CC BY
10
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVIII, № 2, 2022
М.Л. Морозова, Н.В. Исаева, А.С. Лучинин
ОЦЕНКА СТЕПЕНИ ГЕМОДИЛЮЦИИ АСПИРАТОВ КОСТНОГО МОЗГА ПРИ АНАЛИЗЕ МИНИМАЛЬНОЙ ОСТАТОЧНОЙ БОЛЕЗНИ У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», Киров
Введение. В онкогематологической практике костный мозг является основным объектом лабораторных исследований при оценке минимальной остаточной болезни (МОБ). Определение МОБ имеет ключевое значение для выбора лечебной тактики и оценки прогноза при всех заболеваниях системы крови. Для установления МОБ используют метод проточной цитометрии, который обладает высокой специфичностью и чувствительностью. Проблема гемодилюции (разбавление образца костного мозга периферической кровью) принципиальна при оценке МОБ, так как искажает представление о реальном количестве резидуальных опухолевых клеток в аспирате.
Цель. Оценить влияние степени гемодилюции аспиратов костного мозга на точность анализа МОБ у больных множественной миеломой.
Материалы и методы. Материалом служили образцы костного мозга 41 пациента, наблюдавшегося в ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России в 2022 г. с диагнозом множественная миелома, которые окрашивали флуорохром-меченными моноклональными антителами CD16-FITC, CD13-PE-Cy7, CD45-Per-CP. Исследования проводили на проточном цитофлуориметре BD FACSCantoTM II (Bd Biosciences, США) с использованием программного обеспечения "BD FACS Diva" версии 7.0 (BD Biosciences, США). Степень гемодилюции костного мозга оценивали с помощью различий профилей экспрессии CD16 на мембранах клеток из региона гранулоцитов, в том числе: зрелых клеток крови с высокой экспрессией CD16 (CD16high) и созревающих элементов костного мозга со слабой экспрессией CD16 (CD16dim). Коэффициент разбавления костного мозга периферической кровью рассчитывали с учетом интенсивности экспресгаи CD16dim по формуле: 80% / Процент клеток CD16dim.. Полученный коэффициент умножали на процент МОБ, тем самым корректируя содержание остаточных опухолевых плазматических клеток. Статистическую значимость показателей оценивали при помощи непара-
метрического критерия Мак-Немара для парных сравнений с поправкой Эдвардса при р<0,05.
Результаты. Полностью непригодными были признаны 8 (19,5%) образцов костного мозга с крайне высокой степенью гемодилюции из 41, а именно, с содержанием клеток с характеристикой CD16high в регионе гранулоцитов более 90%. Причиной гемодилюции является использование первой порции аспирата для оценки морфологии клеток при приготовлении мазков. Для иммунофенотипирования в пробирки забирается следующая порция аспирата. В 33 (80,5%) образцах костного мозга из 41 относительное содержание клеток с CD16high варьировало от 23,7 до 90%, данные образцы пригодны для дальнейшего анализа. Только в 1 образце (2,4%) относительное содержание клеток с характеристикой cDl6high не превышало 40%, что согласно критериям М^. Loken, 2008, позволило считать образец не разбавленным периферической кровью. В 32 аспиратах костного мозга (78,0%) относительное содержание клеток с характеристикой CD16Ыgh составило более 40%, полученные значения МОБ были пересчитаны с коэффициентом гемодилюции от 1,38 до 7,14, что позволило сделать корректное заключение о МОБ-статусе с учетом погрешности анализа за счет разведения периферической кровью. Без введения поправки на гемодилюцию МОБ-негативный статус (на уровне менее 10-4) мог быть присвоен 14 образцам (43,8%) из 32. После применения коэффициента гемодилюции МОБ-негативный статус присвоен 5 (15,6 %) аспиратам (р=0,013) за счет перевода 9 (28,1%) образцов с необоснованно заниженными результатами в категорию МОБ-позитивных.
Выводы. Внедрение метода оценки степени гемодилюции аспиратов костного мозга при исследовании МОБ позволяет избежать ложно-негативных результатов, что повышает точность и корректность данных.
Е.В. Мотыко, А.Н. Кириенко, Д.В. Кустова, М.П. Бакай, О.С. Успенская, Е.В. Карягина, В.А. Шуваев,
С.В. Волошин, С.В. Сидоркевич, И.С. Мартынкевич
АНАЛИЗ ГЕНОМНОЙ ГЕТЕРОГЕННОСТИ CBF-ОМЛ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА ВЫСОКОПРОИЗВОДИТЕЛЬНОГО СЕКВЕНИРОВАНИЯ
ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург
ГБУЗ «Ленинградская областная клиническая больница», Санкт-Петербург ГБУЗ «Городская больница № 15», Санкт-Петербург
Введение. Подгруппу острых миелоидных лейкозов (ОМЛ) с хромосомными перестройками ^8;21) и ^(16)Д(16;16) обозначают как CBF-ОМл. Несмотря на то, что CBF-лейкозы в различных классификациях относят к группе с благоприятным прогнозом, у 30-50% пациентов наблюдается рецидив заболевания. Группа достаточно гетерогенна в отношении длительности полных ремиссий (ПР), что может быть обусловлено наличием дополнительных факторов риска - пожилой возраст, гиперлейкоцитоз, изменения в кариотипе, и наличие широкого спектра мутаций генов, которые находят у более 90% пациентов с CBF-ОМЛ.
Цель. Охарактеризовать мутационный профиль пациентов с CBF-ОМЛ используя метод высокопроизводительного секве-нирования.
Материалы и методы. Проведено исследование больных,
наблюдавшихся в гематологических клиниках с 2015-2021гг. Всего 28 больных CBF-ОМЛ: 13 больных с inv(16) и 15 больных с t(8;21), все больные с de novo ОМЛ, 18 (64,2%) мужчин и 10 (35,8%) женщин, медиана возраста составила 39 лет (18-74). Для всех пациентов секвенирование выполнялось с использованием панели из 121 гена на секвенаторе Miseq (Illumina). При анализе полученных данных применялся 3% порог частоты встречаемости аллеля (VAF).
Результаты. Обнаружены 74 мутации в 39 из 121 генов-мишеней: у больных ОМЛ с t(8;21) - 48 мутаций, с inv(16) - 26 мутаций. В 20 генах мутации были найдены повторно (>2х раз). У 93% больных с t(8;21) и 92% пациентов с inv(16) выявили по крайней мере 1 мутацию. В среднем, у больных ОМЛ с t(8;21) находили значительно больше мутаций, чем у пациентов ОМЛ с inv(16) - 3,2 против 2 мутаций, соответственно (р=0,001). У
