CC BY
36
I. ДИАГНОСТИКА И ЛЕЧЕНИЕ
ОКСИДАТИВНЫЙ СТРЕСС В ПАТОГЕНЕЗЕ НАРУШЕНИЙ МИКРОЛИМФОЦИРКУЛЯЦИИ ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ
Гасимова А.Ш., Алиев М.Х., Алиев С.Д., Джафарова Н.А., Алиев Э.М., Мамедзаде А.Я., Алиев О.С., Шахвердиев Г. Г.
Кафедра патологической физиологии Азербайджанского Медицинского Университета г. Баку
Аннотация
Целью настоящего исследования явилось изучение окислительного стресса и свертываемости лимфы при экспериментальном СД и их взаимосвязь с лимфатическим дренажом тканей. Опыты проводились на 20 кроликах, обоего пола, породы «Шиншилла», весом 2,2-3,0 кг. В качестве наркозного средства использовали растворы калипсола (8мг/кг) и димедрола (1% раствор-0,15 мл/кг), которые вводили внутривенно. Результаты настоящего исследования показали, что моделирование аллоксанового сахарного диабета у кроликов приводит к активации свободно радикального окисления на фоне угнетении лимфатического дренажа тканей. При этом в лимфе, также и в крови были обнаружены маркеры активации свертываемости лимфы и эндотелиальной дисфункции таких, как ФВ, РКМФ и ПДФ. Сопоставляя данные настоящего исследования с литературными сведениями можно прийти к заключению, что моделирование аллоксанового СД способствует не только повышению свертываемости крови с последующим нарушением микрогемоциркуляции, но и повышению свертываемости лимфы с последующим нарушением микролимфоциркуляции. Последнее в наших исследованиях проявилось в виде уменьшение СЛО из дренированного грудного протока и угнетение лимфатического дренажа тканей.
УДК 616.379 - 00.864
ОБ АВТОРАХ
Гасимова А.Ш. -ассистенткафедры патофизиологии АМУ
Алиев М.Х. - профессор кафедры патофизиологии АМУ
Алиев С.Д. - д.м.н., профессор, зав. кафедрой патофизиологии АМУ
Джафарова Н.А. - ассистент кафедры патофизиологии АМУ
Алиев Э.М.- ст. лаб. кафедры хирургии полости рта и челюстно-лицевой области Азербайджанского АМУ
Мамедзаде А.Я. - ассистент кафедры внутренних болезней-ll АМУ
Алиев О.С.- доц. Кафедры ортопедической стоматологии АМУ
Шахвердиев Г.Г. - ст. лаб. кафедры патофизиологии АМУ
Ключевые слова
сахарный диабет, окислительный стресс, кровь, лимфа, свертываемость, микролимфоциркуляция
Кант диабет кезшде микролимфоциркуляцияньщ бузылу патогенезшде оксидативт стресс!
Гасимова А.Ш., Алиев М.Х.,Алиев С.Д., Джафарова Н.А., Алиев Э.М., Мамедзаде А.Я., Алиев О.С., Шахвердиев Г.Г.
Эз1рбайжан медицина университетшщ патологиялык, физиология кафедрасы, Баку к,. Ацдатпа
Осы зерттеуд/ц манаты эксперименталды кант диабет кез/ндег/ кышкылдану стресс/н жэне лимфаныц уюын зерттеу, сондай-ак т/ндерд/ц лимфалык кэр/здеу/мен езара байланысын зердеделеу болып табылды. Сынамалар жыныстары эртурл/, «Шиншилла» тукымды, салмат: 2,2-3,0 кг 20 уй коянына жург/з/лд/. Наркоз дэрмеп рет/нде калипсол (8мг/кг) жэне димедрол (1% ертнд/с/ - 0,15 мл/кг) колданылган, аталмыш дэр 'шерд/ тамыр/ш/не енг/зген. Осы зерттеуд/ц нэтижелер/ уй кояндарында аллоксан кант диабет/н модельдеу т/ндерд/ц лимфалык кэр/здеу кажуы ерк/н радикалды кышкылдануы белсенд/ болуына ыкпалын тиг/зед¡. Сонымен катар лимфада, сондай-ак канында лимфаныц уюын белсенд/рет/н маркерлер, солай да ФВ, РКМФ жэне ПДФ сиякты эндотелиальды дисфункци-ялары аныщталган. Осы зерттеуд/ц деректер/н эдебитеттеп мэл/меттер/мен салыстыра отырып, аллоксан кант диабет/н модельдеу, микрогемоциркуляцияныц тек кана алдагы бузылуымен канныц уюыныц артуына гана емес, сондай-ак микролимфоциркуляцияныц кей/нг/ бузылуымен лимфаныц уюы асып кету/не ыкпалын типзет/нд/п жайлы корытындыга келуге болады. Соцгы сипатталган жайттыц нэтижес/нде б/зд/ц зерттеулер/м/зде кэр/зденген кеуде тут/г/нен жэне т/ндерд/ц лимфалык кэр/здеу/н/ц кажуынан СЛО азаюы аркылы кер/нд/.
АВТОРЛАР ТУРАЛЫ
Гасимова А.Ш. - ЭМУ патологиялык физиология кафедрасынын ассистент/;
Алиев М.Х. - ЭМУ патологиялык физиология кафедрасынын профессоры;
Алиев С.Д. - профессор, ЭМУ патологиялык физиология кафедрасынын менгеруш/с/;
Джафарова Н.А. - ЭМУ патологиялык физиология кафедрасынын ассистент/;
Алиев Э.М. - ЭМУ ауыз к±ысы мен бет жак хирургиясы кафедрасынын ага лаборанты;
Мамедзаде А.Я. - ЭМУ кафедрасынын II /шк/ аурулар кафедрасынын ассистент/;
Алиев О.С. - ЭМУ ортопедиялык стоматология кафедрасынын доцент/.
Шахвердиев Г.Г. - ЭМУ патологиялык физиология кафедрасынын ага лаборанты
Туйш сездер
кант диабетi, кышкылдану стрессi, кан, лимфа, кан уюы, микролимфоциркуляция.
ABOUT THE AUTHORS
Gasimova A.SH. - assistent the Department of Pathophysiology, AMU
Aliyev M.H. - Professor of the Department of Pathophysiology, AMU
Aliyev S.D. - Professor, Head of the Department of Pathophysiology, AMU
Jafarova N.A.- assistant of the department of pathophysiology, AMU
Aliyev E.M. - Senior assistant of the department of surgery of the oral cavity and maxillofacial region, AMU
Mammadzade A.Ya. - Assistant of the Department of Internal Medicine-II, AMU Aliyev O.S. - Associate Professor of Prosthetic Dentistry, AMU
Shahverdiev G.G. - Senior assistant Department of Pathophysiology of the AMU
Keywords
diabetes mellitus, oxidative stress, blood, lymph, coagulability, microlymphocirculatio
Oxidative stress in a pathogenesis of disturbances of a mikrolymphocircul-ation at a diabetes mellitus
Gasimova A. Sh., Aliyev M. KH., Jafarova N. A., Aliyev E. M., Mamedzade A.Y., Aliyev O. S.,Shakhverdiyev G. G.
Department of pathological physiology of the Azerbaijani Medical University. Baku
Abstract
The purpose of the real research was studying of an oxidizing stress and coagulability of a lymph at experimental DM and their interrelation with a lymphatic drainage of tissues. Experiments were made on 20 rabbits, of both sexes, breeds "Chinchilla", weighing 2,2-3,0 kg. As a narcotic agent used Kalipsolum solutions (8mg/kg) and Dimedrolum (1% ml/kg solution-0,15) which entered intravenously. Results of the real research showed that modeling of an alloxanic diabetes mellitus at rabbits leads to activation of free radical oxidation against the background of oppression of a lymphatic drainage of tissues. At the same time in a lymph as well in a blood markers of activation of coagulability of a lymph and endothelial dysfunction such as WF, soluble complexes of monomers of fibrin and fibrinogen degradation products were found. Comparing data of the real research with literary data it is possible to come to conclusion that modeling of alloxanic DM promotes not only to rising of coagulability of a blood with the subsequent disturbance of microhaemocir-culation, but also to rising of coagulability of a lymph with the subsequent disturbance of a mikrolymphocirkulyation. The last in our researches was shown in a look decrease of speed of lymphatic outflow from the trained thoracal duct and oppression of a lymphatic drainage of tissues.
Как известно, декомпенсация сахарного диабета (СД) приводит к глубоким нарушениям гомеостаза, в том числе клинически значимым расстройствам коагуляционного и сосудисто -тромбоцитарного звеньев гемостаза на фоне эндотелиальной дисфункции, обусловленной метаболическим и окислительным стрессом, гипергликемией и гиперлипид-емией [7, 13, 14, 15, 20, 21]. Традиционная терапия заболевания, частично нормализующая углеводный обмен, не устраняет метаболических нарушений и поэтому не предотвращает развитие тяжелых сосудистых осложнений диабета, которые являются одной из наиболее частых причин инвалидности и смерти больных СД [2, 14, 19]. При этом значительная частота микроангиопатий нередко определяющие прогноз и особенности течения заболевания, обуславливают важность изучения микроциркуляции при сахарном диабете, в патогенезе которого большое значение отводится изменениям системы гемостаза и реологическим нарушениям [11, 13, 18].
В литературе широко представлены гемоцир-куляторные нарушения при СД, и в единичных работах - микролимфоциркуляторные расстройства [5,8, 16]. Недостаточность исследований микролимфоциркуляции послужило основанием для проведения настоящего исследования, целью которого явилось изучение окислительного стресса и свертываемости лимфы при экспериментальном СД и их взаимосвязь с лимфатическим дренажом тканей.
Материал и методы исследования.
Опыты проводились на 20 кроликах, обоего пола, породы «Шиншилла», весом 2,2-3,0 кг. В качестве наркозного средства использовали растворы калипсола (8мг/кг) и димедрола (1% рас-твор-0,15 мл/кг), которые вводили внутривенно. Животных содержали в условиях вивария при стандартной температуре с естественным освещением и свободным доступом к воде и корму. После предварительной 24-часовой депривации пищи (при сохраненном доступе к воде) у кроликов моделировали сахарный диабет путем однократного внутривенного введения 5% водного раствора аллоксанамоногидрата (Malakoff, France - «Keocyt») в дозе 150 мг/кг [4, 22]. Моделирование диабета происходило в течение 2-х недель, летальность составила 20%. Для сравнения использовали 5 животных с введением дистиллированной воды в объеме 2,0 мл (контроль). Для уменьшения гибели животных вследствие гипогликемического шока кролики после индукции диабета вместо воды получали 5%-ый раствор глюкозы. После введения аллоксана в 15% животных развивалось крайне тяжелое состояние с гипергликемией выше 30 ммоль/л, поэтому они были выведены из эксперимента на 5-е сутки. В эксперименте использовали животных с сахарным диабетом средней тяжести (с уровнем глюкозы крови натощак от 10 до 20 ммоль/л). Для анализов кровь брали из краевой вены ухо кролика, а лимфу из дренированного грудного протока по методу A.A. Корниенко с соавт. [9],
в модификации Qliyev M.X. vsMsmmsdov V.Q. [1]. Скорость лимфооттока (СЛО) определяли по объему лимфы, оттекающей из дренированного грудного протока в единицу времени. О состоянии системы свертываемости крови и лимфы судили по комплексу следующих показателей; каолиновое время (KB), кефалиновое время (КфВ), активированное частичное тром-бопластиновое время (АЧТВ), протромбиновое время (ПВ), тромбиновое время (ТВ), активность антитромбина-III (А-III), фактор Виллебранда (ФВ), концентрация фибриногена (КцФ), фи-бринолитическая активность (ФА), растворимые комплексы фибрин-мономеров (РКФМ) и продукты деградации фибриногена (ПДФ). Изученные показатели свертываемости крови и лимфы определяли на полуавтоматическом ко-агулометре «Хумаклот-Дуо» (Германия) с помощью готовых наборов реактивов фирмы «Хуман» (Германия) и «Коагулотест» Россия. О состоянии перекисного окисления липидов (ПОЛ) судили по комплексу следующих показателей - содержания малоновогодиальдегида (МДА) - по методу Л.И. Андреева с соавт. [3], диэновыхконъюгатов (ДК) - по методу В.Б. Гаврилова с соавт. [6]и восстановленного глютатиона (ВГ) - по методу G.H. Ellman[6], активности каталазы (АК) и суперок-сиддисмутазы (СОД) - по методу М.А. Королюк с соавт.[10]и Чевари С. С.соавт., [17]. Забор крови и лимфы для анализов проводили в исходном состоянии и на 5, 15, 30, 60 и 90 сутки после введения аллоксана.
При статистической обработке цифровых результатов исследования применяли параметрические и непараметрические методы анализа; данные обрабатывались при помощи пакетов программ EXCEL и Statistika по Стьюденту-Фи-шеру и методом Вилкоксона.
Результаты исследования и их обсуждение: Результаты исследования показали, что вве-
дения аллоксана способствует значительной активации процессов ПОЛ на фоне угнетении антиоксидантного потенциала (АОП) в лимфе (таблица 1.). Весьма заметные изменения показателей ПОЛ в лимфе фиксировали, начиная через 5 суток исследования. Это выражалось в увеличении содержании в лимфе продуктов ПОЛ, таких как ДК (превышал исходный уровень на 93,3%) и МДА (был больше нормы на 32,2%). При этом показатели антиоксидантной системы к существенным изменениям не подвергались. По мере увеличение срока исследования (в течение 30 суток после введение аллоксана) содержание МДА и ДК в лимфе неуклонно возрастали, превышая исходные показатели на 90,3% и более чем в 2,2 раза (через 15 суток исследования), а также - на 93,5% и более чем в 2,5 раза (через 30 суток исследования), соответственно (р< 0,001).Все это сопровождалось с уменьшением (через 30 суток исследования) активности СОД и содержании ВГ до 64,2% и 71,4% соответствующего исходного уровня (р< 0,01-0,001). Однако АК в указанный период исследования заметно (на 41,2%) возрастала (р< 0,01). Все это свидетельствует о развитии окислительного стресса на фоне уменьшение АОП лимфы после введения аллоксана. В дальнейшем наблюдали обратную волну сдвигов изученных показателей. Однако ни один показатель до конца исследования не достигали соответствующего исходного уровня, окислительный стресс сохранялся в течение всего периода исследования.
Результаты исследования свертываемости лимфы, полученной из дренированного грудного протока, представлены в таблице №2. Как видно из нее моделирование СД у кроликов приводит к весьма выраженным гиперкоагуляционным сдвигам в лимфе на фоне заметного угнетения лимфатического дренажа тканей. Следует отметить, что гиперкоагул-яционные сдвиги в лимфе
Исходное состояние Сроки после введение аллоксана (сутки)
Показатели 5 15 30 60 90
n 7 5 5 5 5 5
ДК 232k 1,5±0,02 2,9±0,02*** 3,4±0,03*** 3,8±0,02*** 2,7±0,03*** 2,2±0,02**
МДА мкм/л 3,1±0,5 4,1±0,4** 5,9±0,8*** 6,0±0,6*** 5,5±0,5*** 4,2±0,3**
СОД %e.a. 55,9±2,3 54,4±4,1 40,9±3,1** 35,9±2,8*** 39,8±2,4*** 45,5±2,6**
АКм.кат/л 151,8±6,4 149,9±5,9 170,8±7,2* 214,4±6,9*** 195,7±6,1** 190,4±5,8**
ВГ mkM/ml 4,2±0,4 4,0±0,2 3,6±0,19* 3,0±0,4** 3,4±0,2** 3,9±0,3
LAS ml.dsq/kq 0,19±0,01 0,27±0,02** 0,22±0,01* 0,15±0,02** 0,13±0,01*** 0,13±0,01***
Таблица 1.
Динамика показателей липопероксидации и антиоксидантной системы лимфы при экспериментальном сахарном диабете. (M±m).
Таблица 2
Динамика показателей свертываемости лимфы и лимфатического дренажа тканей при экспериментальном сахарном диабете. (М±п)
Показ. Исходные Сроки после введение аллоксана (сутки)
данные 5 15 30 60 90
n 5 5 5 3 3 3
KB (с) 72,1±3,1 60,9±2,1* 47,4±2,5*** 49,4±2,7*** 56,4±2,2* 62,2±2,4*
КфВ (с) 91,4±3,4 70,4±3,1*** 57,5±2,1*** 61,6±2,6*** 70,9±2,8** 81,9±3,4*
АЧТВ (с) 57,2±2,1 51,2±2,1* 43,4±1,3** 37,4±1,1*** 45,4±2,1* 53,4±2,6
ПВ (с) 36,1±1,5 27,4±0,9*** 26,4±0,5*** 29,2±0,6*** 31,4±1,4* 39,2±1,6
ТВ (с) 29,1±0,8 20,1±0,5*** 17,4±0,9*** 21,4±0,4*** 27,1±0,5 25,4±0,4*
ФВ (%) 58,1±1,4 79,1±3,1*** 89,4±2,9*** 80,1 ±2,6*** 84,2±3,2*** 76,7±2,5**
КцФ (мг/%) 3,1±0,03 2,4±0,07** 3,5±0,06 4,2±0,07** 3,5±0,04 3,7±0,06*
АТ (с) 124,7±5,4 144,5±6,6* 167,1 ±7,1** 144,5±4,9* 154,9±5,1* 139,4±5,2*
ФА (мин.) 21,4±0,9 24,1±0,4* 20,2±0,3 17,4±0,8** 16,1±0,3*** 19,4±0,4
РКФМ(+-) - + + + + +
ПДФ (+-) - + + + + +
СЛО мл.мин/кг 0,19±0,01 0,27±0,02** 0,22±0,01 0,15±0,02** 0,13±0,01*** 0,13±0,01***
фиксировали, начиная с 5 суток исследования. Наиболее выраженные сдвиги были обнаружены через 15 суток исследования, что выражалось в укорочении КВ, КфВ, АЧТВ, ПВ и ТВ, а также в увеличении содержании ФВи КцФ по сравнению с соответствующими нормами на 34,3%, на 37,1%, на 24,1%, на 26,9%, на 40,2%, на 53,9% и на 12,9% (р<0,05-0,001). Все это сопровождалось с увеличением (по сравнению с исходным уровнем на 34,0%) активности
АТ-111 (р<0,01). В дальнейшем наблюдались обратная волна выявленных сдвигов показателей свертываемости лимфы. Исключение составляли АЧТВ и КцФ, которые в последующем периоде исследования (через 30 суток исследования) сохраняли предыдущую динамику, а затем, как и другие показатели стремились к соответствующим исходным показателям. Несмотря на то, что некоторые показатели свертываемости (АЧТВ, ПВ, АТ-111 и ФА) нормализовались, гиперкоагуля-ционные сдвиги в лимфе до конца исследования сохранялись. Об этом свидетельствует заметное укорочение КВ, КфВ и ТВ, а также появление в лимфе маркеров эндотелиальной дисфункции и внутрисосудистой активации свертываемости лимфы, таких как ФВ, РКФМ и ПДФ. Исследования СЛО из дренированного грудного протока показали, что моделирование экспериментального сахарного диабета приводило также к значительным изменениям. Сначала (через 5 суток исследования) СЛО из грудного протока заметно возрастала, превышая исходной величина
28,6%, а в последующих периодах исследования она постепенно снижалась, максимально через 60 суток исследования - составляла 66,6% исходного показателя (р<0,001), свидетельствует о значительном угнетении лимфатического дренажа тканей и расстройстве микролимфоцирку-ляции при аллоксановом сахарном диабете. В дальнейшем (через 90 суток исследования) СЛО из грудного протока начала возрастать, однако до конца исследования не достигала до исходной величины - возрастала до 85,7% от исходного (р< 0,05).
Таким образом, результаты настоящего исследования показали, что моделирование аллок-санового сахарного диабета у кроликов приводит к активации свободнорадикального окисления на фоне угнетении лимфатического дренажа тканей. При этом в лимфе, также и в крови были обнаружены маркеры активации свертываемости лимфы и эндотелиальной дисфункции таких, как ФВ, РКМФ и ПДФ. Сопоставляя данные настоящего исследования с литературными сведениями [8, 16] можно прийти к заключению, что моделирование аллоксанового СД способствует не только повышению свертываемости крови с последующим нарушением микрогемоциркуляции, но и повышению свертываемости лимфы с последующим нарушением микролимфоциркуляции. Последнее в наших исследованиях проявилось в виде уменьшение СЛО из дренированного грудного протока и угнетение лимфатического дренажа тканей.
References
1. 9liyev M.X., Msmmsdov V.Q. Xronikieksperimentds adadovsanlarandamsrlozilimfanunalinmasiusulu // Azsrbaycan Tibbjurnali, 1990, №11, P. 48-50
2. Ametov AS, Solovyova OL Hemostatic disorders in diabetes and ways of their correction with combina-
tion therapy of metformin and MW Diabeton // Diabetes, 2007, №3, p.33-39 3. Andreeva LI, Kozhemyakin, LA, Kiskun, AA Modification metodaopredeleniya lipid peroxides in the test with thio-barbituric acid .// Lab. business, 1988, № 11, p.41-43.
4. Baranov VG Experimental diabetes mellitus: a monograph. - L .: Nauka, 1983. p - 240
5. Bulekbayeva LE, Balhybekova AO, Abdreshov SN The functions of the lymphatic system in alloxan diabetes on the background of antioxidant protection. / Mat. International Conference "Fundamental Problems of Lymphology and cell biology at the background of antioxidant protection." Novosibirsk, 2008, p.83-84.
6. Gavrilova VB, AR Gavrilova, NF Khmara Change di-enovyhkonyugatov plasma by UV pogloscheniyugap-tenovyh and izopropanovyh extracts .// Lab. business, 1988, №2, p. 60-64
7. Zanozina OV The role of oxidative stress in the development and progression of long-term complications of type 2 diabetes. Features of antioxidant therapy. Author., Diss. MD, Nizhny Novgorod, 2010, 50 p.
8. Kamenskaya OV Systemic violations gemolimfot-sirkulyatsii in insulin-dependent diabetes mellitus, and methods of their correction using lymphotropic and efferent technologies. Diss. MD, Novosibirsk, 2007, 213p.
9. Kornienko AA, Kulikovskii NN, Sorokaty AE Catheterization of the thoracic duct in the experiment. Proc .: Topical issues topografichekoy anatomy and operative surgery. M .: 1977 vp.1, p.22-26
10. Koroljuk MA, Ivanova LI, Mayorov IG, Tokarev VE The method for determining the activity of catalase // Lab. A business. - 1988. - № 1. - P. 16-19.
11. EJ Kretova Disturbances of the hemostatic system in different periods in patients with diabetes. Diss. MD, Tomsk, 2008 146P.
12. Kucheryavenko AF Cpasov AA, Naumenko LV The impact of the new hypoglycemic compound limiglidol on hemostasis parameters in experimental diabetes mellitus // Problems of Endocrinology, 2015, №1, p. 51-56
13. Pavlishchuk SA, Petrik GG Indicators of protein and lipidnogospekt- moat and hemostasis in patients with type 1 diabetes with different expressions angiopathy // Diabetes 2010, №2, p. 63-68.
14. Poltorak VV, Krasov NS, MU Gorshunskaya Oxidative stress in the pathogenesis of diabetic microvascu-lar and macrovascular complications as a target for therapeutic intervention // Problems of endocrine pathology, 2012, №3, p.91-103
15. EA Reznikova The clinical significance of assessing the role of endothelial dysfunction in the pathogenesis of diabetic angiopatii. Diss. MD, Volgograd, 2014 115 p.
16. RK Sabirova Status mikrolimfotsirkulyatsii in insulin-dependent diabetes mellitus. Avtor.diss. MD, Almaty, 1999, 21 p.
17. Chevari S. Csaba I., J. Secchi The role of superoxide dismutase in oxidative cell-enforcement process and the method of its determination in biological materials // Lab. business, 1985, №11, P. 678-681.
18. Dunn E., Ariens R., Grant P. The influence of type 2 diabetes on fibrin struc-ture and function // Diabeto-logia, 2005, № 48, p.1198-1206
19. Lopes RD. Antiplatelet agents in cardiovascular disease. J. Thromb. Thrombolysis. 2011;31(3):306-309. doi: 10.1007/p 11239-011-0558-9
20. Gilani, S. Y.,Bibi S., Ahmed N., Shah S. R. Gender differences of dyslipidemia in type 2 diabetics // J. Aeub. Med. Coll. Abbottabad., 2010, vol. 22 (3), P. 146-148.
21. Mc Keage K., Keating G. M. Fenofibrate: a review of its use in dyslipidaemia // Drugs., 2011, Oct 1, vol. 71 (14), P. 1917-1946.
22. Tenner TE, Zhang XJ, Lombardini JB. Hypoglyce-mic effects of taurine in the alloxan-treated rabbit, a model for type 1 diabetes. AdvExp Med Biol. 2003; 526:97-104.
