-профилактических мероприятий печеночных осложнений у больных с сахарным диабетом необходимо учесть состояние свертываемости лимфы и лимфатического дренажа печени.
Литература
1. Алиев М.Х., Мамедов В.К. Способ получения лимфы в хроническом эксперименте. Удостов. на рац. предл. АМУ-Баку, № 264, от 10 мая 1990 года, 6с.
2. Балаболкин М.И. Патогенез и механизм развития ангиопатий при сахарном диабете//Кардиология, 2000, №10, с.74-87.
3. Балаболкин М.И., Клебанова Е.М., Креминская
В.М. Современные вопросы классификации, диагностики и критерии компенсации сахарного диабета //Клиническая медицина. 2003, №4, с.23-25.
4. Гасанова З.В., Мамедов Я.Д,, Алиев М.Х. Нарушения свертываемости крови и лимфы при экспериментальном гепатите.//Азербайджанский Медицинский Журнал, 2009, №1, с.65-68
5. Датиева Ф. С., Дзугкоев С. Г. Особенности изменений в системах гемос таза и микроциркуляции при экспериментальном сахарном диабете/ Материалы конференции молодых ученых СОГМА. 2007, с.45-48
6. Дедов И.И. Сахарный диабет /И.И. Дедов. М.: Врач, 2000, 102 с.
7. Демидова Т. Ю., Аметов А. С. Патогенез ИНСД // Русский мед. журнал, 1998, т.6, № 2, с.757-758.
8. Дедов И.И., Балаболкин М.И., Мамаева Г.Г., Клебанова Е.М. Роль окислительного стресса, апоптоза, инсулиновой резистентности и нарушений липидного обмена в патогенезе сахарного диабета и его сосудистых осложнений: пособие для врачей./ М., 2005, 76 с.
9. Дзугкоева Ф.С., Дзугкоев С.Г., Хетагурова Л.Г. Изменения гемодинамики, перекисного окисления липидов и системы гемостаза при экспериментальном сахарном диабете// Фундаментальные исследования, 2008, №8, с.105-106
10. Дроздова, Е.А. Эпидемиология сахарного диабета сегодня и в будущем /Матер. IV Региональной научно-практической конференции «Молод- дежь XXI века - шаг в будущее». Благовещенск, 2003. с. 212.
11. Кахновский И. М., Королева Т. В. О взаимосвязи функционального состояния печени
и микрососудистых поражений при сахарном диабете// Развитие идей акад. В. X. Василенко в современной гастроэнтерологии. М.,1993, т.1, с. 184-186
12. Ключерева Н. И., Колесниченко Л. Р., Хамаева Ц. Б. Коагуляционный гемостаз при сахарном диабете первого типа// Забайкальский медицинский вестник, Чита, 2004, №4, с.44-47
13. Левин Ю.М. Практическая лимфология. Баку, «Маариф», 1982, 302с.
14. Мамедов Я.Д. Инфаркт миокарда. Лимфатическая система сердца. Патофизиология и патогенетические основы лечения. М.: Медицина, 1989. 224с.
15. Никифоров О. Н., Сазонова О. В., Суханова Л. Я., Князькова Л. Г., Галенок В. А. Перекисное окисление липидов и состояние системы антиоксидантной защиты у больных инсулинзависимым сахарным диабетом//Пробл. эндокринологии, 1997, № 5, с.16-19
16. Саратиков А. С., Венгеровский А. И., Чучалин В. С. Экстракт солянки холмовой (лохеин) эффективная защита печени. Томск.: изд-во Сиб. гос. мед. университета, 2000, c.113
17. Солун М.Н., Киричук В.Ф., Дихт Н.И. Особенности микроциркуляторного гемостаза при сахарном диабете// Фундаментальные исследования, 2008, № 6, c. 67-69
18. Туркина С. В. Состояние антиоксидантной системы при диабетическом поражении печени.: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Волгоград, 1999, 23 с.
19. Хворостинка В. Н. Функциональное состояние печени у больных сахарным диабетом // Врач. дело, 1982, № 9, с.33-36.
20. Luycho F. H., Lefebvre P. G., Scheen A. G. Non- alcoholic steatohepatitis association with obesity and insulin resistance, and influence of weight lose //Diabetes- Metab.-2000.- Vol.26.- № 2 - P. 98-106
21. Rolo A., Palmeira C. Diabetes and mitochondrial function: role of hyperglycemia and oxidative stress // Toxicol. Appl.
Pharmacol., 2006, v.212, №2, Pp.167-178
22. Jain S. K., Mohan-des N., Clark M. R. et al. The effect of malonildialdehyde, a product of lipid peroxidation, on deform-ability, dehydratation and Cr51-survival of erythrocytes.// Brit J. Haemat,1983, v.53, p.247-255
23. Vagua P., Juhan-Vagua I. Fibrinigen, fibrinolisis and diabetes mellitus: a comment, Diabetologiya, 1997, 40(6), 738-740
24. Wild S., Roglic G., Green A. et al. Global prevalence of diabetes: estimates for the year 2000 and projections for 2030//Diabetes Care, 2004, v.27, p. 1047-1053.
25. Zimmet P.Z. Diabetes epidemiology asa tool to trigger dibetes research and care. Diabetologia, 1999, 42, pp.499-518.
Summary
Pathogenetic mechanisms disturbances of lymphatic drainage of a liver and coagulability of lymph in experimental diabetes mellitus
Niftaliyeva S.F.
Department pathological physiology of Azerbaijan Medical University, Baku.
Keywords: lymph, coagulability, diabetes mellitus, lymphatic drainage of heart.
Purpose of this research is studying the role activation of intravascular coagulation of lymph in disturbances lymphatic drainage of the liver in modeling diabetes mellitus (DM) in rabbits. Experiments were under narcoses on 25 rabbits, both sexes, breed of "Chinchilla". Results of investigations showed, that modeling of diabetes mellitus with intra-venous administration of alloxan contributed to activation of intravascular coagulation of lymph. Significance hyper coagulation changes in the indices of coagulation in lymph, as KT, KfT, PATT and TT are evidenced about it. With increasing duration of investigations identified changes aggravated in the phone of significance inhibition of lymphatic drainage of tissues liver. It is thus very expressed the speed of lymphatic outflow of their chest channel decreased. Comparison of the results with literature, allow claim, that intravascular activation of lymph take one of the main place in the pathogenesis disturbances of lymphatic drainage of the liver, and sequent, in the pathogenesis of hepatic complications in DM.
