CC BY
12
52
материалы конференции «отечественные противоопухолевые препараты»
противоопухолевым действием: фикоцианин и комплекс миксоксантофилла и осцилоксантина.
Л.Н. Николаевич1, И.В. Руденкова1, В.А. Гайдукевич2, В.А. Книжников2
оценка цитотоксических эффектов
ЦИКЛОДИПЕПТИДА PRO-PHE
на экспериментальной модели клоногенных опухолевых клеток in vitro
Институт физиологии НАН Беларуси, Минск, Беларусь; 2ИФОХНАН Беларуси, Минск, Беларусь
Введение. Клоногенные клетки опухоли обладают неограниченной пролиферативной способностью и высокой степенью выживаемости, за счет чего возможно повторное развитие опухоли. Поэтому исследование ответа клоногенных клеток на противоопухолевые препараты является перспективным направлением в поиске новых способов лечения онкологических заболеваний.
Цель исследования. Изучение цитотоксического действия циклодипептида Pro—Phe на клоногенные опухолевые клетки in vitro.
Материалы и методы. Исследования выполнены на клеточных линиях С6 (глиома крысы), HeLa (карцинома шейки матки человека), К562 (хроническая миелоидная лейкемия) и диплоидных клетках FL (амнион человека). Изучены цитотоксические эффекты цикло Pro—Phe в дозах 5, 50, 500, 1000, 5000 мкг методом МТТ-теста. Ингибиру-ющую активность субстанции циклодипептида Pro—Phe проверяли на экспериментальной модели опухолевых и диплоидных клеток перевиваемых линий С6 и FL в дозах 50, 500, 5000 мкг/мл, а также на клоногенных опухолевых клетках С6к/к и FLк/к в аналогичных дозах. Цикло-Pro-Phe вводили в монослойную культуру клеток на 24 ч. После инкубации подсчитывали количество клеток в камере Го-ряева. Ингибирующую активность рассчитывали по формуле: ИА = (К - О) / К х 100 %.
Результаты. Результаты исследований показали, что циклодипептид Pro-Phe характеризуется низкой степенью цитотоксичности. Индекс токсичности составляет 20-25 % при дозе 1000 мкг/мл. Обнаружено, что циклоди-пептид Pro-Phe не оказывает цитотоксического действия на диплоидные клетки амниона человека линии FL. На модели клоногенных клеток линии С6к/к показано, что ци-тотоксический эффект циклодипептида Pro-Phe наиболее выражен в дозе 1000 мкг/мл. Наибольшую чувствительность проявили клоногенные клетки С6к/к. Выживаемость клоногенных и неклоногенных клеток линии С6 составила 40 и 50 % соответственно.
Заключение. Результаты исследований показали, что по мере увеличения дозы цикло-Pro-Phe наблюдается подавление пролиферации опухолевых клоногенных клеток и увеличение частоты их гибели по механизму апоптоза. Модель клоногенных клеток может использоваться в качестве тест-системы in vitro для оценки цитотоксических, ингибирующих, антипролиферативных и апоптотических эффектов циклодипептидов на опухолевые клоногенные клетки.
С.И. Никулицкий, Е.Г. Тырсина ВОЗМОЖНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ VEGF-R1 В КАЧЕСТВЕ МИШЕНИ ДЛЯ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ТЕРАПИИ
ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия
Введение. Преимуществом таргетной противоопухолевой терапии является избирательность токсического действия на злокачественные клетки с минимальным повреждением нормальных клеток, что предопределяет поиск новых различий между ними. Одним из кандидатов на эту роль может служить рецептор фактора роста эндотелия сосудов I типа (VEGF-R1), который присутствует в большинстве опухолевых клеток, но не представлен в нормальных. Причем, как выяснилось, активация VEGF-R1 усиливает такие проявления злокачественности, как инвазия, миграция, метастазирование и выживаемость опухолевых клеток.
Цель исследования. В свете вышеизложенного мы решили проверить следующие положения: действительно ли экспрессия VEGF-R1 характерна исключительно для опухолевых клеток; присутствует ли рецептор в клеточном ядре, что свидетельствовало бы о его функциональной активности; и, наконец, имеется ли связь между количеством VEGF-R1 и степенью агрессивности неопластических клеток. Для ответа на эти вопросы мы оценили содержание рецептора в нормальных и опухолевых клетках человека, а также при помощи разработанного нами подхода к им-мунофлуоресцентной детекции белков в нативных клеточных ядрах на проточном цитометре определили уровень VEGF-R1 в ядрах клеток, различающихся по степени злокачественности.
Материалы и методы. Исследования проводили на 2 линиях опухолевых клеток — А431 (карцинома вульвы) и BRO (высокозлокачественная меланома). Контролем служила линия нормальных постнатальных фибробластов человека (ПФЧ). Локализацию и оценку содержания рецептора определяли при помощи иммуноцитохимического окрашивания (ИЦХ) и проточной цитофлуориметрии ^С). В ходе FC уровень VEGF-R1 в клетках и ядрах оценивали по величине ДMFI — разности средней интенсивности флуоресценции между опытными и контрольными образцами.
Результаты. По данным иммуноцитохимического исследования VEGF-R1 визуализировался внутриклеточно и в опухолевых, и в нормальных клетках, однако интенсивность окраски в обеих злокачественных линиях была выше. Для выявления рецептора в ядре препараты перед фиксацией обрабатывали 0,05 % раствором тритона Х-100, что значительно уменьшало долю цитозольного VEGF-R1. В результате было выявлено наличие рецептора в ядрах исключительно опухолевых клеток. Результаты ИЦХ были подтверждены и дополнены количественными данными FC. Эксперименты с интактными клетками показали практически полное отсутствие VEGF-R1 на цитоплазматиче-ской мембране как в опухолевых клетках А431 (ДМИ = 21,4) и BRO (ДMFI = 14,4), так и в нормальных ПФЧ (ДМИ = 15,8). В пермеабилизованных клетках рецептор регистрировали во всех 3 линиях, но в нормальных внутриклеточное
Спецвыпуск / том 17 / 2018
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
