CC BY
8
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XV, № 2, 2019
Материалы и методы. Исследованы образцы ДНК 211 больных ХЛЛ (127 мужчин — 60,2 % и 84 женщины — 39,8 %) с медианой возраста 63 года (размах: от 33 до 82 лет). У 101 (47,9 %) больного заболевание находилось в A-стадии, у 82 (38,9 %) человек — в B-стадии и у 28 (13,2 %) обследованных — в C-стадии. Группа сравнения включала 255 условно здоровых добровольцев в возрасте от 46 до 78 лет (медиана — 56 лет) и была представлена 146 (57,3 %) мужчинами и 109 (42,7 %) женщинами. Анализ полиморфизма G915C гена TGFb1 проводили методом аллель-специфической полимеразной цепной реакции с последующим электрофорезом в 7 %-ном полиакриламидном геле. Амплификацию осуществляли с использованием олигонуклеотидов и ДНК-полимеразы фирмы ООО «СибЭнзим» (Россия) на термоци-клере «Bio-Rad С-1000» (США).
Результаты. Обнаружено, что носители хотя бы одного «мутантного» аллеля +915С встречались достоверно чаще среди больных ХЛЛ, чем в группе сравнения (20,4 % vs. 9,4 %, р = 0,001; OR = 2,464, 95 %CI: 1,439-4,217). Нами выявлено, что в исследуемой популяции носительство
«мутантных» генотипов СО и СС увеличивало шансы риска развития заболевания в 2,5 раза. Также был оценен показатель атрибутивного популяционного риска (РАЯ). Для исследуемой популяции он составил 7%. Следовательно, возникновение заболевания у указанного процента пациентов, вероятно, обусловлено носи-тельством аллеля +915С. Кроме того, найдены гендерные и возрастные различия в частоте встречаемости «мутантного» аллеля С. Так, он чаще наблюдался у мужчин с ХЛЛ (20,5 % уб. 8,2 %, p = 0,004; ОЯ = 2,875, 95 % С1: 1,384-5,972) и у лиц младше 60 лет (20,0 % уб. 7,1 %, р=0,002; ОЯ = 3,269, 95 % С1: 1,489-7,177).
Выводы. Таким образом, полученные данные позволяют предположить, что полиморфизм О915С гена гена TGFb1 может вносить определенный вклад в развитие предрасположенности к хроническому лимфолейкозу. Также присутствие генотипов +915СС и +915СО гена TGFb1 у лиц мужского пола моложе 60 лет может являться генетическими маркерами повышенного риска развития хронического лимфолейкоза.
Т. Н. Жевак1, Т. В. Шелехова2, Н. П. Чеснокова2, И. А. Будник1, О. Е. Царева2, А. В. Чантуридзе2, П. Ф. Литвицкий1
1 Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Первый Московский Государственный Медицинский Университет имени И. М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, г. Москва
2 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Саратовский Государственный Медицинский Университет имени В. И. Разумовского», г. Саратов
ПАТОГЕНЕТИЧЕСКАЯ РОЛЬ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА В МЕХАНИЗМАХ ФОРМИРОВАНИЯ ХРОМОСОМНЫХ АБЕРРАЦИЙ ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ЛИМФОЛЕЙКОЗЕ
Введение. В-клеточный хронический лим-фолейкоз (В-ХЛЛ) является наиболее распространенной формой лейкоза у взрослых. В то же время известно, что окислительный стресс (ОС) играет важную роль в патогенезе неопла-зий различной локализации благодаря своей способности индуцировать повреждение ДНК. Однако характер ОС при В-клеточном хроническом лимфолейкозе (В-ХЛЛ), а также взаимосвязь между интенсивностью перекис-ного окисления липидов и частотой появления мутаций при В-ХЛЛ изучены недостаточно.
Цель. Определить уровни диеновых конъ-югатов (ДК), малонового диальдегида (МДА), нитрита (метаболита оксида азота) в сыворотке крови в качестве маркеров ОС, активность глутатионпероксидазы (ГП) и уровень церуло-
плазмина (ЦП) сыворотки крови в качестве маркеров антиоксидантной защиты (АОЗ), а также изучить взаимосвязь между этими маркерами и наличием цитогенетических аберраций (ЦА) у больных В-ХЛЛ.
Материалы и методы. В исследование было включено 64 пациента с B-ХЛЛ, которые были сгруппированы по стадиям в соответствии с классификацией Rai K. и соавторов (1975), а также по наличию/отсутствию ЦА. Типы мутаций и их частота в клетках B-ХЛЛ определялись методом флуоресцентной in situ гибридизации (FISH) с использованием следующих ДНК-проб: TP53 Deletion Probe(17p13.1); ATM Deletion Probe (11q22.3); 13q14.3 Deletion Probe (D13S319); IGH Breakapart Probe (14q32.33); 8q24.21 Breakapart Probe (c-MYC); MYB Deletion
VВсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «ГЕНЕТИКА ОПУХОЛЕЙ КРОВЕТВОРНОЙ СИСТЕМЫ -ОТ ДИАГНОСТИКИ К ТЕРАПИИ»
Probe (6q23.3). Уровни ДК, МДА и ЦП и активность ГП сыворотки крови оценивали спектро-фотометрически; уровень нитрита сыворотки определяли с помощью иммуноферментного анализа. Контрольная группа включала 30 практически здоровых доноров. Для выявления взаимосвязи между выраженностью ОС и частотой ЦА была проведена биномиальная логистическая регрессия.
Результаты. FISH-исследование позволило установить следующую частоту ЦА у пациентов с B-ХЛЛ: хромосомные аномалии были обнаружены у 42 пациентов (~65,6 %), у 22 пациентов ЦА не были выявлены. Наличие del 13q14.3 как единственной аномалии имело место у 19 пациентов (~29.7 %), del 11q22.3 — у 5 пациентов (~7,8 %), del 17р13.1 — у 4 пациентов (6,25 %), множественные ЦА установлены у 14 пациентов (~21,9 %). Аберраций хромосом 14 и 6 обнаружено не было. Уровни ДК, МДА, ЦП и нитрита в сыворотке крови были достоверно увеличены во всех группах пациентов по сравнению с контрольной группой. Одновре-
Санкт-Петербург 26-27 апреля 2019 г.
менно наблюдалось снижение активности ГП в сыворотке пациентов всех групп, что коррелировало со стадией заболевания. Однако из пяти предикторов статистически значимыми оказались только два — ДК и ЦП. Установлено, что вероятность наличия скрытой мутации увеличивается в 2,77 раза при увеличении уровня ДК на одну единицу (нмоль/мл) и в 1,01 раза при относительном уменьшении уровня ЦП на одну единицу (мг/л).
Выводы. Окислительный стресс играет важную роль в патогенезе В-ХЛЛ и характеризуется избыточным накоплением маркеров ОС (ДК, МДА и нитрита) и антиоксидантного маркера ЦП, а также снижением активности ГП. Увеличение содержания ДК и недостаточно высокий уровень ЦП были независимо связаны с повышенной вероятностью наличия скрытой мутации у пациентов с В-ХЛЛ. Профилактика последствий ОС может улучшить результаты лечения пациентов с В-ХЛЛ и оптимизировать прогноз заболевания.
Д. К. Жоголев, А. С. Поляков, С. Н. Колюбаева, Ю. В. Никитин, А. Д. Золотарёв, Я. А. Носков
Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего образования «Военно-медицинская академия имени С. М. Кирова», Министерства обороны Российской Федерации, г. Санкт-Петербург
ИССЛЕДОВАНИЕ ХИМИОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ БЛАСТНЫХ КЛЕТОК ПРИ ОСТРОМ МИЕЛОИДНОМ ЛЕЙКОЗЕ В ОПЫТАХ IN VITRO
Введение. Исследования in vitro играют все более значительную роль в онкогемато-логии, позволяя в настоящее время изучать генетические характеристики и устойчивость опухолевых клеток к химиотерапевтическим препаратам. В работе представлен опыт культивирования бластных клеток, полученных от больного с полирезистентным вторичным острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) и апробация двух адаптированных методик оценки воздействия на них различных противоопухолевых препаратов.
Цель. Освоение методики культивирования бластных клеток при ОМЛ, апробация и оценка возможностей применения клеточного сортин-га и микроядерного теста (МЯТ) для оценки генотоксичности различных химиопрепаратов in vitro.
Материалы и методы. Бластные клетки получены из периферической крови пациента с вторичным полирезистентным к тера-
пии ОМЛ. В дни забора образцов абсолютное содержание бластов в крови составляло от 28,0 х 10*9/л до 52,0 х 10*9/л. Всего проведено 3 эксперимента с исследованием генотоксичности нескольких водорастворимых противоопухолевых препаратов in vitro. В эксперименте № 1: при помощи клеточного сортера MoFlo Astrios EQ (Beckman Coulter) отсортировали по 520650 CD34+ клеток в 2 пробирки, которые культивировали (37 °C, 5 % CO2) в течение 4 суток в 5 мл полной питательной среды (ППС), содержащей: 80 % RPMI-1640, 10 % эмбриональной телячьей сыворотки, 10 % оригинальной сыворотки больного, 10 мкл ФГА и 100 ЕД/мл пенициллина. В одну из проб после первых суток добавили децита-бин в концентрации 1160 нг на 1 мл среды. Для оценки его генотоксичности на том же сортере по окончании культивирования определили количество клеток, сохранивших жизнеспособность, путём оценки результатов маркировки
