CC BY
9
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XVIII, № 2, 2022
М.Л. Морозова, Н.В. Исаева, А.С. Лучинин
ОЦЕНКА СТЕПЕНИ ГЕМОДИЛЮЦИИ АСПИРАТОВ КОСТНОГО МОЗГА ПРИ АНАЛИЗЕ МИНИМАЛЬНОЙ ОСТАТОЧНОЙ БОЛЕЗНИ У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», Киров
Введение. В онкогематологической практике костный мозг является основным объектом лабораторных исследований при оценке минимальной остаточной болезни (МОБ). Определение МОБ имеет ключевое значение для выбора лечебной тактики и оценки прогноза при всех заболеваниях системы крови. Для установления МОБ используют метод проточной цитометрии, который обладает высокой специфичностью и чувствительностью. Проблема гемодилюции (разбавление образца костного мозга периферической кровью) принципиальна при оценке МОБ, так как искажает представление о реальном количестве резидуальных опухолевых клеток в аспирате.
Цель. Оценить влияние степени гемодилюции аспиратов костного мозга на точность анализа МОБ у больных множественной миеломой.
Материалы и методы. Материалом служили образцы костного мозга 41 пациента, наблюдавшегося в ФГБУН КНИИГиПК ФМБА России в 2022 г. с диагнозом множественная миелома, которые окрашивали флуорохром-меченными моноклональными антителами CD16-FITC, CD13-PE-Cy7, CD45-Per-CP. Исследования проводили на проточном цитофлуориметре BD FACSCantoTM II (Bd Biosciences, США) с использованием программного обеспечения "BD FACS Diva" версии 7.0 (BD Biosciences, США). Степень гемодилюции костного мозга оценивали с помощью различий профилей экспрессии CD16 на мембранах клеток из региона гранулоцитов, в том числе: зрелых клеток крови с высокой экспрессией CD16 (CD16high) и созревающих элементов костного мозга со слабой экспрессией CD16 (CD16dim). Коэффициент разбавления костного мозга периферической кровью рассчитывали с учетом интенсивности экспресгаи CD16dim по формуле: 80% / Процент клеток CD16dim.. Полученный коэффициент умножали на процент МОБ, тем самым корректируя содержание остаточных опухолевых плазматических клеток. Статистическую значимость показателей оценивали при помощи непара-
метрического критерия Мак-Немара для парных сравнений с поправкой Эдвардса при р<0,05.
Результаты. Полностью непригодными были признаны 8 (19,5%) образцов костного мозга с крайне высокой степенью гемодилюции из 41, а именно, с содержанием клеток с характеристикой CD16high в регионе гранулоцитов более 90%. Причиной гемодилюции является использование первой порции аспирата для оценки морфологии клеток при приготовлении мазков. Для иммунофенотипирования в пробирки забирается следующая порция аспирата. В 33 (80,5%) образцах костного мозга из 41 относительное содержание клеток с CD16high варьировало от 23,7 до 90%, данные образцы пригодны для дальнейшего анализа. Только в 1 образце (2,4%) относительное содержание клеток с характеристикой cDl6high не превышало 40%, что согласно критериям М^. Loken, 2008, позволило считать образец не разбавленным периферической кровью. В 32 аспиратах костного мозга (78,0%) относительное содержание клеток с характеристикой CD16Ыgh составило более 40%, полученные значения МОБ были пересчитаны с коэффициентом гемодилюции от 1,38 до 7,14, что позволило сделать корректное заключение о МОБ-статусе с учетом погрешности анализа за счет разведения периферической кровью. Без введения поправки на гемодилюцию МОБ-негативный статус (на уровне менее 10-4) мог быть присвоен 14 образцам (43,8%) из 32. После применения коэффициента гемодилюции МОБ-негативный статус присвоен 5 (15,6 %) аспиратам (р=0,013) за счет перевода 9 (28,1%) образцов с необоснованно заниженными результатами в категорию МОБ-позитивных.
Выводы. Внедрение метода оценки степени гемодилюции аспиратов костного мозга при исследовании МОБ позволяет избежать ложно-негативных результатов, что повышает точность и корректность данных.
Е.В. Мотыко, А.Н. Кириенко, Д.В. Кустова, М.П. Бакай, О.С. Успенская, Е.В. Карягина, В.А. Шуваев,
С.В. Волошин, С.В. Сидоркевич, И.С. Мартынкевич
АНАЛИЗ ГЕНОМНОЙ ГЕТЕРОГЕННОСТИ CBF-ОМЛ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА ВЫСОКОПРОИЗВОДИТЕЛЬНОГО СЕКВЕНИРОВАНИЯ
ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии Федерального медико-биологического агентства», Санкт-Петербург
ГБУЗ «Ленинградская областная клиническая больница», Санкт-Петербург ГБУЗ «Городская больница № 15», Санкт-Петербург
Введение. Подгруппу острых миелоидных лейкозов (ОМЛ) с хромосомными перестройками ^8;21) и ^(16)Д(16;16) обозначают как CBF-ОМл. Несмотря на то, что CBF-лейкозы в различных классификациях относят к группе с благоприятным прогнозом, у 30-50% пациентов наблюдается рецидив заболевания. Группа достаточно гетерогенна в отношении длительности полных ремиссий (ПР), что может быть обусловлено наличием дополнительных факторов риска - пожилой возраст, гиперлейкоцитоз, изменения в кариотипе, и наличие широкого спектра мутаций генов, которые находят у более 90% пациентов с CBF-ОМЛ.
Цель. Охарактеризовать мутационный профиль пациентов с CBF-ОМЛ используя метод высокопроизводительного секве-нирования.
Материалы и методы. Проведено исследование больных,
наблюдавшихся в гематологических клиниках с 2015-2021гг. Всего 28 больных CBF-ОМЛ: 13 больных с inv(16) и 15 больных с t(8;21), все больные с de novo ОМЛ, 18 (64,2%) мужчин и 10 (35,8%) женщин, медиана возраста составила 39 лет (18-74). Для всех пациентов секвенирование выполнялось с использованием панели из 121 гена на секвенаторе Miseq (Illumina). При анализе полученных данных применялся 3% порог частоты встречаемости аллеля (VAF).
Результаты. Обнаружены 74 мутации в 39 из 121 генов-мишеней: у больных ОМЛ с t(8;21) - 48 мутаций, с inv(16) - 26 мутаций. В 20 генах мутации были найдены повторно (>2х раз). У 93% больных с t(8;21) и 92% пациентов с inv(16) выявили по крайней мере 1 мутацию. В среднем, у больных ОМЛ с t(8;21) находили значительно больше мутаций, чем у пациентов ОМЛ с inv(16) - 3,2 против 2 мутаций, соответственно (р=0,001). У
ВСЕРОССИЙСКАЯ НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ КОНФЕРЕНЦИЯ С МЕЖДУНАРОДНЫМ УЧАСТИЕМ «АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ», ПОСВЯЩЕННАЯ 90-ЛЕТИЮ РОССИЙСКОГО НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОГО ИНСТИТУТА ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ
Санкт-Петербург 30 июня - 1 июля 2022 г.
больных ОМЛ с t(8;21) мутированы 31 различных гена, с inv(16) - 17 генов содержали мутации. Из 39 поврежденных генов, мутации в 9 генах были общими в обеих подгруппах CBF-ОМЛ, в то время как пациенты с t(8;21) имели значительно более высокую долю частных мутаций (70% (22) против 47% (8), соответственно; р=0,012). Что касается типа обнаруженных мутаций - это точечные мутации и инсерции/делеции (в генах KIT, ASXL1, EZH2, CBL, KMT2C, MYC, FAT1, RAD21, MGA). Мутации в RTK/RAS сигнальных путях были наиболее распространенными событиями при двух типах CBF-ОМЛ, с наибольшей частотой встречаемости в NRAS+KRAS (18%; t(8;21) - 20%; inv(16) - 15%), KIT (21%; t(8;21) - 20%; inv(16) - 23%) и FLT3 (7%; t(8;21) - 0%; inv(16) - 15%). Охарактеризовали молекулярно-генетический профиль больных ОМЛ с t(8;21): найдены мутации в генах эпигенетической регуляции - ASXL1 (20%) и EZH2 (7%), метилирования ДНК - DNMT3A (7%), комплекса когезии - RAD21 (13%) и SMC3 (7%), MGA (20%), вовлеченный в сигнальный путь MYC, KMT2C (27%), SETBP1 (13%), которые отсутствовали при ОМЛ с inv(16). Молекулярно-генетический профиль больных ОМЛ с inv(16): аберрации генов вовлеченных в модификацию хроматина, были редкими событиями (в гене ASXL1 - 0%), как и мутации относящихся к комплексу когезии, которые отсутствовали
во всех случаях. У одного больного обнаружена мутация в транскрипционном корепрессоре BCORL1. При анализе влияния на прогноз мутаций в генах, активирующих сигнальные пути обнаружена тенденция увеличения риска возникновения рецидива у больных с такими мутациями по сравнению с пациентами без них (p=0,07). У больных с мутациями в гене KIT безрецидивная выживаемость была значимо хуже, чем у больных без мутации (p=0,02).
Выводы. Молекулярно-генетический профиль пациентов с CBF-ОМЛ высоко гетерогенен. Несмотря на принадлежность ОМЛ с t(8;21) и inv(16) к одной группе CBF-ОМЛ, у каждой подгруппы имеются свои характерные биологические и клинические особенности. Активирующие мутации в генах рецепторов тирозинкиназ (KIT, RAS) являются частыми событиями в обеих подгруппах CBF-ОМЛ. Мутации генов, участвующих в активации сигнальных путей и, в частности, в гене KIT, увеличивают риск развития рецидива у больных CBF-ОМЛ. Применение метода высокопроизводительного секвенирования целесообразно для диагностики CBF-ОМЛ из-за возможности проанализировать массивный объем данных и получить обширную характеристику мутационного профиля для каждого больного.
Е. Н. Никитин
ЗНАЧЕНИЕ ГЕПЦИДИНА ПРИ ЖЕЛЕЗОДЕФИЦИТНОЙ АНЕМИИ
ФГБОУ ВО «Ижевская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения России», г. Ижевск
Введение. Продукция гепцидина контролируется железом, но механизмы регуляции во многом остаются противоречивыми.
Цель. Оценка содержания гепцидина в крови больных желе-зодефицитной анемией (ЖДА) и его взаимосвязей с эритропоэ-тином и параметрами обмена железа.
Материалы и методы. Наблюдались 33 больных ЖДА (25 женщин и 8 мужчин) в возрасте 47,74±2,23 года. Показатели периферической крови исследовались с помощью гематологического анализатора. Концентрации в сыворотке крови гепцидина, ферритина (СФ), эритропоэтина (ЭПО), В12 исследовались иммуноферментным методом с использованием стандартных тест-систем, соответственно, DRG Hepcidin-25 (bioactive) ELISA (Германия), Ferritin EIA (VEDA.LAB., Франция), Biomerica EPO ELISA (США). Определение концентрации сывороточного железа (СЖ), общей железосвязывающей способности сыворотки крови (ОЖСС) с вычислением коэффициента насыщения транс-феррина железом (КНТ) проводилось наборами реактивов IRON liquicolor, TIBC (Human, Germany). Статистическую обработку результатов исследования проводили с использованием программы Statistica 6.1.
Результаты. У больных до лечения наблюдалось снижение в крови уровня гемоглобина (HGB), СЖ, КНТ, СФ и повышение ОЖСС. Содержание гепцидина также было снижено (0,80±0,15 нг/мл при норме 1,90±0,45 нг/мл). Выявлено повышение концентрации ЭПО до 78,24±7,47 МЕ/л с колебаниями в пределах от 11,68 до 186,5 МЕ/л (при норме 0,57-10,11 МЕ/л, р<0,001). Между HGB в крови и ЭПО прослеживалась тесная обратная связь (р=-0,80, р<0,002), что свидетельствует о развитии гемической гипоксии в организме и об адекватном степени анемии повышении продукции ЭПО. В то же время обнаруживалась тесная
обратная взаимосвязь гепцидина с содержанием ЭПО (р=-0,96, р=0,001), указывающая на регулирующую роль анемической гипоксии и эритропоэтической активности костного мозга над синтезом гепцидина. Повышенные уровни ЭПО стимулировали эритропоэз, повышая потребности последнего в железе и гемопоэтических витаминах. На это указывали возрастание транспортного потенциала циркулирующей крови (ОЖСС) по переносу железа трансферрином к эритроидным клеткам костного мозга для синтеза НС1В и мобилизация витамина В12 для обеспечения в них синтеза ДНК. Содержание этого витамина в крови было снижено и составило 148,2±20,72 пмоль/л при норме 329,56±48,47 пмоль/л, р<0,05. Между гепцидином и СФ выявлена положительная зависимость (р=0,626, р=0,05, а между гепцидином и ОЖСС - отрицательная (р=-0,545, р<0,047), объясняющие влияние запасов железа и повышенных потребностей эритропоэза в железе на продукцию гепцидина в печени. В результате лечения больных ЖДА препаратами железа восстановились показатели гемограммы и феррокинетики, исчезли клинические проявления анемии (гемической гипоксии). Это сопровождалось нормализацией уровней гепцидина и ЭПО в крови.
Выводы: 1. Железодефицитная анемия приводит к уменьшению продукции гепцидина для обеспечения повышенных потребностей эритрона в железе. 2. Продукция гепцидина в печени контролируется запасами железа в организме, анемической гипоксией и повышенной эритропоэтической активностью костного мозга. 3. Курсовое лечение больных ЖДА препаратами железа сопровождается исчезновением клинических симптомов анемии, восстановлением показателей красной крови и обмена железа параллельно с нормализацией продукции эритро-поэтина и гепцидина.
